015-细胞核蛋白提取
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细胞核蛋白分离提取方法
1．将培养皿内的培养基倒去，用预冷的1xPBS洗两遍后，每盘加入
2.5ml1xPBS，放在冰上；
2．用细胞刮讲细胞刮下，移至15ml离心管，再用2.5ml1xPBS清洗培养皿一次，共5ml；
3．1500g离心5min，倒去上清，移入1.5ml离心管中，再每管加入800ul1xPBS清洗一次；
4．每管加入低渗bufferA（1M HEPES,1M KCL,100mMEDTA,100mM EGTA）（buffer：蛋白酶抑制剂：1M DTT=1000:10:1）200ul（原500ul）,冰上静置15min裂解；
5．每管加入25ul 10%NP-40，涡旋10s；
6．1500g4℃离心10min，上清为细胞质蛋白，收集至新的离心管中；
7．每管加入500ul bufferA清洗沉淀，离心速度约2000g；
8．每管加入RIPA buffer（buffer：蛋白酶抑制剂：1M DTT=1000:10:1）50ul，吹散沉淀颗粒，4℃震荡15min，其间每隔5min重新吹散一次，使其充分裂解；
9．14000rpm4℃离心15min，上清为细胞核蛋白，收集至新离心管中。