第五章 食用菌菌种生产

（2）琼脂具有保水的功能，在配制保藏用培养基时，琼脂量可从一般 用量的2.5%加大到2%，以减少水分的蒸发。
（3）菌种培养成熟后，为减少培养基水分的散失，最好将试管棉塞齐
管口处剪平，用矿蜡封严，再包扎一层塑料薄膜，以延长保藏时间。 （4）加大试管内琼脂培养基的用量，使每管不少于12毫升，适当摆长
斜面，以延缓水分的损耗。事实证明，只要培养基不干，菌种也就不会 死亡，也无损菌种的质量。
（三）、菌种检验方法 经过保藏和复壮的菌种，在生产使用前要对菌种质量进行鉴定，然后 应用于生产，常用的检验方法有六种。 1、直接观察：引进的菌种，首先用肉眼观察包装是否合乎要求；棉 塞有无松动，试管、玻璃瓶或塑料有无破损；棉塞和管、瓶或袋中有无 杂菌和病虫侵染；菌丝色泽是否正常，有无发生老化。然后在瓶塞边作 深吸气，闻其是否具该菌种特有的香味。原种和栽培种其菌丝粗壮整 齐，分枝浓密，色洁白呈绒毛状，说明生长旺盛，打开棉塞有芳香气 味。培养料相连结不松散，呈白色，手捏有水印出现，说明菌种质量 好；反之，瓶壁出现水珠，菌丝萎缩与瓶壁脱离，表面菌被变色，培养 料干涸松散，或出现酱红色斑点，原基纽结，则说明菌种老化，以及有 明显杂菌的，则为劣种，应淘汰。 2、显微镜检查：要准备好显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、镊子、 接种针、蒸馏水等物品。在载玻片上放1滴蒸馏水，然后挑取少许菌丝 置水滴上，盖好盖玻片，再置显微镜下观察。也可通过普通染色后进行 镜检。若菌丝透明，呈分枝状，有横隔，锁状联合明显，再加上具有不 同品种固有的特征，则可认为是合格菌种。 3、观测菌丝长速：供测的菌种接入新配制的试管斜面培养基上，置 于最适宜的温、湿度下培养。如果菌丝生长迅速，整齐浓密，健壮有 力，则表明属优良菌种；若菌丝生长缓慢，或长速特快，稀疏无力，参 差不齐，易于衰老，则表明是劣质菌种。 4、耐高温测试：对一般中低温型的菌种，可先将母种试管数支置于 最适温下培养，1周后取出部分试管，置30℃下培养24小时后，再取出 放于适温下培养，经过这样偏高温度的处理，如果菌丝仍健壮、旺盛生 长，则表明该菌种具有较耐高温的优良特性；反之，菌丝生长缓慢，且 出现倒伏发黄、萎缩无力，则可认为是不良菌种。 5、吃料能力鉴定：将菌种接入最佳配方的原种培养料中，置适宜的 温、湿度条件下培养，1周后观察菌丝的生长情况，如果菌种块能很快 萌发，并迅速向四周和培养料中生长伸展，则说明该菌种的吃料能力 强；反之，菌块萌发后生长缓慢，迟迟不向四周和料层深处伸展，则表 明该菌种对培养料的适应能力差。对菌种吃料的测定，不仅用于考核菌
1、斜面低温保藏法：是菌种保藏最常用的方法。即将菌种在适宜的 斜面培养基上培养成熟后，放入4—6℃冰箱中保存，一般3—5个月移植 一次。为使菌丝体在培养基上不干、不死，以延长保藏时间，应做到以 下几点。
（1）要使用营养丰富的天然培养基，使菌丝体发育健壮。因为，生长 健壮的菌种耐受低温保藏，生长不良的菌种(如菌丝体纤弱、稀疏等)处 于长期低温环境下，菌丝体往往会发生倒伏，甚至自溶而失去生活力。
（二）、菌种的退化与复壮 菌种长期保藏或长期施用以及转管次数过多，都会导致生活力降低， 生产上使用的菌种要经常进行复壮，目的在于确保菌种优良性状和纯 度，防止退化。复壮方法有： 1、分离提纯：也就是重新选育菌种。在原有优良菌株中，通过栽培 出菇，然后对不同系的菌株进行对照，挑选性状稳定，没有变异，比其 他品种强的，再次分离，使之继代。 2、活化移植：菌种在保藏期间，通常每隔3—4个月要重新移植1次， 并放在适宜的温度下培养1周左右，待菌丝基本布满斜面后，再用低温 保藏。但应在培养基中添加磷酸二氢钾等盐类，起缓冲作用，使培养基 酸碱度变化不大。
二、原种制作
（一）、材料准备1选取1～2年生、粗10毫米的阔叶树枝条，最好是 进入休眠期的枝条。砍下后，将枝条破成两瓣，然后把它砍成一头尖一
头平、长3～4厘米的短条，晒干或烘干。 2选一根废弃的自行车 内胎，用较为锋利的刀子切成宽4毫米的橡皮圈，供封扎瓶口用。此 外，准备12厘米×12厘米的聚丙烯封口膜和相同规格的报纸，供封口 用。
4、自然基质保藏法 （1）麸皮保藏法：水与新鲜麸皮按1：0.8的比例混合拌匀，装入试
管，占管深的2／5，洗净管壁，加棉塞，121℃灭菌40分钟，接入白灵 菇菌种，24—28℃培养6—8天，菌丝在培养基表面延伸即可。用真空泵 抽干试管内水分，棉塞上滴加无菌凡士林，置干燥器内常温下保存，2 —3年转接1次。
3、更换养分：各种菌类对培养基的营养成分往往有喜新厌旧的现 象，连续使用同一培养基或同一树种木屑培养基，会引起菌种退化。因
此，注意变换不同树种和配方比例的培养基，可增强新的生活力，促进 良种复壮。
