3- 磷酸甘油酸激酶(3- Phosphoglycerate kinase ,PGK )试剂盒说明书
糖酵解TCA专题知识讲座
（4）果糖-1,6-二磷酸旳裂解
醛缩酶
（aldolase）
（5）丙糖磷酸旳异构
（triose phosphate isomerase）
第二阶段：ATP旳生成
NAD+ NADH+H+ Pi
ADP ATP
NADH NAD
Aldolase
Phospho
Phospho
Glyceraldehyde
glycerate
glycerate
3-phosphate
2–Phospho mutase 3–Phospho kinase 1, 3 Bisphosphdoehydrogenase
Triose phosphate isomerase
丙酮酸
（有氧或无氧）
（有氧）
糖异生
乙酰 CoA
乳酸 乙醇
三羧酸 循环
丙酮酸旳无氧降解及葡萄糖旳无氧分解
葡萄糖
EMP
NADH+H+ NAD+
COOH C==O
COOH
CH(OH)
CH3
乳酸
CH3
丙酮酸
CO2
CHO
CH3
乙醛
CH2OH
NADH+H+ NAD+ CH3
乙醇
葡萄糖旳无氧分解
绝大多数细胞中丙酮酸能够转化为乳酸 绝大多数生物能够经过乳酸脱氢酶催化旳
其中一部分经过
磷酸化储存在 ATP中。
要点： ①酵解途径。 ②三羧酸循环旳途径。 难点： ①计算酵解途径中ATP旳量及能量利用效率。 ②计算三羧酸循环中ATP旳量及能量利用效率。 ③淀粉及糖原旳合成。
3-磷酸甘油酸脱氢酶促进丝氨酸合成在肿瘤进展中的机制
综 述?３－磷酸甘油酸脱氢酶促进丝氨酸合成在肿瘤进展中的机制崔畅婉，孙峥嵘Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆ３－ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｐｒｏｍｏｔｉｎｇｓｅｒｉｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎＣＵＩＣｈａｎｇｗａｎ，ＳＵＮＺｈｅｎｇｒｏｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｂａｎｋ，ＳｈｅｎｇｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙａｎｇ１１０００１，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｉｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐａｔｈｗａｙａｃｔｉｖｉｔｙｉｓａｄｉｓｔｉｎｃｔｃｏｍｍｏｎｆｅａｔｕｒｅｏｆｍａｎｙｃａｎｃｅｒｓ．３－ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＰＨＧＤＨ），ｔｈｅｆｉｒｓｔｒａｔｅ－ｌｉｍｉｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅｉｎｔｈｉｓｐａｔｈｗａｙ，ｉｓｈｉｇｈｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｍｅｌａｎｏｍａ，ｂｒｅａｓｔａｎｄｋｉｄｎｅｙｃａｎｃｅｒ．ＰＨＧＤＨｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎ．Ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｐｒｏｄｕｃｔ３－ｇｌｙｃｅｒｉｃａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔｅｏｘｉｄｉｚｅｄｔｏｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｉｏｎｉｃａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔｅｕｎｄｅｒＰＨＧＤＨａｃｔｉｏｎ，ａｎｄｆｉｎａｌｌｙｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｓｅｒｉｎｅ．Ｓｅｒｉｎｅｃｏｎｖｅｒｔｅｄｔｏｇｌｙｃｉｎｅａｎｄｔｈｅｎｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ（ＳＡＭ）ａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）．ＰＨＧＤＨｉｓｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｂｅａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｔｕｍｏｒｔｈｅｒａｐｙ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】３－ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ｃａｎｃｅｒ，ｇｌｕｃｏｌｙｓｉｓＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０２１，２９（０５）：０８８５－０８８８【指示性摘要】丝氨酸生物合成途径活性的上调是许多癌症明显的共同特征。
磷酸甘油酸变位酶作用机制
磷酸甘油酸变位酶作用机制磷酸甘油酸变位酶（phosphoglycerate mutase，PGAM）是一种底物特异性的酶，参与糖酵解途径中磷酸甘油酸（3-phosphoglycerate，3-PGA）的转化。
它催化3-PGA与2-磷酸甘油酸（2-phosphoglycerate，2-PGA）之间的互变反应，将磷酸基从3位转移到2位，从而在糖酵解途径中产生关键的代谢产物。
磷酸甘油酸变位酶在多个生物体系中都存在，并且其催化机制也有所不同。
在哺乳动物中，磷酸甘油酸变位酶主要存在两种亚型，分别是磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1）和磷酸甘油酸变位酶2（PGAM2）。
