微生物常用染色法知识分享
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微生物常用染色法
朱葵向
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面细菌蛋白及结构,便于染色.避 免在水洗过程中被水冲掉. 通常用火焰加热固 定,将涂片在火焰中迅速通过3次,以手背皮肤接 触玻片不烫为佳.
染色
根据检验目的不同,选择不同染色方法进行染 色.染色时滴加染色液以覆盖涂面为佳，染色 时间则随时间而定
媒染
使染料固定于被染物引起细胞膜通透性改变. 常用明矾,鞣酸,金属盐和碘作为媒染
染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
性为红色.
BASO革兰染液
抗酸染色
萋__纳抗酸染色法步骤:
细菌涂片经火焰固定,加石碳酸复红溶液,加热至 有蒸气出现,切不可沸腾.染液因蒸发减少时,应随时补充,防止染
液蒸干 .持续5 min,水洗,甩干.
滴加3%盐酸乙醇脱色,不时摇动玻片至红色脱落 为止,水洗,甩干.
加吕氏美蓝复染液数滴复染1min,水洗.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
甩干. – 加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染,约30S,水洗. – 干后显微镜下镜检观察结果.革兰阳性菌染成紫色,革兰阴
革兰染色
染色方法:先以结晶紫液初染,后以卢戈氏碘液 媒染,使脱色的细菌 显红色,为G-菌.末脱色细 菌呈紫色为G+菌.
涂片见G-杆菌，形似肠杆菌
涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
涂片见G+球菌，呈链状排列
染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
干后置显微镜下镜检.
抗酸杆菌呈红色,非抗酸杆菌呈蓝色.
BASO抗酸染液
染色法原理
单染色 可选用任何一种碱性染料使细菌着色,观察到
不同细菌形态大小及排列的特征.
染色法原理
复合染色 用两种以上的染料染色,不同的细菌着色不同,
不但通过形态及排列,可通过染色反应性来鉴 别细菌,称为鉴别染色.常用有革兰染色和抗 酸染色.
剂.也可用加热法促进着色.
脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
复染
复染液作为复染以便观察,复染不宜太强,以免 掩盖初染的颜色.
常用染色法
– 单染色法 只用一种染料染色,常用吕氏美蓝,结晶 紫和稀释石碳酸复红等.
应用
用革兰氏染色将几乎所有细菌分为G+和G-细 菌两部分.不同 染色反应细菌细胞壁结构差异 较大,致病性各有特点,对不同抗生素的敏 感性 也有差别.在抗生素敏感试验中有直接的指导 意义.
抗酸染色
抗酸染色是细菌着色后不被盐酸乙醇脱色的染 色方法.
染色方法
) 先将碳酸复红染色,加温促使菌体着色,再用 3% 盐酸乙醇脱色.最后用美蓝复染,末脱色细 菌呈红色为抗酸性细菌,脱色细菌呈蓝 色为非抗酸性细菌.
朱葵向
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面细菌蛋白及结构,便于染色.避 免在水洗过程中被水冲掉. 通常用火焰加热固 定,将涂片在火焰中迅速通过3次,以手背皮肤接 触玻片不烫为佳.
染色
根据检验目的不同,选择不同染色方法进行染 色.染色时滴加染色液以覆盖涂面为佳，染色 时间则随时间而定
媒染
使染料固定于被染物引起细胞膜通透性改变. 常用明矾,鞣酸,金属盐和碘作为媒染
染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
性为红色.
BASO革兰染液
抗酸染色
萋__纳抗酸染色法步骤:
细菌涂片经火焰固定,加石碳酸复红溶液,加热至 有蒸气出现,切不可沸腾.染液因蒸发减少时,应随时补充,防止染
液蒸干 .持续5 min,水洗,甩干.
滴加3%盐酸乙醇脱色,不时摇动玻片至红色脱落 为止,水洗,甩干.
加吕氏美蓝复染液数滴复染1min,水洗.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
甩干. – 加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染,约30S,水洗. – 干后显微镜下镜检观察结果.革兰阳性菌染成紫色,革兰阴
革兰染色
染色方法:先以结晶紫液初染,后以卢戈氏碘液 媒染,使脱色的细菌 显红色,为G-菌.末脱色细 菌呈紫色为G+菌.
涂片见G-杆菌，形似肠杆菌
涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
涂片见G+球菌，呈链状排列
染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
干后置显微镜下镜检.
抗酸杆菌呈红色,非抗酸杆菌呈蓝色.
BASO抗酸染液
染色法原理
单染色 可选用任何一种碱性染料使细菌着色,观察到
不同细菌形态大小及排列的特征.
染色法原理
复合染色 用两种以上的染料染色,不同的细菌着色不同,
不但通过形态及排列,可通过染色反应性来鉴 别细菌,称为鉴别染色.常用有革兰染色和抗 酸染色.
剂.也可用加热法促进着色.
脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
复染
复染液作为复染以便观察,复染不宜太强,以免 掩盖初染的颜色.
常用染色法
– 单染色法 只用一种染料染色,常用吕氏美蓝,结晶 紫和稀释石碳酸复红等.
应用
用革兰氏染色将几乎所有细菌分为G+和G-细 菌两部分.不同 染色反应细菌细胞壁结构差异 较大,致病性各有特点,对不同抗生素的敏 感性 也有差别.在抗生素敏感试验中有直接的指导 意义.
抗酸染色
抗酸染色是细菌着色后不被盐酸乙醇脱色的染 色方法.
染色方法
) 先将碳酸复红染色,加温促使菌体着色,再用 3% 盐酸乙醇脱色.最后用美蓝复染,末脱色细 菌呈红色为抗酸性细菌,脱色细菌呈蓝 色为非抗酸性细菌.