常用生物化学检验技术讲解
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散光光谱
比浊法
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
分光光度技术的基本原理
透光度与吸光度
T=I/IO T%=T×100% A=-lgT=-lg I/IO =lgIO/I
常用生物化学检验技术讲解
Lambert-Beer定律
4、根据电泳系统是否均一分为 连续电泳 不连续电泳
常用生物化学检验技术讲解
影响电泳的因素
1、分子的形状和性质 2、电场强度
电场强度大，速度快，产热多，变性； 电场强度小，速度慢，产热少，区带模糊
常用生物化学检验技术讲解
3、缓冲液
❖组成成分 pH
pH与pI比较，4.5-9.0,正极pH 负极
❖离子强度
常用生物化学检验技术讲解
分光光度技术的定量方法
标准曲线法 条件变应重新绘制 标准品纯且准 待测液吸光度超过线性范围，应稀释再测 待测液与标准曲线条件相同
比较法 CU=(AU×CS)/ AS
常用生物化学检验技术讲解
火焰光度法(原子发射光谱)
❖原理 标本原子（基态）→激发态→释放光能→不 同原子有不同特征光谱线→浓度与发射光强 度成正比
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
电泳区带的测定
• 区带染色 溴酚蓝、丽春红 （蛋白质）
PMS-NBT系统 （同工酶）
苏丹红、苏丹黑 （血浆脂蛋白）
溴化乙啶
（核酸）
常用生物化学检验技术讲解
❖光密度扫描法 ❖洗脱比色法
区带定量
常用生物化学检验技术讲解
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
常用生物化学检验技术讲解
❖钠的特征谱线为589nm
❖钾的特征谱线为767nm
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
电泳
溶液中带电粒子在直流电场中 向电性相反电极移动的现象称为 电泳。
常用生物化学检验技术讲解
电泳技术
利用带电粒子在电场作用下 定向移动的特性，对混合物组分 进行分离、纯化和测定的技术称 为电泳技术。
5.9×10-5
5.1×10-5 4.1×10-5 2.8×10-5
球蛋白 6.85~7.30 1.0×10-5
常用生物化学检验技术讲解
电泳迁移率是带电粒子在单位电 场强度作用下的移动速度。 即反映带电粒子在每厘米降为1 伏特（V/cm）的电场强度下每秒 钟内移动的厘米数（cm/s）。
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
二、电泳槽 盖 电极及电极室 支架
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
常用的区带电泳
滤纸电泳（PE已淘汰） 醋酸纤维薄膜电泳（CAE） 琼脂糖凝胶电泳（AGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术
※光谱分析技术 ※电化学技术 ※电泳技术 ※层析技术
※自动生化分析技术
常用生物化学检验技术讲解
光谱分析
概念：利用物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特点，对物质进行定性或定量的分析方法 常用生物化学检验技术讲解
光谱分析技术
发射光谱
火焰光度法、原子发射光谱法、荧光光谱法
吸收光谱
紫外、可见光、红外光及原子吸收分光光度法
显示器
❖检流计、微安表、记录器 透光度和吸光度
❖数字显示器 透光度和吸光度和浓度
常用生物化学检验技术讲解
操作方法
开关——打开比色池盖子——20分钟预热 选定预定波长 空白、校准或待测液放入比色池，空白置于光路
中 开光于T位，打开比色池盖子，粗、细调T为0.0关
上比色盖子，调T为100.0 开关于A，用消光调零 重复步骤4和5 将校准或待测液光路中测A
离子强度越大，缓冲容量越大，pH越稳定，电 泳速度越慢，标本扩散，产热多，蒸发快； 0.05-0.1mol/L
常用生物化学检验技术讲解
5、蒸发作用
4、支持物
❖吸附作用 ❖电渗作用
6、样品
常用生物化学检验技术讲解
电泳仪
由直流电源和电泳槽两部分组成 。 一、直流电源
一般由交流电经过整流获得 恒压电源 恒流电源 恒功电源
常用生物化学检验技术讲解