这两种亚型在组织特异性和功能上有所差异。
磷酸甘油酸变位酶的催化机制可以分为两个步骤：互变步骤和磷酸解离步骤。
互变步骤是指催化剂将3-PGA的磷酸基转移到PGAM上的一个亚基上，形成一个磷酸酯中间体。
在这个过程中，PGAM的一个组氨酸残基（His）起到了负责催化的角色。
这个组氨酸残基可以捐出质子，使得3-PGA的磷酸基离去，同时催化剂上的磷酸基与PGAM 形成酯键。
这个互变步骤通过一个共价中间体实现，即PGAM与磷酸基之间形成一个磷酸酯键。
互变步骤完成后，PGAM上的磷酸基需要解离，使得亚基上的2-PGA 形成。
这个磷酸解离步骤是通过PGAM上的一个碱基残基（Lys）催化的。
这个残基可以捐出一个质子，同时使得PGAM上的磷酸基离去，最终形成2-PGA。
这个步骤中，磷酸基的离去是通过质子转移的方式实现的。
磷酸甘油酸变位酶的催化机制在细胞内起到了至关重要的作用。
磷酸甘油酸是糖酵解途径中的一个关键中间产物，其转化为2-PGA后可以继续参与后续的途径。
糖酵解途径是细胞中产生能量的重要途径之一，通过将葡萄糖分解为乳酸或乙醛酸，产生ATP。
而磷酸甘油酸变位酶的催化作用是糖酵解途径中的一个关键步骤，它使得3-PGA能够转化为2-PGA，从而维持途径正常进行。
除了在糖酵解途径中的作用外，磷酸甘油酸变位酶还在其他代谢途径中发挥着重要作用。
三磷酸甘油酸激酶符号
三磷酸甘油酸激酶符号三磷酸甘油酸激酶符号的含义和作用1. 引言在细胞生物学和生物化学领域，磷酸化是一种广泛存在的共轭反应。
它在细胞信号传导、能量代谢和基因表达等关键生物过程中起着重要作用。
其中，三磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate kinase，简称PGK）是一种能催化底物1,3-二磷酸甘油酸（1,3-Diphosphoglycerate，简称1,3-DPG）磷酸化的重要酶类。
本文将详细介绍三磷酸甘油酸激酶符号的含义和作用。
2. 符号的含义三磷酸甘油酸激酶的符号为PGK，它直观地传达了这个酶在细胞内的功能以及与磷酸化反应有关。
PGK表示这个酶参与了磷酸化过程，而三磷酸甘油酸（Phosphoglycerate）则指明了PGK的底物是磷酸化的甘油酸衍生物。
3. 作用和机制PGK是糖酵解途径中的一个关键酶，并且广泛存在于真核生物和原核生物中。
在糖酵解过程中，PGK的功能是将1,3-DPG磷酸化为3-磷酸甘油酸（3-Phosphoglycerate，简称3-PG），同时生成了一个分子的三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate，简称ATP）。
这个反应可逆，反向反应会催化三磷酸甘油酸磷酸化为1,3-DPG，同时消耗一个分子的ATP。
PGK作为糖酵解途径中的一环，不仅维持了这一途径的正常进行，也提供了ATP供能。
在有氧条件下，糖酵解产生的ATP可被细胞进一步利用以供应能量需求。
而在缺氧条件下，糖酵解途径是维持能量供应的重要来源，PGK的正常功能就显得尤为重要。
4. 个人观点和理解对于我个人而言，三磷酸甘油酸激酶代表了细胞生物学和生物化学的精彩与美妙。
它以简洁明了的符号和过程，诠释了细胞内磷酸化反应的重要性和多样性。
三磷酸甘油酸激酶的存在还提醒我们细胞内众多酶类的精细调控和协同作用。
正是这些酶类的相互作用和协调，才使得细胞能够在复杂的代谢和信号传导网络中高效运作。
三磷酸甘油酸激酶符号PGK代表了磷酸化反应在细胞内的重要性，并且提醒我们酶类的高度调控和相互作用的必要性。
生物化学及分子生物学(人卫第九版)-05-01节糖代谢
门静脉
肝
体循环
Na+依赖型葡糖转运蛋白 （Na+-dependent glucose transporter, SGLT）
这一SGLT依赖的吸收过程主动耗能
2021/3/29 星期一
6
二、细胞摄取葡萄糖需要转运蛋白
体循环 葡糖转运蛋白
各组织细胞
（glucose transporter，GLUT）
GLUT1
2021/3/29 星期一
34
4. α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰CoA
-酮戊二酸脱氢酶复合体 （3酶5辅因子）
2021/3/29 星期一
35
5. 琥珀酰CoA合成酶催化底物水平磷酸化反应
(ADP)
(ATP)
琥珀酰CoA合成酶
2021/3/29 星期一
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6. 琥珀酸脱氢生成延胡索酸
琥珀酸脱氢酶 （与内膜结合）
底物水平磷酸化 （substrate-level phosphorylation）：
ADP或其他核苷二磷酸的磷酸化作用与高能化合物的高能键水解 直接相偶联的产能方式
2021/3/29 星期一
18
8. 3-磷酸甘油酸转变为2-磷酸甘油酸
COOH C OH
CH 2 O P
3-磷酸甘油酸
磷酸甘油酸变位酶（ phosphoglycerate mutase）
ADP Mg2+
P O CH2
H H
OH
OH HO
H OH
己糖激酶 （hexokinase）
OH HO
H OH
H
OH
H
OH
葡萄糖
葡糖-6-磷酸 （glucose-6-phosphate, G-6-P）
动物生物化学 第六章 糖代谢
丙酮酸脱氢酶系(pyruvate dehydrogenase system) 1 丙酮酸脱羧酶，辅酶是TPP， 2 二氢硫辛酸乙酰转移酶，辅酶是二氢硫辛酸和辅酶A， 3 二氢硫辛酸脱氢酶，辅酶是FAD及NAD+
（三）血糖
人 80-120mg/100ml 4.4-6.7mmol/L
第一节 糖的分解代谢 (catabolism of carbohydrate)
动物组织均能对糖进行分解代谢，主要的分解途 径有三条：
(1)无氧条件下进行糖酵解途径；
(2)有氧条件下进行有氧氧化；
(3)生成磷酸戊糖-磷酸戊糖通路。
葡萄糖（glucose G）
-1ATP
6-磷酸葡萄糖(glucose-6-phophate, G－6－P)
己糖激酶(hexokinase,HK)。
葡萄糖激酶(glucokinase,GK)