4、创造环境：一个品质优良的菌种，如传代次数过多，或受外界环 境的影响，也常造成衰退。因此，在育种过程中，应创造适宜的温度条 件，并注意通风换气，保持室内干燥，使其在适宜的生态条件下，稳定 性状，健康生长。
第五章 食用菌菌种生产
一、母种制作
1、配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。 2、制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层 纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖， 加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞 棉塞要求干 燥、松紧、长度合适 ，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。 3、灭菌 采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。方法是：将装好培养基的菌 种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。当压力表指 针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌， 自动放气后保持30分钟 家用普通高压锅灭菌1．5小时 ，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备 用。 4、菌种分离 主要采用组织分离法。通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一 小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变 异。 1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20 ～30分钟。 2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在 菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。 3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外 缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。菌体小、盖薄、柄空的菌类 如金针菇 ，应快速击 掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。 菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌 类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，丝萌发后即转入新的培养基 上。对子实体较大、质地结实的多孔菌类，应取子实体外缘菌肉组织块。 含水量低的子实体切 取5平方厘米的小块，在酒精灯火焰上烘烤5～10秒钟，使子实体表现微焦，然后用无菌刀切取 菌肉组织一小块，移入培养基上。 5、培养及管理 将放入组织块的菌种瓶竖放在室内架上或平台上，室内温度控制在20～28℃，经过1～2天组 织块萌发。菌丝生长期间注意观察。发现污染及时挑出，经过10天左右菌丝长满瓶，母种制作 成功。
（二）、制作方法 1配方：枝条10公斤、米糠25公斤、石膏100 克、蔗糖100克、磷酸二氢钾10克、硫酸镁10克，料∶水=1∶1.8。 2制作方法：(1)先将量好的水倒入大锅内，再将蔗糖、磷酸二氢钾、 硫酸镁溶解于水中，配制营养液。(2)将枝条倒入大锅内，加热煮沸30～ 40分钟，随机从锅内抽取数根枝条，用刀纵切检查枝条吸收营养液的情 况。如果水吸透至2/3时，便倒入拌匀的石膏、米糠，与枝条混合均
（5）为防止菌种在保藏过程中产生的酸分积累过多，在配制保藏培养 基时还需加入少量缓冲剂，一般加入0.2—0.3%的磷酸氢二钾或磷酸二 氢钾。
（6）保持冰箱内温度的稳定，不要随意或过多地打开冰箱，在条件允 许下，设置一个永久性的保藏冰箱，与经常需取用菌种的冰箱分开使 用。
（7）在菌种培养基干缩到一定程度时，再取出转接试管，一般应每隔 一定时期调换一次培养基配方，以补充营养、水分，消除菌丝体代谢产 物的影响，保持菌种正常的生活能力。