原理
H C NH3+ R
COOH
OH-
H+
H C NH3+ R
COO-
pH<pI pH = pI
H+
OH-
H C NH2 R
COO-
常用生物化学检验技术讲解
pH>pI
人血清蛋白的等电点和电泳迁移率
蛋白质 等电点 电泳迁移率cm2.s-1.v-1
白蛋白 4.84
球蛋白 5.06 球蛋白 5.06 球蛋白 5.12
和介质粘度系数（η）成反比，即 V=QE/6πrη 这样
µ=V/E=Q/ 6πrη
常用生物化学检验技术讲解
电泳的分类
1、根据被分离的样品多少分为 分析电泳 制备电泳
2、根据电泳时电压的高低分为 高压电泳 （50 V/cm以上） 常压电泳 （50 V/cm以下）
常用生物化学检验技术讲解
3、根据电泳媒介的不同分为 自由电泳 （溶液） 区带电泳 （支持介质）
❖可见光分光光度计——钨灯 ❖紫外光光度计——氢灯
常用生物化学检验技术讲解
单色器
将光源的复合光分散为单色光的装置 滤光片 棱镜 光栅
常用生物化学检验技术讲解
❖玻璃或石英
比色杯
❖光径为0.1~10cm,一般为1cm
❖校准
常用生物化学检验技术讲解
检测器
❖光信号转为电信号 ❖光电管及光电倍增管
常用生物化学检验技术讲解
A=KLC 适用用于可见光、紫外光、红外光和 均匀非散射的液体
ε（摩尔吸光系数）： 当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时 波长下的吸光度值
常用生物化学检验技术讲解
光源 单色器 比色杯 检测器 显示器
分光光度计的基本结构
常用生物化学检验技术讲解
光源
❖光源应在一定光谱区域内发射出连续光谱， 有足够强度和稳定性
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
µ=V/E=(1/t)/E=1/tE= cm2/V.s
❖µ为电泳迁移率， ❖V为粒子移动的速度（cm/s），即1/t ❖E为电场强度（V/cm） ❖T为时间（秒） ❖1为移动的距离（cm） ❖µ为蛋白质电泳的特征常数 ❖µ的单位为cm·s·v
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根据Stoke定律
电泳速度（V）与其电量（Q）和 电场强度成正比，而与粒子的半径（r）
比浊法
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
分光光度技术的基本原理
透光度与吸光度
T=I/IO T%=T×100% A=-lgT=-lg I/IO =lgIO/I
常用生物化学检验技术讲解
Lambert-Beer定律
4、根据电泳系统是否均一分为 连续电泳 不连续电泳
常用生物化学检验技术讲解
影响电泳的因素
1、分子的形状和性质 2、电场强度
电场强度大，速度快，产热多，变性； 电场强度小，速度慢，产热少，区带模糊
常用生物化学检验技术讲解
3、缓冲液
❖组成成分 pH
pH与pI比较，4.5-9.0,正极pH 负极
❖离子强度
常用生物化学检验技术讲解
分光光度技术的定量方法
标准曲线法 条件变应重新绘制 标准品纯且准 待测液吸光度超过线性范围，应稀释再测 待测液与标准曲线条件相同
比较法 CU=(AU×CS)/ AS
常用生物化学检验技术讲解
火焰光度法(原子发射光谱)
❖原理 标本原子（基态）→激发态→释放光能→不 同原子有不同特征光谱线→浓度与发射光强 度成正比
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
电泳区带的测定
• 区带染色 溴酚蓝、丽春红 （蛋白质）
PMS-NBT系统 （同工酶）
苏丹红、苏丹黑 （血浆脂蛋白）
溴化乙啶
（核酸）
常用生物化学检验技术讲解
❖光密度扫描法 ❖洗脱比色法
区带定量
常用生物化学检验技术讲解
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
常用生物化学检验技术讲解
❖钠的特征谱线为589nm
❖钾的特征谱线为767nm
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
电泳
溶液中带电粒子在直流电场中 向电性相反电极移动的现象称为 电泳。
常用生物化学检验技术讲解
电泳技术
利用带电粒子在电场作用下 定向移动的特性，对混合物组分 进行分离、纯化和测定的技术称 为电泳技术。
