附子古今不同炮制方法分析比较

2019年第9期广东化工

第46卷总第395期·21·附子古今不同炮制方法分析比较

张家楠，解育静，汤丹，王淑美*

(广东药科大学中药学院，国家中医药管理局中药数字化质量评价技术重点研究室，广东省(高校)中药质量工程技术研究中心，广东广

州510006)

Analysis and Comparison of Different Processing Methods of Aconite

Zhang Jia’nan,Xie Yujing,Tang Dan,Wang Shumei*

(College of Traditional Chinese Medicine,Guangdong University of Pharmaceutical Sciences,Key Research Laboratory of Digital Quality Evaluation Technology of Traditional Chinese Medicine of State Administration of Traditional Chinese Medicine,Guangdong(University) Engineering and Technology Research Center of Traditional Chinese Medicine Quality,Guangzhou510006,hina)

Abstract:OBJECTIVE:Compare the contents of alkaloids in different processing methods of aconite and to study the differences between modern and ancient processing methods.METHODS:Prepare monkshood by the method recorded in ancient books.The contents of six alkaloids in monkshood prepared by different methods were determined by high performance liquid chromatography.RESULTS:No diester alkaloids were detected in the Pharmacopoeia method.The amount of diester alkaloids in steamed and fried slices decreased effectively.The content of diester alkaloids in the processed slices by the ancient method did not meet the requirements of the pharmacopoeia.CONCLUSION:Modern processing methods have strong attenuation ability,while ancient processing methods have weak attenuation ability.Ancient processing methods may increase the amount of monoester alkaloids,and its efficacy is superior to that of Chinese Pharmacopoeia.

Keywords:aconite root;processing；high performance liquid chromatography；content comparison

附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.的子根的加工品。味辛、甘，性大热，具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪的功效[1]。附子是四川历史悠久的道地药材。附子中的有效成分是乌头类生物碱，是有效成分，同时也是毒性成分，必须经过炮制减毒才能在临床上使用。附子最早记载的产地是西汉时期的《范子计然》[2]。附子入药史载于《神农本草经》，汉代的著作就已经有记载附子减毒的炮制方法。中国历代医书都有对附子的炮制方法的介绍，有着丰富的记载例如：蒸、炒、炮、煮、煨等传统的减毒炮制方法。清代《握灵本草》蒸制有“去皮蒸过”

[3]，元代《寿世保元》记载“炒法”[4]，北宋《圣济总录》提到附子“炮裂，去皮脐”[5]，《太平圣惠方》也有记载“炭火烧令黑色，勿令药过取出”[6]，《备急千金要方》中则有“搪灰炮”的方法[7]。附子在古代更多使用传统的炒制法、蒸制法和炮法进行减毒以《四川中药饮片炮制规范》中记载的炒制法与蒸制法与《中国药典》中炮制方法所得饮片，及古代炮制方法制得附子饮片做对比。检测附子饮片中6种生物碱含量，通过数据分析对比不同炮制方法对附子有效成分和毒性成分的影响。经研究发现，古代炮制方法所得饮片可增加疗效好、毒性小的单酯类生物碱含量，但其减毒能力劣于现代炮制方法。

1仪器、试剂与材料

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A二极管阵列检测器；电子分析天平(十万分之一，北京赛多利斯仪器系列有限公司)；KQ-251DA数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率300W，频率40kHz)。乙腈、四氢呋喃为色谱纯(Oceanpak 公司)，异丙醇、乙酸乙酯、冰醋酸、醋酸铵、三氯甲烷为分析纯(北京化学试剂公司)。

对照品：苯甲酰乌头原碱(批号CHB160912)、苯甲酰新乌头原碱(批号CHB171203)、苯甲酰次乌头原碱(批号CHB170324)、新乌头碱(批号CHB160713)、次乌头碱(批号CHB160722)和乌头碱(批号CHB160619)购于成都克洛玛生物科技有限公司。

白附片(批号：1701001，170601，170701，170801，170901)、黑顺平(批号：170201，170301，170401，170501，170502)、炮附片(黑顺片)(批号：1712021-1712025)炮附片(白附片)(批号：1712011-1712015)：四川鑫临附子药业有限公司根据《中国药典》炮制方法生产。

蒸附片(批号：18071-18073)炒附片(批号：180801-180803)：四川鑫临附子药业有限公司根据《四川省中药饮片炮制规范》[8]炮制方法生产。

古法炮制附子(批号：GF01-GF04)：取灶灰铺于铁锅中，灰上架木柴，点燃木柴后燃烧至无明火时埋入附子，至8min后每分钟拣出附子进行检查，至附子表面干燥可开裂，表皮与肉质分离时全部取出。用竹刀削去表皮和脐后整颗放入烘箱中烘干。

古法炮制附子由四川鑫临附子药业有限公司指导炮制。

2方法与结果

2.1色谱条件

根据2015版《中国药典》附子含量测定项下液相条件，选择岛津ODS-HL C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-四氢呋喃(25∶15)为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液(每1000mL 加冰醋酸0.5mL)为流动相B，梯度洗脱，0~48min，15%~26%A；48~49min，26%~35%A；49~58min，35%A；58~65min，35%~15%A。检测波长：235nm；柱温：30℃；流速：0.8mL/min；进样量：10μL。

2.2对照品溶液的制备

精密称取苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，加异丙醇-二氯甲烷(1∶1)混合溶液制成浓度分别为0.0101mg/mL、0.0100mg/mL、0.0101mg/mL 的混合溶液，即得。

精密称取新乌头碱、次乌头碱和乌头碱对照品适量，加异丙醇-二氯甲烷(1∶1)混合溶液制成制成浓度分别为0.0051mg/mL、0.0051mg/mL、0.0052mg/mL的混合溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

精密称取上述各饮片过三号筛粉末约2g，置50mL具塞锥形瓶中，分别加3mL氨试液，再精密加入50mL乙酸乙酯-异丙醇(1∶1)混合溶液，称定重量，超声30min(期间加冰水以维持水温不超过25℃)，放冷后称重并用异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液补足重量，过滤，精密量取25mL续滤液，35℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入3mL二氯甲烷-异丙醇(1∶1)混合溶液溶解，过滤，取续滤液，即得。

2.4样品检测结果

按照2015版《中国药典》规定的附子含量测定方法，检测附

[收稿日期]2019-04-18

[基金项目]国家自然科学基金资助项目(81473413，81274060，8177141835)

[作者简介]张家楠，女，安徽人，硕士研究生，主要研究方向为中药质量分析与评价。

*为通讯作者：王淑美，女，博士，教授，研究方向为中药质量控制。