6－磷酸葡萄糖是HK的反馈抑制物，此酶是糖氧化 反应过程的限速酶(rate limiting enzyme)或称关键酶 (key enzyme)。它有同工酶Ⅰ-Ⅳ型，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型主 要存在于肝外组织，其对葡萄糖Km值为10-5～10-6M。
第六章 糖代谢
一 糖的生理功能
1 机体的组成成分 核糖 糖脂 2 提供能量和碳源 70%
二 糖代谢的概况
（一）糖的来源
1 由消化道吸收（单胃动物） 2 由非糖物质转化而来（反刍兽）
（二）动物体内糖的主要代谢途径
1 分解供能—— 酵解、有氧氧化、磷酸戊糖途 径、糖原分解
2 贮存—— 糖异生、合成糖原或转变成脂肪
甘油酸-3磷酸
甘油酸-3磷酸
甘油酸-3磷酸，IUPAC名3-磷酸甘油酸或3-磷酸甘油酸（英语：
3-phosphoglycerate或glycerate 3-phosphate），是生物细胞中常见的分子之一，也是糖解作用与卡尔文循环过程里的中间产物。
在糖解作用中，3-磷酸甘油酸是1,3-双磷酸甘油酸在磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate kinase）的催化中产生。
每一分子1,3-双磷酸甘油酸会使一分子的ADP转变成为的ATP，原理是接在1,3-双磷酸甘油酸上的两个磷酸根，其中有一个转移到ADP之上。
这个反应需要镁离子（Mg2+）的帮助。
接下来3-磷酸甘油酸将会在磷酸甘油酸变位酶（Phosphoglycerate）的催化下生成2-磷酸甘油酸，在此反应中，原本接在3-磷酸甘油酸的第3个碳上的磷酸根，将会转移到变位酶上；然后原本在变位酶上的磷酸根，则会接到3-磷酸甘油酸的第2个碳上，反应前后的变位酶整体结构没有变化。
糖代谢讲解
ATP
2-磷酸甘油酸
3-磷酸甘油酸 2-磷酸甘油酸
磷酸烯醇式丙酮酸 (phosphoenolpyruvate, PEP)
磷酸烯醇式丙酮酸
ADP
丙酮酸
ATP
Glu
ATP ADP
G-6-P F-6-P
⑽ 磷酸烯醇式丙酮酸转变成丙酮酸， 并通过底物水平磷酸化生成ATP
ATP ADP
F-1,6-2P 磷酸二 羟丙酮
（2）丙酮酸激酶
1. 别构调节
别构激活剂：1,6-双磷酸果糖 别构抑制剂：ATP, 丙氨酸
2. 共价修饰调节
Pi
丙酮酸激酶
（有活性）
磷蛋白磷酸酶
丙酮酸激酶
（无活性）
P
ATP 胰高血糖素 PKA, CaM激酶
ADP
PKA：蛋白激酶A (protein kinase A) CaM：钙调蛋白
(3) 己糖激酶或葡萄糖激酶
丙酮酸
ATP
Glu
ATP ADP
G-6-P F-6-P
⑷ 磷酸己糖裂解成2分子磷酸丙糖
CH2 O
ATP ADP
P
F-1,6-2P 磷酸二 羟丙酮
NAD+ NADH+H+
CH2O C HO H H C C C O H OH OH
P
C
O
磷酸二羟丙酮
3-磷酸 甘油醛
CH2OH
1,3-二磷酸甘油酸
ADP
醛缩酶 (aldolase) CHO
1,3-二磷酸甘油酸
ADP
ATP
ADP
H HO
O H OH H H
H OH
Mg2+
己糖激酶 (hexokinase)
第四章微生物新陈代谢
frucose-6-phosphate pyruvate
意义
4.2.3 ED pathway
丙酮酸
6-磷酸-葡萄糖
6-磷酸-葡萄糖酸 2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸, KDPG
甘油醛-3-磷酸
Total reaction:
Glucose+ADP+Pi+NADP++NAD+ →
2pyruvates+ATP+NADPH+H++ NADH+H+
5-磷酸-木酮糖 景天庚酮糖-7-磷酸
5-磷酸-核酮糖
转醛醇酶 6-磷酸-果糖
6-磷酸-果糖
赤藓糖-4-磷酸
转酮醇酶 6-磷酸-果糖
1,6-二磷酸-果糖
5-磷酸-木酮糖 甘油醛-3-磷酸
丙酮酸
Total reaction:
3 glucose-6-phosphate+6NADP++3H2O→ 3CO2+6NADPH+6H++2fructose-6-phosphate +glyceraldehyde-3-phosphate
ADP ATP
⑦↓↑ Phosphoglycerate kinase
3-phosphoglycerate ↓↑phosphoglycerate mutase
Three-carbon stage
2-phosphoglycerate 甘油酸-2-磷酸
⑨↓↑ enolase
Phosphoenolpyruvate 磷酸烯醇式丙酮酸
甘油酸-3-磷 ⑧↓酸↑磷酸甘油酸变位酶
甘油酸-2-磷 ⑨酸↓↑ 烯醇酶
生物化学-糖酵解、糖异生和戊糖磷酸途径
18
p531⑦
⑦ 磷酰基从1,3-BPG转移给ADP
- 磷酸甘油酸激酶
(以逆反应命名)
= 1st步底物水平磷酸化
底物分子的高能磷酰基直接转移到 ADP/GDP而生成ATP/GTP，反应仅
涉及可溶性酶和化学中间物
3-PG
• ⑥和⑦为能量偶联过程
(共同中间物为1,3-BPG)
- G3P (醛)氧化为3-PG (酸) - NAD+还原成NADH - ADP磷酸化为ATP
ห้องสมุดไป่ตู้
p290~)
① Glc磷酸化成G6P
- 己糖激酶
- 己糖激酶 I~III广泛分布 于肝肾外所有组织中，
- 1stATP被消耗：不可逆 - 为后续反应激活Glc
KmGlc = 0.1 mmol， 专一性不强且为变构酶： G6P为其变构抑制剂
- keeping some energy from ATP’s breakdown
- ATP抑制而AMP解除抑制 - 柠檬酸和F-2,6-BP分别为
变构抑制剂和激活剂
亲核攻击
1st调拨点 F-1,6-BP只能
进入酵解
精选2021版课件
12
p527④
④ F-1,6-BP裂解成二羟丙酮磷酸和甘油醛-3-P
- 醛缩酶
(DHAP)
(G3P)
= 可逆羟-醛缩合反应
- C3–C4断开
尽管⊿G’o意味着反应 倾向于逆行，但由于
Otto F. Meyerhof 1884-1951
(shared 1922 NP in Phys./Med.)
