实验一 微生物培养基的制备与灭菌
实验一培养基的配制及灭菌
实验一培养基的配制及灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、别离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。
在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。
培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。
培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。
一、实验目的1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2．明确培养基的配制原理。
3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。
4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。
二、实验原理灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。
消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。
灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而到达灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高〔160～170℃〕，时间长〔1～2h〕。
但干热灭菌温度不能超过 180℃。
否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两
两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
(3) 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，
维持3---5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气方法：先将排气 阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀，等到压力表指针回到零， 关闭排气阀。
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 （由一个菌体
生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；
灭菌终了，自然缓慢降压回零；
灭菌结束，趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作：分6组，5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml）
每组需要做的其它工作
（1）每组包1ml吸管5支（塞棉花）（示范） 。 （2）每组包培养皿2包（每包6个） （示范）。 （3）每组装9ml无菌水5管。 （4）每组装20ml无菌水2瓶（50ml三角瓶，内有玻璃珠）。
（5）装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适
微生物实验
①标 本
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水
平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可 变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的 中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
实验一培养基的配置、灭菌与无菌操 作技术
1、明确培养基的配制原则，掌握配制培养基的一般方法 和步骤； 2、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法，了解玻璃器皿的灭 菌方法和原理； 3、了解几种常用灭菌方法的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，。
微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭 菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包 装方法均有一定的要求。清洁的玻璃器皿是实验 得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防 止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若 用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎。
为什么要将培养基倒置培养？
显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因
此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工 具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握 不同显微镜的使用方法是很有必要的。
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学 显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微 镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显 微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。