（2）木屑保藏法：按配方(阔叶树木屑78%，麸皮20%，蔗糖1%，石 膏1%，料水比1：0.8)配制培养基，装入试管中，占管深3／4，121℃灭 菌1小时，接入白灵菇菌丝，24—28℃培养，当菌丝长到管深的1／2 时，用接种钩挑去老接种块，石蜡溶封管口，包上塑料薄膜，冰箱中或 常温下保存，1—2年转接1次。启用时，先将菌种活化培养12—24小 时，再挑取木屑内菌丝使用。 （3）麦粒保藏法：取健壮麦粒，淘洗后浸水5小时(水温20℃)，捞出稍 加晾干，装入试管，装量以1／4到1／3为宜，然后灭菌，灭菌后趁热摇 散，放置冷却，向每支试管内接菌丝悬浮液1滴，摇匀，在24—26℃下 培养，当大多数麦粒出现稀疏的菌丝体时，终止培养，保藏在冷凉、干 燥处（麦粒含水量下超过25%）。
菌种保藏方法很多，常用的有低温保藏法、液体石蜡保藏法、麦粒保 藏法、盐水保藏法等多种保藏方法，菇农可根据自身条件加以选择。有 条件的地方，同一菌株最好用几种方法同时保藏。菌种保藏要由专人负 责，做好菌种档案，详细记录菌种来源、移植经过、保藏情况以及在生 产中的使用情况等，定期检查菌种污染情况。对保藏的菌株，在使用前 需先将菌种置于适温下让其活化，然后转管，更新选育，每年要做一次 出菇实验，对表现优良的菌种方可用于生产。下面介绍几种常用的菌种 保藏方法。
5、担孢子滤纸保藏法：在孢子弹射装置内放数张小条黑色滤纸，整 个装置高温灭菌。采收菌幕将开、八九成熟的白灵菇子实体，先将菇体 浸在0.1%升汞液中杀菌1—2分钟，用无菌水冲洗掉升汞溶液，再用无菌 纱布揩干菇体，将菇体插在孢子弹射装置内的支架上，在22℃下培养2 天，孢子即可弹射到滤纸条上，然后将滤纸条卷起，置无菌小试管内塞 上棉塞，用两层以上牛皮纸包好试管口，置无菌干燥器中1—2天，除去 滤纸条上过剩的水分，放在冰箱中保存。使用时，剪取一小段滤纸条， 刮取上面的担孢子，让孢子萌发成菌丝体，通过出菇实验筛选菌种，用 于生产。用此法可保藏3年以上。
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匀。(3)将枝条尖端朝瓶底整整齐齐直立装入500毫升的罐头瓶内，在枝 条面上放些碎的培养料，以填充枝条的空隙。一般一瓶可装110～120 根。(4)用清水洗净瓶身、瓶口及瓶口内壁，报纸在内、薄膜在外放在瓶 口上，套上一根橡皮圈扎好。(5)在15公斤/厘米2蒸汽压下灭菌15小 时。冷却后按常规接种、培养。 （三）、应用 1由于枝条培养基的通透性好，在23～25℃下培养， 菌丝生长迅速，20天左右便长满瓶，培养时间比常规原种缩短10天左 右，从而缩短了菌龄，十分适合于赶制木腐菌菌种。2枝条表面积 大，菌丝除了生长在枝条表面外，还可长入枝条内，携带的菌丝量大， 在转接栽培种时无疑就是增大了接种量。在转接木屑、谷壳类栽培种 时，只需用无菌镊子夹起一根枝条插入培养基中间即可接种操作方便简 单，有利于减轻污染，增加接种成功率。接种后，菌种从上、中、下多 点萌发，菌丝从里向外蔓延，满瓶满袋时间一般可提早5～7天。此外， 一瓶原种可接110～120袋(瓶)的栽培种，接种袋(瓶)数多节约原种，较 为经济。 三、栽培种制作 栽培种制作等同于原种,只是所用的菌种袋不同 四、菌种保藏与复壮 （一）、菌种保藏方法
2、石蜡保藏法(即矿物油保藏法)：在菌种斜面上注入一层无菌的液体 石蜡，使菌丝体与空气隔绝，以降低代谢活性，从而达到保藏的目的。 此法一般可保藏2—3年，但最好1—2年移植一次。加了石蜡的菌种，置 于室温下保藏比放在冰箱中保存更好。液体石蜡在使用前，经高压灭菌 2—3小时后，再在40℃烘箱中烤干水分。液体石蜡的装入量以淹过斜面 尖端1厘米为宜，然后塞上棉塞(最好将棉塞齐管口剪平，用矿蜡密封)， 放于清洁避光、4—15℃常温下保存。在保存期间应定期检查，发现培 养基露出液面，应及时补充灭菌液体石蜡。据试验，在5—28℃之间保 存6年出菇率正常。使用时，可用接种铲直接挑取少许菌丝，接种于另 一斜面培养基上。刚从液体石蜡菌种中移出的菌丝体，常沾有较多的石 蜡，生长较弱，需再转管1次，方能恢复正常。
3、盐水保藏法：这是利用担子菌在液体振荡培养时，形成菌丝体球 形颗粒的特性，用液体培养法培养食用菌菌丝球，然后进行保藏的一种 方法。将液体培养1周左右，挑出菌丝体，加入盛有生理盐水(0.85克食 盐溶于100毫升水中，高温高压灭菌后即成生理盐水)的试管中，封存后 可在常温下存放2年，不影响菌种的存活和形成子实体。其方法是：用 300毫升的三角瓶，装入50—60毫升培养液(培养液采用马铃薯培养基， 但不加琼脂)，接入新鲜菌种1块(无菌操作)，在28℃、180转／分的摇床 中振荡培养5—7天。然后用无菌吸管从摇瓶中取出5—6个菌丝球，置于 生理盐水试管中(普通小试管可装5毫升生理盐水)，用棉花塞紧管口，以 蜡密封，放在4℃以下或常温下保藏。使用时开启管口，挑出菌丝体， 放在斜面培养基上培养。