(糖)酵解 细胞质中通过一系列 酶促反应将葡萄糖最 终降解为丙酮酸并伴 有ATP生成的全过程
生物化学糖试题集及答案
生物化学糖试题集及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 糖酵解过程中，下列哪种酶催化的反应不可逆？A. 己糖激酶B. 磷酸果糖激酶-1C. 丙酮酸激酶D. 乳酸脱氢酶答案：C2. 糖酵解过程中，哪种物质是限速酶？A. 己糖激酶B. 磷酸果糖激酶-1C. 丙酮酸激酶D. 乳酸脱氢酶答案：B3. 糖酵解过程中，哪种物质是关键的调节因子？A. ATPB. NADHC. 柠檬酸D. 丙酮酸答案：A4. 糖酵解过程中，哪种物质是最终产物？A. 丙酮酸B. 乳酸C. 二氧化碳和乙醇D. 葡萄糖-6-磷酸答案：B5. 糖酵解过程中，哪种物质是丙酮酸激酶的激活剂？A. 柠檬酸B. 丙酮酸C. 果糖-1,6-二磷酸D. 葡萄糖-6-磷酸答案：C6. 糖酵解过程中，哪种物质是丙酮酸激酶的抑制剂？A. ATPB. NADHC. 柠檬酸D. 丙酮酸答案：A7. 糖酵解过程中，哪种物质是己糖激酶的抑制剂？A. ATPB. NADHC. 柠檬酸D. 丙酮酸答案：A8. 糖酵解过程中，哪种物质是磷酸果糖激酶-1的抑制剂？A. ATPB. NADHC. 柠檬酸D. 丙酮酸答案：A9. 糖酵解过程中，哪种物质是磷酸果糖激酶-1的激活剂？A. ATPB. NADHC. 柠檬酸D. 丙酮酸答案：C10. 糖酵解过程中，哪种物质是乳酸脱氢酶的底物？A. 丙酮酸B. 乳酸C. 果糖-1,6-二磷酸D. 葡萄糖-6-磷酸答案：A二、填空题（每题2分，共20分）1. 糖酵解过程中，_________是第一个限速步骤。
答案：己糖激酶2. 糖酵解过程中，_________是第二个限速步骤。
答案：磷酸果糖激酶-13. 糖酵解过程中，_________是第三个限速步骤。
答案：丙酮酸激酶4. 糖酵解过程中，_________是最终产物。
答案：乳酸5. 糖酵解过程中，_________是丙酮酸激酶的激活剂。
答案：果糖-1,6-二磷酸6. 糖酵解过程中，_________是丙酮酸激酶的抑制剂。
（完整版）生物化学专业英语单词
（完整版）生物化学专业英语单词单词表第一章Prokaryote 原核生物Eukaryote 真核生物fractionation 分级、分馏biomolecule 生物分子organism 生物体、有机体membrane 膜nucleus 细胞核cocci 球菌bacilli 杆菌spirilla 螺旋菌Eubacteria 真细菌Archaebacteria 原细菌Gram-positive 革兰氏阳性菌Gram negative bacteria 革兰氏阴性菌Cyanobacteria 蓝细菌Plasma 细胞浆Mesosome 间体Nuleoid 拟核Sytosol 细胞质、原生质Bilayer 双分子层（膜）Protein 蛋白质Lipid 脂类Carbohydrate 糖类、碳水化合物osmotic pressure 渗透压Peptidoglycan 肽聚糖Subcellular 亚细胞的Ganelle 细胞器Genetic 遗传的Chromosome 染色体ribosomal ribonucleic acid rRNA Endoplasmic reticulum 内质网Phospholipid 磷脂Detoxification 解毒Golgi apparatus 高尔基体Refresh 更新Mitochondria 线粒体oxidative phosphorylation 氧化磷酸化fatty acid 脂肪酸degradation 降解Chloroplasts 叶绿体thylakoid vesicles 类囊体photosynthesis 光合作用Lysosomes 溶酶体Macromolecule 大分子Enzyme 酶Cytoskeleton 细胞支架Metabolic 新陈代谢的Centrifugation 离心Isolate 分离Equilibrium 平衡Density 密度Friction 摩擦力Velocity 速率Supernatant 上清夜Pellet 沉淀第二章Amino acid 氨基酸Enantiomers 对映体T etrahedral 正四面体的Hydrophobic 疏水的、憎水的Aliphatic 脂肪族的Aromatic 芳香族的Polar 极性的Charged 带电荷的Glycine Gly,甘氨酸alanine Ala,丙氨酸valine Val,缬氨酸leucine Leu,亮氨酸isoleucine Ile,异亮氨酸methionine Met,甲硫氨酸proline Pro,脯氨酸cystine Cys,半胱氨酸Phenylalanine Phe,苯丙氨酸Tyrosine Tyr,酪氨酸Tryptophan Trp,色氨酸Asparagines Asn, 天冬酰胺Glutamine Gln,谷氨酰胺Serine Ser,丝氨酸Threonine Thr,苏氨酸Varginine Arg, 精氨酸Lysine Lys,赖氨酸Histidine His,组氨酸aspartic acid Asp,天冬氨酸glutamic acid Glu,谷氨酸base 碱carboxyl 羧基isoelectric point 等电点positive 正的、阳性的negative 负的、阴性的buffering 缓冲physiological 生理的Primary structure 一级结构Secondary structure 二级结构Tertiary structure 三级结构Quaternary structure 四级结构peptide bond 肽键sequence 顺序、序列covalent Bond 共价键polypeptide 多肽terminal 末端carbonyl 羰基resonance structures 共振结构rigid 刚性的rotate 旋转trans configuration 顺式构象disulfide bonds 二硫键α-helix α-落选hydrogen bond 氢键β-pleated sheet β-折叠片parallel 平行的antiparallel 反平行的random coil 无规卷曲unique 唯一的spatial 空间的arrangement 排列、安排linear sequence 线性序列residue 残基Hydrophobic interaction疏水相互作用Interior 内部的Electrostatic force 静电力salt bridge 盐桥、盐键van der Waals force 