生活饮用水中氯硝柳胺的标准检验方法—萃取反萃取分光光度法征求意见稿及编制说明

生活饮用水中氯硝柳胺的标准检验方法—萃取-反萃取分光光度法
1.范围
本标准规定了用萃取-反萃取分光光度法测定生活饮用水中的氯硝柳胺。

本法适用于生活饮用水中氯硝柳胺的测定。

本法用氯硝柳胺作为标准，最低检测质量为5 µg。

若取250 mL水样测定，则最低检测质量浓度为0.02 mg/L。

2.原理
氯硝柳胺在酸性条件下溶于1：9乙酸丁酯-石油醚混合萃取溶剂，再在碱性条件下反萃取有机相中的氯硝柳胺，用分光光度法测定。

3.仪器
3.1 分液漏斗，500 mL
3.2 比色管，25 mL
3.3 碘量瓶，500 mL
3.4 分光光度计
4. 试剂
4.1 盐酸溶液（1 mol/L）
4.2 氢氧化钠溶液（1 mol/L）
4.3混合萃取液:乙酸丁酯与石油醚(沸点60～90 ℃,密度0.68 g/ml)体积比1:9。

4.4 氯硝柳胺标准溶液（20mg/L）：称取氯硝柳胺0.0200 g,加入10.0 ml 1 mol/L氢氧化
钠溶液溶解,加水定容至1000 ml,避光保存。

5.水样的稳定性
氯硝柳胺可在氯消毒过的水中降解，所以采样后尽快分析。

6.水样的采集、运输及保存
用玻璃磨口瓶采集样品，常温下运输及保存，送至实验室后样品尽快分析。

7.分析步骤
7.1 量取250 mL水样，置于500 mL分液漏斗中。

7.2 另取500 mL分液漏斗6个，分别加入氯硝柳胺标准液（4.4）0 mL,0.25 mL, 0.50 mL,
0.75 mL,1.00 mL,2.00 mL,分别置于预先盛有100 mL纯水的500 mL分液漏斗内,最后
补加纯水至250 mL。

7.3 向水样和标准系列中各加入5mL盐酸溶液（4.1）,混匀.再各加10 mL混合萃取液（4.3）,
振摇2 min,静置分层。

将水相放入碘量瓶中待用。

在分液漏斗中加入10 mL氢氧化钠溶液（4.2）, 振摇2 min,静置分层。

将反萃取水相缓缓放入25 mL比色管中。

7.4 将上述待用的水相倒入分液漏斗与有机相混合，振摇2min,静置分层。

将水相放入碘量
瓶中。

在分液漏斗中加入10 mL氢氧化钠溶液（4.2）, 振摇2 min,静置分层，反萃取水相并入25 mL比色管中，最后用水稀释至刻度。

7.5 于380 nm波长，用1 cm比色皿, 以水为参比,测量吸光度。

7.6 绘制工作曲线，从曲线上查出样品管中氯硝柳胺的含量.
7.7 计算
m
ρ=
V
式中：
ρ------水样中氯硝柳胺的质量浓度，单位为毫克毎升（mg/L）；
m------从工作曲线上查得氯硝柳胺的质量，单位为微克（µg）；
V------水样体积，单位为毫升（mL）。

8. 精密度和准确度
单个实验室取5.0 µg, 25.0µg,50.0µg氯硝柳胺重复测定6次，其相对标准偏差分别为7.1 %，2.7 %，2.4 %；对6个不同来源水样加入氯硝柳胺标准为0.08 mg/L，测得回收率为96.0～104.0 %，平均回收率为99.0 %，其相对标准偏差为2.9 %。

三个实验室分别取5.0 µg, 25.0µg,50.0µg氯硝柳胺重复测定6次，其相对标准偏差分别为6.0 %，2.6 %，2.2 %；6.1 %，3.2 %，3.0 %；4.5 %，2.5 %，2.8 %。

《生活饮用水中氯硝柳胺的标准检验方法—萃取-反萃取分光光度法》编制说明
1.项目简介
本项目系环境卫生标准委员会卫生标准制（修）订项目，该项目研制类别为制定。

扬州市疾病预防控制中心为该标准制定单位，主要参与人如下：邵爱梅、吴飞、嵇正平（扬州大学化学化工学院）、夏俊鹏、姜友富。

测定方法验证单位：江苏省疾病预防控制中心、南京市疾病预防控制中心、镇江市疾病预防控制中心。

标准制定主要通过：1.资料查询；
2.实验室检测条件摸索、干扰实验、精密度准确度试验；
3.样品存放条件实验；
4.文件起草等阶段。

2.国内外情况
氯硝柳胺(niclosamide)，是世界卫生组织推荐的高效灭螺药物，在我国作为灭螺药应用多年，然而氯硝柳胺对于非目标生物的毒性是值得关注的一个问题，持续大范围、大剂量使用是否会对生活饮用水产生影响，已越来越引起人们的重视。

目前关于检测氯硝柳胺的文献报道主要是其原药的电位滴定法，分光光度法和高效液相色谱法，但是生活饮用水中的氯硝柳胺残留量尚未有相关报道。

本文建立了萃取-反萃取法测定生活饮用水中的氯硝柳胺含量的方法。

3.采用本方法的理由
本法根据氯硝柳胺在酸性条件下溶于1：9乙酸丁酯-石油醚混合萃取溶剂，再用氢氧化钠反萃取有机相中的氯硝柳胺，用分光光度法测定。

本法具有良好的精密度、准确度、回收率高和重复性好的特点，能够满足水样检测需要。

4.本法的主要技术指标
4.1方法的线性和检出限
本实验中配置氯硝柳胺的浓度为5、10、15、25、50 µg，重复测定6次，现行方程为y=1.752×10-3*X+6.209×10-3,相关系数为0.9995。