5.9×10-5
5.1×10-5 4.1×10-5 2.8×10-5
球蛋白 6.85~7.30 1.0×10-5
常用生物化学检验技术讲解
电泳迁移率是带电粒子在单位电 场强度作用下的移动速度。 即反映带电粒子在每厘米降为1 伏特（V/cm）的电场强度下每秒 钟内移动的厘米数（cm/s）。
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
二、电泳槽 盖 电极及电极室 支架
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
常用的区带电泳
滤纸电泳（PE已淘汰） 醋酸纤维薄膜电泳（CAE） 琼脂糖凝胶电泳（AGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术
※光谱分析技术 ※电化学技术 ※电泳技术 ※层析技术
※自动生化分析技术
常用生物化学检验技术讲解
光谱分析
概念：利用物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特点，对物质进行定性或定量的分析方法 常用生物化学检验技术讲解
光谱分析技术
发射光谱
火焰光度法、原子发射光谱法、荧光光谱法
吸收光谱
紫外、可见光、红外光及原子吸收分光光度法
显示器
❖检流计、微安表、记录器 透光度和吸光度
❖数字显示器 透光度和吸光度和浓度
常用生物化学检验技术讲解
操作方法
开关——打开比色池盖子——20分钟预热 选定预定波长 空白、校准或待测液放入比色池，空白置于光路
中 开光于T位，打开比色池盖子，粗、细调T为0.0关
上比色盖子，调T为100.0 开关于A，用消光调零 重复步骤4和5 将校准或待测液光路中测A
离子强度越大，缓冲容量越大，pH越稳定，电 泳速度越慢，标本扩散，产热多，蒸发快； 0.05-0.1mol/L
常用生物化学检验技术讲解
5、蒸发作用
4、支持物
❖吸附作用 ❖电渗作用
6、样品
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电泳仪
由直流电源和电泳槽两部分组成 。 一、直流电源
一般由交流电经过整流获得 恒压电源 恒流电源 恒功电源
常用生物化学检验技术讲解
原理
H C NH3+ R
COOH
OH-
H+
H C NH3+ R
COO-
pH<pI pH = pI
H+
OH-
H C NH2 R
COO-
常用生物化学检验技术讲解
pH>pI
人血清蛋白的等电点和电泳迁移率
蛋白质 等电点 电泳迁移率cm2.s-1.v-1
白蛋白 4.84
球蛋白 5.06 球蛋白 5.06 球蛋白 5.12
和介质粘度系数（η）成反比，即 V=QE/6πrη 这样
µ=V/E=Q/ 6πrη
常用生物化学检验技术讲解
电泳的分类
1、根据被分离的样品多少分为 分析电泳 制备电泳
2、根据电泳时电压的高低分为 高压电泳 （50 V/cm以上） 常压电泳 （50 V/cm以下）
常用生物化学检验技术讲解
3、根据电泳媒介的不同分为 自由电泳 （溶液） 区带电泳 （支持介质）
❖可见光分光光度计——钨灯 ❖紫外光光度计——氢灯
常用生物化学检验技术讲解
单色器
将光源的复合光分散为单色光的装置 滤光片 棱镜 光栅
常用生物化学检验技术讲解
❖玻璃或石英
比色杯
❖光径为0.1~10cm,一般为1cm
❖校准
常用生物化学检验技术讲解
检测器
❖光信号转为电信号 ❖光电管及光电倍增管
常用生物化学检验技术讲解
A=KLC 适用用于可见光、紫外光、红外光和 均匀非散射的液体
ε（摩尔吸光系数）： 当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时 波长下的吸光度值
常用生物化学检验技术讲解
光源 单色器 比色杯 检测器 显示器
分光光度计的基本结构
常用生物化学检验技术讲解
光源
❖光源应在一定光谱区域内发射出连续光谱， 有足够强度和稳定性
常用生物化学检验技术讲解
常用生物化学检验技术讲解
µ=V/E=(1/t)/E=1/tE= cm2/V.s
❖µ为电泳迁移率， ❖V为粒子移动的速度（cm/s），即1/t ❖E为电场强度（V/cm） ❖T为时间（秒） ❖1为移动的距离（cm） ❖µ为蛋白质电泳的特征常数 ❖µ的单位为cm·s·v
常用生物化学检验技术讲解
根据Stoke定律
电泳速度（V）与其电量（Q）和 电场强度成正比，而与粒子的半径（r）