范德华力subunit 亚基allosteric effect 变构效应Noncovalent interactions 非共价相互作用protein stability 蛋白质的稳定dimensional 空间的、维的proton 质子donor 供体、赠与者lone pair of electrons 孤对电子collinear 在同一直线上Hydrophobic force 疏水力Nonpolar 非极性Minimize 最小化protein folding 蛋白质折叠Accessory protein 辅助蛋白质molecular chaperones 分子伴侣Myoglobin 肌红蛋白Hemoglobin 血红蛋白prosthetic group 辅基essential 必需的heme 血红素crevice 缝隙protoporphyrin 原卟啉porphyrin 卟啉ferrous 含铁的proximal 最接近的cooperative 协同的noncooperative 非协同的dissociation curve 解离曲线sigmoidal S形曲线hyperbolic 双曲线affinity 亲和性blood capillaries 血管Bohr effect 波尔效应2,3-biphosphoglycerate 2,3-二磷酸甘油酸Mechanism 机制Relaxed state 松弛状态tense state 紧张状态hemoglobinopathies 血红蛋白分子病Sickle-cell anemia 镰刀形细胞贫血症Erythrocyte 红血球sticky patch 粘性小区therapeutic 治疗的Collagen 胶原蛋白Skin 皮肤Bone 骨骼Tendon 腱Cartilage 软骨blood vessel 血管mammal 哺乳动物fibrous 纤维状的tripeptide 三肽的triple-helical 三股螺旋的cross-linke 交联Allysine 醛基赖氨酸Antibodie 抗体immune system 免疫系统pathogen 病原体trigger 引发、触发response 响应、应答antigen 抗原antigenic determine 抗原决定簇epitope 抗原决定簇Immunolocalization 免疫定位Antibody 抗体Enzyme-linked immunosorbent assayELISA酶联免疫吸附测定purification 提纯、纯化Homogenization 匀浆solubilization 溶解Ammonium sulfate 硫酸铵Precipitation 沉淀Dialysis 透析Chromatographic techniques 层析技术gel filtration 凝胶过滤affinity chromatography 亲和层析Electrophoretic techniques 电泳技术isoelectric focusing 等电聚焦SDS polyacrylamide gel eletrophoresisSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳semi-permeable 半透性ligand 配基inert 惰性的matrix 基质elute 洗出、流出lectin 外源凝集素glycoprotein 糖蛋白molecular sieve 分子筛polyampholytes 聚两性电解质gradient 梯度migrate 迁移、移动chymotrypsin 胰凝乳蛋白酶sequencing 测序2-mercaptoethanol ２－巯基乙醇ninhydrin 茚三酮fluorescamine 荧光胺fluorodinitrobenzene 二硝基氟苯dansyl chloride 丹磺酰氯phenyl isothiocyanate PITC苯异硫氰酸酯fragment 片断、碎片encoding 编码decipher 解读、破译anchor 锚定第三章biocatalyst 生物催化剂active site 活性中心substrate 底物The induced –fit model 诱导契合学说Stereospecificity 立体异构专一性Specificity 专一性Trypsin 胰蛋白酶Elastase 弹性蛋白酶Oxidoreductase 氧化还原酶Transferase 转移酶Hydrolase 水解酶Lyase 裂合酶Isomerase 异构酶Ligase 连接酶Ribozyme 核酶Abzyme 抗体酶catalytic antibody 抗体酶analog 类似物assay 化验、测定optimal 最佳的Coenzyme 辅酶Cofactor 辅因子apoenzyme 脱辅酶holoenzyme 全酶acetylcholinesterase 乙酰胆碱酯酶Nicotinamide 烟酰胺Adenine 腺嘌呤Dinucleotide 二核苷酸Phosphate 磷酸Oxidation 氧化reduction 还原Flavin 黄素Mononucleotide 单核苷酸Acyl 酰基thiamine pyrophosphate 焦磷酸硫胺素decarboxylase 脱羧酶Pyridoxal 吡哆醛Pyridoxamine 吡哆胺Pyridoxine 吡哆醇Ubiquinone 泛醌Isoenzymes 同功酶Kinetic 动力学lactate dehydrogenase 乳酸脱氢酶proportional 成比例的saturate 使饱和thermal 热的denaturation 变性optimum 最适宜的diversity 多样性Michaelis-Menten equation 米氏方程double-reciprocal plot 双倒数作图法inhibition 抑制Inhibitor 抑制剂Metabolite 代谢物Irreversible 不可逆的Reversible 可逆的Competitive 竞争性的Noncompetitive 非竞争性的Probe 探测Clinically 临床上Regulation 调节committed step 关键步骤activator 激活剂Adjust 调节Feedback 反馈Sequential 连续的Branched 分支的Conformational 构象的homotropic effect 同促效应heterotropic effect 异促效应Phosphofructokinase 磷酸果糖激酶Citrate 柠檬酸盐Fructose 2,6 bisphosphate 