一、目的要求 1.学习显微镜的结构、功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.学习微生物涂片、染色的操作技术；
4.掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；
5.掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。
微生物学实验-1培养基的制备与高压蒸汽灭菌
2. 放回内层锅，并装入待灭菌物品。 放回内层锅，并装入待灭菌物品。
3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的 加盖， 排气槽内。 排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相 对的两个螺 栓。
4. 通电加热，待冷空气完全排尽后，关上排气 通电加热，待冷空气完全排尽后， 阀。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维 当锅内压力升到所需压力时，控制热源， 持压力至所需时间。本实验用 持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121.5℃， ， ℃ 20min灭菌。 灭菌。 灭菌 5. 灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅 灭菌所需的时间到后，关闭电源， 内温度自然下降，当压力表降至“ 时 内温度自然下降，当压力表降至“0”时，打开排 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6. 将取出的灭菌培养基放入 ℃温箱培养 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h， ， 经检查若无杂菌生长，即可待用。 经检查若无杂菌生长，即可待用。
6. 加塞 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保 证有良好的通气性能。 证有良好的通气性能。 7. 包扎 在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时 在棉塞外包一层牛皮纸， 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养 基名称、组别、配制日期。 基名称、组别、配制日期。 8. 灭菌 将上述培养基以 0.103 MPa 121℃ ， ℃ 20min高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌
实验目的
了解高压蒸汽灭菌的基 本原理及应用范围。 本原理及应用范围。 学习高压蒸汽灭菌的操 作方法。 作方法。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。
培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。
本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。
二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。
2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。
注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。
2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。
使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。
2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。
过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。
加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。
冷却后的培养基可以用于微生物的培养。
三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。
设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。
高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。
设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。
压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。
常用的方法包括接种试验和平板计数法。
接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，保证培养基无菌，为微生物实验提供良好的生长条件。
一、培养基的制备。
1.1 培养基的组成。
培养基是微生物生长和繁殖的营养物质，通常包括碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。
根据不同微生物的需求，培养基的组成也有所不同。
1.2 制备步骤。
（1）称取适量的葡萄糖、蛋白胨、氯化钠等原料；（2）加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（3）调节pH值，通常为7.0-7.2；（4）分装至试管或培养皿中，加入琼脂（如需要固体培养基）；（5）高压蒸汽灭菌15分钟。
