TSQVantage质谱仪测定两种多肽类药物戈舍瑞林和艾塞那肽

图1 戈舍瑞林结构式

图2 艾塞那肽结构式

实验部分

2.1仪器与试剂

TSQ Vantage串联质谱仪(赛默飞世尔科技 Thermo

表1)；流速：0.20mL/min；进样体积：10 µL

。

戈舍瑞林质谱条件： ESI正离子模式。喷雾电压：4.0KV; 鞘气：25 arb；辅助气：10 arb；毛细管温度：380˚C；碰撞气：氩气(1.5 mtorr)。采用选择反应监测(SRM)扫描模式，戈舍瑞林的SRM参数见表3。

艾塞那肽色谱条件：Thermo Hypersil Gold C18柱(100×2.1mm，3 µm)，柱温35 ˚C；流动相A: 0.2%甲酸水溶液，流动相B：甲醇，采用梯度洗脱(洗脱程序见表2)；流速：0.20mL/min；进样体积：10 µL

。

艾塞那肽质谱条件： ESI正离子模式。喷雾电压：4.5KV; 鞘气：35 arb；辅助气：10 arb；毛细管温度：350˚C；碰撞气：氩气(1.5 mtorr)。采用选择反应监测(SRM)扫描模式，艾塞那肽的SRM参数见表3

。

结果与讨论

3.1 LC-MS/MS方法优化及灵敏度考察

经优化流动相和质谱参数，采用ESI正离子模式检测，经各质谱参数优化后，两种多肽类药物戈舍瑞林和艾塞那肽均有很高的灵敏度，定量限分别为2pg/mL和20pg/ mL。碰撞能量优化结果见图3(a)和图3(b)。在该实验条件下所得典型LC-MS/MS色谱图见图4(a)-图4(d)。

3.2 方法的线性和重复性考察

戈舍瑞林：将浓度为1mg/mL的混合标准溶液逐级稀释成1000，200，100，20，10，5，2 pg/mL系列标准溶液，分别进样分析。以分析物子离子色谱峰面积对质量浓度作标准曲线，所得线性方程及线性系数见图5(a)。

2 pg/mL 图3(a)

戈舍瑞林碰撞能量优化图3(b)

艾塞那肽碰撞能量优化

用文献

Application Notes

结论

本文通过TSQ Vantage 质谱仪建立的两种多肽类化合物戈舍瑞林和艾塞那肽的高效液相色谱－电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)检测方法。该方法灵敏度高，定量限分别达到了2pg/mL 和20pg/mL ，标准曲线线性良好，重复性满足要求。

除了考察标准溶液，实验中我们还以犬血浆基质预处理后添加样品(2ng/mL)为分析对象，分别考察了分辨率分别为FMWH=0.7和FMWH=0.2时的性噪比和选择性。结果表明，分析戈舍瑞林时，FMWH=0.2时样品的性噪比S/N 提高2.3倍，选择性增强；分析艾塞那肽时，FMWH=0.2时样品的性噪比S/N 提高了5倍，同时在复杂基质中极大地改善了色谱上的分离度。结果表明，TSQ Vantage 具有的高选择性离子检测模式可以极大地改善在复杂基质中样品的选择性和性噪比，尤其在血浆和组织这

样复杂的生物样本中优势更为明显。

样品连续进样三次，RSD 为7.36%，重复性满足要求。

艾塞那肽：将浓度为1mg/mL 的混合标准溶液逐级稀释成2000，1000，200，100，50，20pg/mL 系列标准溶液，分别进样分析。以分析物子离子色谱峰面积对质量浓度作标准曲线，所得线性方程及线性系数见图5(b)。2 0pg/mL 样品连续进样三次，RSD 为9.17%

，重复性满足要求。

图5(a)

戈舍瑞林标准曲线

图5(b)艾塞那肽标准曲线