2,6-二磷酸果糖phosphorylation 磷酸化dephosphorylation 去磷酸化hydroxyl 羟基hormone 激素Glycogen phosphorylase 糖原磷酸化酶Phosphorylate 使磷酸化glycogen synthase 糖原合酶unphosphorylate 使去磷酸化proteolytic 蛋白质水解的proenzymes 酶原zymogen 酶原hydrolysis 水解pancreatic 胰腺的pancreas 胰腺small intestine 小肠blood clotting 血液凝固amplification 扩大cascade 级联第四章boundary 边界compartments 小室Mechanical 机械的signaling 发信号insoluble 不可溶的glycerophospholipids 甘油磷脂类sphingolipids 鞘脂类sterols 固醇类glycerol 甘油sphingosine 鞘氨醇sphingomyelins 鞘磷脂cholesterol 胆固醇steroid 类固醇Amphipathic 两性的Hydrophilic 亲水的Bulky 体积大的self-assemble 自组装的fluidity 流动性rotational 转动的lateral 侧向的Fluid mosaic model 流体镶嵌模型Integral 整体的、内在的Flip 翻跟头integral membrane proteins 内在膜蛋白peripheral membrane proteins外周膜蛋白asymmetry 不对称asymmetrically 不对称地membrane-spaning protein 跨膜蛋白Multiple 多重的Lipid-anchored proteins 脂锚定蛋白Heterokaryon 异核体Fusion 融合Reconstitution 重建Reincorporated 重新合并Extracellular 细胞外的Intercellular 细胞内的Passive transport 被动运输active transport 主动运输concentration 浓度diffusion 扩散saturable 可饱和的facilitated 协助的、推动的symport 同向运送antiport 逆向运送epithelial cells 上皮细胞exocytosis 分泌作用endocytosis 内吞作用phagocytosis 吞噬作用pinocytosis 胞饮作用Receptor mediated endocytosis fusion受体介导的内吞作用debris 碎片transduction 转导Lipophilic 亲脂性的Receptors 受体second messengers 第二信使第五章Nucleic acid 核酸Replication 复制Nucleotide 核苷酸Pyrimidine 嘧啶Guanine 鸟嘌呤Thymine 胸腺嘧啶Cytosine 胞嘧啶Nucleoside 核苷Deoxyribonucleoside 脱氧核糖核苷ribonucleoside 核糖核苷deoxyribonucleotide 脱氧核糖核苷酸genes 基因complementarily 互补地nucleosome 核小体loop 突环rosette 玫瑰花结semi-conservative 半保留的polymerase 聚合酶template 模板primer 引物fork 叉Bidirectional 双向的Okazaki fragments 冈崎片段semi-discontinuous 半不连续的strand 链、一股hybridization 杂交melting temperature 熔融温度renaturation 复性labeled 标记的fluorescent 荧光的tag 标记、标签annealing 退火amplify 增强、扩大The central dogma 中心法则Transcription 转录initiation 起始Elongation 延伸termination 终止promoters 启动子palindrome 回文结构processing 加工splicing 拼接reverse transcription 逆转录第六章genetic code 遗传密码intermediate 中间的、媒介codons 密码子unambiguous 明确的correspond 相应、符合degenerate 简并的mutation 变异incorporation 合并nonoverlapping 不相重叠的reading frames 阅读框aminoacyl-tRNA 氨酰-tRNA peptidyl-tRNA 肽酰-tRNA stem 茎、干、臂anticodon 反密码子translocation 移位第七章metabolism 代谢Saccharides 糖类monosaccharides 单糖aldehyde group 醛基ketone group 酮基Stereoisomers 立体异构体Oligosaccharides 寡糖Glycosidic bond 糖苷键Polysaccharides 多糖Starch 淀粉Cellulose 纤维素Dextran 葡聚糖Amylose 直链淀粉amylopectin 支链淀粉Glycolysis 糖酵解Cytoplasm 细胞质Glucose 葡萄糖Galactose 半乳糖Mannose 甘露糖Sucrose 蔗糖Trehalose 海藻糖Lactose 乳糖Hexokinase 己糖激酶Fructose 果糖Phosphoglucoisomerase 磷酸葡萄糖变位酶Bisphosphate 二磷酸glyceraldehydes 甘油醛dihydroxyacetone 二羟丙酮aldolase 醛缩酶triose 丙糖1,3-bisphosphoglycerate 1,3 二磷酸甘油酸dehydrogenase 脱氢酶3-phosphoglycerate 3-磷酸甘油酸kinase 激酶mutase 变位酶phosphoenolpyruvate 磷酸烯醇式丙酮酸enolase 烯醇化酶pyruvate 丙酮酸Gluconeogenesis 糖异生Noncarbhydrate 非糖的Liver 肝脏skeletal muscle 骨骼肌phosphorylase 磷酸化酶Phosphorolysis 磷酸化pyrophosphorylase 焦磷酸化酶glucosyl 葡萄糖基nonreducing end 非还原端Epinephrine 肾上腺素glucagon 胰高血糖素。