二、培养基的灭菌实验。
2.1 灭菌方法。
培养基的灭菌是为了保证培养基中无菌，通常采用高压蒸汽灭菌法。
在高压下，微生物及其孢子、病毒等能够被有效杀灭。
2.2 实验步骤。
（1）将制备好的培养基分装至试管或培养皿中；（2）密封好容器，放入高压灭菌锅中；（3）加水至适当高度，密封锅盖；（4）加热至121摄氏度，压力达到1.05kg/cm2后开始计时，持续15分钟；（5）关火，等待冷却后取出培养基。
实验结果，经过高压蒸汽灭菌处理后，培养基中无任何微生物生长。
证明培养基已达到无菌状态，可以用于微生物的培养和实验。
结论，通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物实验提供了良好的条件。
同时，也加深了对无菌技术的理解和应用。
参考文献：[1] 陈华. 微生物学实验指导. 北京，高等教育出版社, 2015.[2] 王明. 实验室微生物学. 上海，上海科学技术出版社, 2018.以上为培养基的制备与灭菌实验报告。
（文档结束）。
微生物培养基配制实验报告（共5篇）
微生物培养基配制实验报告(共5篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
实验一微生物培养基的配制灭菌及纯培养
今天接种的菌种：
枯草杆菌
芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3
微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。
菌落外表粗糙不透明，污白色或微黄色，在液
体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。广泛分布
在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故
名。
大肠杆菌 需氧及兼性厌氧。G－短杆菌，周鞭毛，
有动力，周身有菌毛。
变形杆菌
为革兰氏染色阴性、无芽胞、无荚膜、周身鞭
毛、运动活泼、两端钝圆的小杆菌。兼性厌氧。有些
种在普通固体培养基上菌落呈迁徙生长。
在自然界中存在极广，水、泥土、阴沟及各种
腐败的动、植物中最多，也存在于安康人和动物的肠
道中。它们是条件致病菌，在特殊情况下对人致病，
如食物中毒、尿路感染、夏季腹泻或其他混合感染。
培养基的介绍
培养基
是指由人工配制的、适合微生物生长 繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
营养物质的浓度要适宜 营养物质之间的配比要适宜
培养基的pH值、渗透压、 水活度和氧化复原电势等 物理化学条件要适宜。
通常培养条件：
细菌： pH 7.0~8.0 放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0 霉菌：pH 4.0~5.8 藻类： pH 6.0~7.0 原生动物： pH 6.0~8.0
培养基的灭菌
高压蒸气灭菌 一般培养基: 121.3℃, 15-30 min 含糖培养基: 112.6 ℃, 15-30 min
器皿的灭菌： 干热空气： 160℃， 2 小时
无菌室的消毒： 紫外光 化学药物熏蒸〔苯酚；高锰酸
钾+甲醛〕
二、 微生物的纯培养 〔微生物的培养特征〕
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验打下基础。
一、培养基的制备。
1.准备所需试剂和设备，蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、蒸馏水、培养皿、量筒、坩埚、移液器等。
2.称取适量蔗糖、蛋白胨、酵母提取物加入蒸馏水中，充分溶解后调节pH值至7.0。
3.加入适量琼脂，搅拌均匀。
4.分装至培养皿中，待凝固后进行灭菌处理。
二、培养基的灭菌。
1.将制备好的培养基装入培养皿中，封口。
2.将培养皿放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理。
3.灭菌条件，121℃，压力为15psi，持续20分钟。
4.取出培养皿，放置在无菌工作台上待凉，避免细菌再次污染。
5.观察培养基表面是否有凝固不均匀或气泡，如有则说明灭菌不彻底，需重新处理。
三、实验结果。
1.经过灭菌处理的培养基表面平整，无气泡，无明显异物。
2.在无菌条件下打开培养皿，用无菌移液器移取适量微生物菌种接种于培养基表面。
3.将接种好的培养皿放入培养箱中，进行培养观察。
4.培养箱条件，温度控制在37℃，培养时间根据不同微生物而定。
四、实验结论。
本次实验通过制备培养基和灭菌处理，成功培养出微生物菌种，并观察到了微生物的生长情况。
培养基的制备和灭菌是微生物实验中非常重要的步骤，只有保证培养基的无菌，才能得到准确的实验结果。
通过本次实验的学习，相信对于今后的微生物实验有了更深入的认识和理解。
五、实验注意事项。
1.在制备培养基时，需注意称取试剂的准确性和加入顺序。
2.灭菌处理时，要确保培养基充分接受高压蒸汽的灭菌作用。
3.实验操作要在无菌条件下进行，避免外界污染。
4.培养箱的温度和培养时间要根据不同微生物的生长特性进行调整。
六、实验延伸。
在今后的实验中，可以尝试不同种类的培养基制备和灭菌处理，观察其对微生物生长的影响，进一步探索微生物的生长规律和特性。
总之，培养基的制备和灭菌是微生物实验中不可或缺的重要环节，只有掌握了这些基本技能，才能进行准确可靠的微生物实验。
微生物培养基的配置与灭菌实验报告
微生物培养基的配置与灭菌实验报告好嘞，今天咱们来聊聊微生物培养基的配置和灭菌实验。
这可是个既有趣又重要的话题，咱们的日常生活中其实离不开这些小家伙，微生物在我们身边随时随地都在忙碌着呢。
你知道吗？微生物就像是自然界的“小工人”，它们能帮助分解有机物，促进土壤肥沃，甚至在我们的消化系统里默默奉献，真是少不了的好帮手。