根据标准曲线的斜率，以0.01吸光度对应的待测物浓度为检出限，以0.03吸光度对应的待测物浓度为测定下限。

计算出检出限为2.2 µg，即样品最低检出浓度为0.0088 mg/L，测定下限为5 µg，即样品最低测定浓度为0.02 mg/L.
4.2方法的精密度与准确度试验
表1精密度实验结果
溶液浓度测得结果平均值相对标准偏差
（µg）（µg）（µg）（% ）
5.0 4.66、 5.31、 5.31
5.31、 4.66、 4.66 4.98 7.1
25.0 24.76、24.76、25.41
24.11、26.06、25.41 25.08 2.7
50.0 49.40、48.10、51.34
50.04、50.69、48.75 49.72 2.4
方法的准确度用样品加标回收率表示，见表2。

表2 准确度实验结果
样品本底值加入量测得值加标回收率平均回收率相对标准偏差（µg）（µg）（µg）（% ）（% ）（% ）
0 5.0 4.45、 5.02、 5.58 89.0、100.4、111.6
5.02、 5.02、 4.45 100.4、100.4、 89.0 98.5 8.7
0 20.0 19.20、20.00、20.80 96.0、100.0、104.0
19.40、19.60、19.80 97.0、 98.0、 99.0 99.0 2.9
0 50.0 48.40、49.54、50.11 96.8、 99.1、100.2
48.97、51.25、50.68 97.9、102.5、101.4 99.6 2.1
4.3稳定性试验
取不含氯水样3 L两份中各加标氯硝柳胺0.6 mg（即溶液浓度为200 µg/L），取含游离氯0.3 mg/L水样3L两份中各加标氯硝柳胺0.6 mg（即溶液浓度为200 µg/L），分别于常温和<4 ℃低温条件下保存。

不含氯水样在常温条件下保存第二天下降至83.2 %，第三天下降至79.4 %，<4 ℃低温条件下保存第二天下降至85.2 %，第三天下降至81.4 %。

含氯水样
在常温条件下保存第二天下降至58.2 %，第三天下降至53.0 %，<4 ℃低温条件下保存第二天下降至58.8 %，第三天下降至56.4 %.说明水样中余氯对氯硝柳胺的测定有影响，且水样采样后应尽快分析。

表3 常温保存条件下回收实验(测得结果单位：µg /250 m L)常温保存 1天 2天 3天
不含氯含氯不含氯含氯不含氯含氯
1 46.4 44.8 42.1 29.3 40.1 26.3
2 51.5 46.7 42.7 29.8 39.2 27.8
3 52.0 45.2 42.1 29.8 40.1 26.5
4 47.2 46.4 39.3 27.3 39.3 25.3
平均值 49.3 45.8 41.6 29.1 39.7 26.5
回收率，% 98.6 91.6 83.2 58.2 79.4 53.0
表4 <4 ℃保存条件下回收实验(测得结果单位：µg / 250 m L) <4℃保存 1天 2天 3天
不含氯含氯不含氯含氯不含氯含氯
1 48.4 45.8 43.1 30.3 41.6 28.3
2 51.5 47.7 42.7 29.8 41.2 29.8
3 52.0 46.2 42.7 29.8 40.1 27.5
4 48.8 47.4 42.1 28.3 39.8 27.3
平均值 50.2 46.8 42.6 29.4 40.7 28.2
回收率，% 100.4 93.6 85.2 58.8 81.4 56.4
4.4与高效液相色谱法的比较
配置3 L0.2 mg/L的氯硝柳胺水样，分别高效液相色谱法与萃取-反萃取分光光度计检测比较，两者没有显著性差异。

表5 HPLC与化学法的比较
方法加入浓度测得浓度平均值相对标准偏差（mg/L）（mg/L）（mg/L）（% ）HPLC法 0.200 0.199、0.205、0.206
0.206、0.210、0.2020.205 1.8
化学法 0.200 0.194、0.206、0.208
0.195、0.186、0.189 0.196 4.5
4.5三家验证单位精密度实验的比较
表6 三家验证单位精密度比较
溶液浓度验证单位测得结果平均值相对标准偏差平均回收率（µg）（µg）（µg）（%）（%）5.0 江苏省疾病预防控制中心 4.64 、5.28 、5.31
5.40 、4.98 、4.82 5.07
6.0 101.4
南京市疾病预防控制中心 4.64 、5.28 、5.31
4.68 、4.72 、4.98 4.94 6.1 98.8
镇江市疾病预防控制中心 4.88 、4.75 、4.66
4.99 、
5.13 、5.25 4.94 4.5 98.8 25.0 江苏省疾病预防控制中心 25.42、2
6.13、26.13
24.66、26.32、26.31 25.83 2.6 103.3
南京市疾病预防控制中心 25.98、26.13、26.15
24.69、24.35、24.99 25.38 3.2 101.5
镇江市疾病预防控制中心 26.30、26.03、24.65
26.13、25.31、26.13 25.76 2 103.0 50.0 江苏省疾病预防控制中心 50.12、51.01、52.06
50.13、48.96、49.36 50.27 2.2 100.5
南京市疾病预防控制中心 51.36、50.99、52.31
51.33、49.31、48.23 50.59 3.0 101.2
镇江市疾病预防控制中心 51.81、51.13、50.96
49.62、48.95、48.23 50.12 2.8 100.2
综上所述,本法具有良好的精密度、准确度、回收率高和重复性好的特点，能够满足水样检测需要。