考研植物生理学与生物化学(414)研究生考试试题及答案指导
研究生考试考研植物生理学与生物化学(414)复习试题(答案在后面)一、选择题（植物生理学部分，10题，每题2分，总分20分）1、植物体内负责CO2固定和光合磷酸化反应的细胞器是：A、线粒体B、叶绿体C、内质网D、高尔基体2、在植物生物化学中，以下哪种物质不是光合作用初级产物？A、葡萄糖B、三磷酸腺苷（ATP）C、还原型辅酶NADPHD、丙酮酸3、植物细胞中，以下哪种酶是光合作用过程中催化水的光解反应的关键酶？A、光合色素B、ATP合酶C、NADP+还原酶D、水光解酶4、题目：下列关于植物细胞呼吸的描述，错误的是：A. 植物细胞呼吸是细胞获取能量的主要途径。
B. 有氧呼吸和无氧呼吸都是植物细胞呼吸的方式。
C. 有氧呼吸产生的主要产物是水。
D. 无氧呼吸的最终产物是酒精和二氧化碳。
5、题目：以下哪种酶与植物光合作用的碳反应有关？A. ATP合成酶B. 磷酸戊糖途径中的酶C. 光合作用中的光反应酶D. 水合酶6、题目：以下哪种植物激素与植物的生长发育无关？A. 赤霉素B. 脱落酸C. 细胞分裂素D. 茁长素7、下列哪种物质是植物光合作用中的光反应阶段产生的？A. ATPB. NADPHC. ADPD. GTP8、植物细胞中，哪种酶在光合作用的暗反应中起关键作用？A. 蛋白质合成酶B. 脱氢酶C. 磷酸化酶D. 磷酸甘油酸激酶9、植物细胞中，哪种色素在光合作用中主要吸收蓝光和红光？A. 叶绿素aB. 叶绿素bC. 胡萝卜素D. 叶黄素10、下列关于光合作用过程中光反应和暗反应的描述，正确的是（）A. 光反应发生在叶绿体的类囊体膜上，暗反应发生在叶绿体基质中B. 光反应需要光能，暗反应需要ATP和NADPHC. 光反应产生ATP和NADPH，暗反应消耗ATP和NADPHD. 光反应和暗反应可以独立进行，互不影响二、实验题（植物生理学部分，总分13分）题目：利用分光光度法测定叶绿素含量实验目的：学习利用分光光度法测定叶绿素含量的原理和方法。
重要酶的知识
生物化学中重要酶的简介黄素腺嘌呤二核苷酸英文名称：flavi n ade nine di nu cleotide;FAD定义：核黄素的一种辅酶形式。
通过接受来自于供体分子的两个电子和来自于溶液的两个质子，参与氧化反应。
黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD, flavin adenine dinucleotide ）是某些氧化还原酶的辅酶，含有核黄素属于需氧脱氢酶类。
黄素腺嘌呤二核苷酸别名：活性型维生素B2;核黄素-5'-腺苷二磷酸一、糖酵解过程中需要的酶1、己糖激酶是别构酶，专一性不强，受葡萄糖 -6-磷酸和ADP的抑制，Km小，亲和性强，可以针对多种六碳糖进行作用。
2、磷酸葡糖异构酶编号：EC 531.9。
糖酵解的第二步反应中，催化葡萄糖-6-磷酸和果糖-6-磷酸之间的可逆转化的酶，反应需要 Mg2+，也可催化 D-葡萄糖-6-磷酸的a- B异构。
有绝对的底物专一性和立体专一性，该酶的活性部位的催化残基可能为赖氨酸和组氨酸。
6-磷酸葡糖酸（6PG）、赤藓糖-4-磷酸（E4P ）、景天庚酮糖-7-磷酸（S7P ）等是其竞争性抑制剂。
3、磷酸果糖激酶PFK编号：EC 2.7.1.11 o催化糖酵解的限速步骤，将ATP上的磷酰基转移给6-磷酸果糖，生成 1 , 6-二磷酸果糖的酶。
PFK是一类激酶，可作用于果糖-6-磷酸。
在糖酵解中和已糖激酶、丙酮酸激酶一样催化的都是不可逆反应，因此这三种酶都有调节糖酵解途径的作用。
可分为两种，分别产生不同产物：由磷酸果糖激酶1作用可得果糖-1,6-双磷酸。
由磷酸果糖激酶2作用可得果糖-2,6-双磷酸。
磷酸果糖激酶会受到高浓度ATP的抑制，高的 ATP浓度会使该酶与底物果糖-6-磷酸的结合曲线从双曲线形变为 S型。
而柠檬酸就是通过加强ATP的抑制效应来抑制磷酸果糖激酶的活性，从而使糖酵解过程减慢。
因此磷酸果糖激酶是糖酵解作用的限速酶，因此，对此酶的调节是调节酵解作用的关键步骤。
3-磷酸甘油酸激酶试剂盒使用说明
3-磷酸甘油酸激酶试剂盒使用说明微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。
试剂组成和配制提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。
临用前加1mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。
临用前加1mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解。
酶液提取1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。
测定操作1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取微量石英比色皿/96孔板（UV板），依次加入100μL试剂一，20μL试剂二，10μL试剂三，10μL试剂四，40μL试剂五，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2计算公式a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下（1）按照样本蛋白浓度计算酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
第5章-糖代谢
G(Gn) 胞液
丙酮酸
乙酰CoA 线粒体
TCA循环
[O] H2O
NADH+H+
CO2
ATP ADP FADH2
19:46
(一) 反应过程
1.丙酮酸的生成 (同无氧氧化) 2.丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA
丙酮酸进入线粒体，氧化脱羧为乙酰CoA 。
(1)总反应式:
NAD+ , HSCoA CO2 , NADH + H+
19:46
4．循环是不可逆的，整个循环中有三个限速 酶：柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊 二酸脱氢酶复合体。这三个酶促反应是不可 逆的，使三羧酸循环不能逆转，保证了线粒 体供能系统的稳定性。
5．三羧酸循环的中间产物草酰乙酸需要不断 地补充，以保证三羧酸循环始终处于运转状 态，满足组织代谢的生理需要。
可分为三个阶段：
第一阶段:活化裂解阶段
第二阶段:氧化产能阶段
第三阶段: 无氧还原阶段
19:46
(一)糖酵解反应过程
1.活化裂解阶段
反应1：葡萄糖磷酸化为6-磷酸葡
萄糖
HO CH2
P O CH2
H H OH
HO
O
H ATP
ADP
Mg2+
H OH
己糖激酶
H H OH
HO
OH H OH
H OH
(hexokinase)
(1)三羧酸循环乙酰CoA与草酰乙酸缩合成含有3个 羧基的柠檬酸，经历4次脱氢及2次脱羧、1次底物 水平磷酸化反应，最终仍生成草酰乙酸而构成循 环，亦称柠檬酸循环。此名称源于其第一个中间 产物是一含三个羧基的柠檬酸。
所有的反应均在线粒体中进行。
西医综合-生物化学物质代谢(二)
西医综合-生物化学物质代谢(二)(总分：55.00，做题时间：90分钟)一、不定项选择题(总题数：44，分数：55.00)1.在肝细胞受损时血中呈现活性降低的酶是A．LDH B．LCATC．ACAT D．ALTE．AST（分数：1.00）A.B. √C.D.E.解析：[解析] 由于LCAT(卵磷脂胆同醇脂酰转移酶)是在肝合成后分泌入血中发挥作用的，故肝受损释放入血中的LCAT减少。
LDH(乳酸脱氢酶)、ACAT(脂酰CoA胆同醇脂酰转移酶)、ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)等郁是在细胞内发挥作用的，当肝细胞受损，膜通透性增高，这些酶被大量释入血中，所以将呈现酶活性增高。
A．Leu B．GlyC．两者都是 D．两者都不是（分数：2.00）(1).属于生酮氨基酸的是（分数：1.00）A. √B.C.D.解析：(2).可作为合成嘧啶原料的是（分数：1.00）A.B.C.D. √解析：[解析] 生酮氨基酸有亮氨酸(Leu)和赖氨酸(Lys)。
甘氨酸(Gly)在体内经代谢可转变成糖，所以属生糖氨基酸。
嘧啶合成的原料是天冬氨酸(Asp)和氨基甲酰磷酸，后者又是由谷氨酰胺(Gln)与二氧化碳合成的。
2.下列脂蛋白形成障碍与脂肪肝的形成密切相关的是A．CM B．VLDLC．LDL D．HDL（分数：1.00）A.B. √C.D.解析：[解析] 肝内脂酸的代谢途径有二：内质网中的酯化作用和线粒体内的氧化作用。
肝一方面调节脂酸氧化与酯化的关系，另一方面调节乙酰CoA进入三羧酸循环氧化分解与合成酮体的关系。
肝和脂肪组织之间不断进行脂酸的交换。
饥饿时脂库脂肪动员，释放的脂酸进入肝内代谢。
肝从血液中摄取脂酸的速度与其血液浓度呈正比。
此时，肝内脂酸β氧化能力增强，产生酮体供脑组织等应用。
肝是体内产生酮体的惟一器官。
肝氧化脂酸的能力有限，但酯化脂酸的能力很强。
饱食后，肝合成脂酸，并以三酰甘油的形式贮存于脂库。
肝合成三酰甘油、磷脂和胆固醇，并以VLDL的形式分泌入血，供其他组织器官摄取与利用。
3-磷酸甘油酸激酶检测
3-磷酸甘油酸激酶检测
3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase）是糖酵解的关键酶，也是生物得以生存的关键酶。
广泛存在于动植物和微生物体内，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的试剂盒，可实现高效、精准的3-磷酸甘油酸激酶的活性变化。
此外，我们还提供其他光合作用类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定3-磷酸甘油酸激酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 3-磷酸甘油酸激酶活性信息。
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货号：MS2208 规格：100管/96样
3-磷酸甘油酸激酶
（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义；
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理；
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器；
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制；
提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。
临用前加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。
临用前加1 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加4 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取；
①总PGK酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体PGK酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液），冰浴匀浆后于4℃，500g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定叶绿体中PGK酶活性。
建议测定总PGK酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK，则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作；
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
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2.取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL试剂一，20μL试剂二，10μL试剂三，10μL
试剂四，40μL试剂五，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s 的吸光值A2，△A=A1-A2
计算公式；
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr （2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，
5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b.用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr （2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
第2页，共2页。