咱们得搞清楚什么是培养基。
哎呀，简单来说，培养基就是给微生物提供食物和环境的“餐桌”。
就像我们吃饭需要饭菜一样，微生物在实验室里也需要专门的培养基来成长。
想象一下，咱们在厨房里准备晚餐，得有米、有菜、还有调料才能做出美味的菜肴。
微生物也一样，它们需要各种营养成分，比如糖、氨基酸和矿物质。
培养基的配方千变万化，各种各样，简直就像厨师的秘制菜谱，谁的手艺好，微生物就长得快。
说到培养基的配置，首先得准备好所有的原料，像是买菜一样，得有计划。
我们常用的有营养琼脂、LB培养基等等。
把它们混合在一起，就像调配饮料，得按比例来。
把干粉加到水里，搅拌均匀，直到它们彻底溶解。
这个过程其实蛮有趣的，看到那些粉末在水里渐渐消失，心里总会有种成就感。
然后，把这个混合物倒进试管或者培养皿里，接着就要加热了，嘿，这时候的关键环节来啦。
就要进行灭菌了。
为什么要灭菌呢？因为咱们可不想在实验里“招来”一些不速之客，别让那些坏微生物跟我们争食。
一般来说，咱们用高温灭菌，最常见的就是高压蒸汽灭菌，听起来就很专业对吧？简单来说，就是把培养基放进一个像锅一样的设备里，给它加热、加压，这样细菌和其他微生物就会被消灭得干干净净。
想想看，微生物们在高温高压的环境下，一定是心里发慌，忙着逃命。
经过灭菌的培养基就可以冷却，等温度适中后，可以用无菌操作将其倒入预先准备好的培养皿中。
这个过程可不能马虎哦，手一定要保持干净，避免二次污染。
别小看这一步，有时候一不小心就会把外面的细菌带进去，这样一来，实验的结果可就全毁了。
就像是做饭的时候不小心把沙子洒进去，谁还敢吃啊。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的：掌握培养基制备的基本操作技巧，理解培养基的重要性以及灭菌操作的必要性。
实验原理：培养基是一种提供营养物质和环境条件的物质，用于微生物的培养和繁殖。
通常包括碳源、氮源、无机盐和其他必需营养物质等。
培养基的配制主要包括以下步骤：1.称取所需的化学试剂和溶质，按照一定比例称取固体试剂和溶液试剂。
2.将固体试剂加入蒸馏水中，溶解并搅拌均匀。
然后加入相应量的溶液试剂。
3.调节溶液的pH值，通常使用酸和碱进行调节，直至达到所需的pH 值。
4.将培养基溶液装入培养瓶或试管中，密封和标记。
灭菌操作是为了杀灭或去除试验中的微生物，以保证实验的可靠性和安全性。
常见的灭菌方法有高温热处理、高压灭菌和化学灭菌等。
实验材料和设备：1.培养基配制所需化学试剂和溶液。
2.培养瓶和试管。
3.电子天平、酸碱仪和pH计。
4.高压灭菌锅。
实验步骤：1.根据实验要求选择合适的培养基配方。
2.按照所需比例称取固体试剂和溶液试剂。
3.将固体试剂加入适量蒸馏水中，溶解并搅拌均匀。
4.加入相应量的溶液试剂。
5.使用酸和碱调节溶液的pH值，直至达到所需值。
6.将培养基溶液装入培养瓶或试管中，密封和标记。
7.准备好待灭菌的培养基样品和高压灭菌锅。
8.将培养基样品放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌操作。
9.灭菌结束后取出培养基样品，观察样品的无菌性。
实验结果：制备完成的培养基溶液应该是透明且无悬浮物的。
经过高压灭菌处理后的培养基样品应该是无菌的，没有任何微生物的生长。
实验讨论：在实验中，我们使用了高压灭菌锅进行灭菌操作。
高压灭菌通常可以在较短时间内灭菌，且能够彻底杀灭微生物，保证培养基的无菌性。
然而，操作时需要注意灭菌锅的安全使用，并遵循相应的操作规程，确保操作人员的安全。
总结：通过本实验，我掌握了培养基制备的基本操作技巧，了解了培养基的重要性以及灭菌操作的必要性。
制备无菌培养基是微生物实验中的基础工作，对于后续实验的结果和判断具有重要影响。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的1、了解培养基的制备原理和方法。
2、掌握培养基的灭菌技术和操作流程。
3、熟悉无菌操作的基本要求和注意事项。
二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养目的和微生物的特点来选择和配制合适的培养基。
培养基的制备一般包括以下几个步骤：计算、称量、溶解、调节pH 值、分装、包扎。
灭菌是指用物理或化学方法杀死或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的过程。
常用的灭菌方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌等。
本实验采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
三、实验材料与设备1、实验材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂1mol/L NaOH 溶液1mol/L HCl 溶液蒸馏水2、实验设备电子天平高压蒸汽灭菌锅电炉移液管锥形瓶培养皿玻璃棒pH 试纸四、实验步骤1、培养基的制备计算：根据配方计算所需各种成分的用量。
称量：用电子天平准确称量各种成分。
溶解：将称量好的成分依次加入到一定量的蒸馏水中，在电炉上加热搅拌，使其完全溶解。
调节 pH 值：用 1mol/L NaOH 溶液或 1mol/L HCl 溶液调节培养基的 pH 值至所需值（本实验中为 72-74）。
分装：将配制好的培养基趁热分装到锥形瓶和培养皿中。
锥形瓶的装量一般不超过其容积的 2/3，培养皿的装量一般为 15-20ml。
包扎：在锥形瓶口和培养皿盖上包上牛皮纸或报纸，用绳子扎紧。
2、灭菌检查灭菌锅的水位和安全阀，确保正常。
将包扎好的培养基放入灭菌锅中，注意不要摆放过于紧密。
关闭灭菌锅的盖子，拧紧螺丝。
设定灭菌条件：一般为 121℃，15-20min。
启动灭菌锅，开始灭菌。
灭菌结束后，待压力降至零，打开灭菌锅的盖子，取出培养基。
3、无菌检查将灭菌后的培养基放置在 37℃的恒温培养箱中培养 24-48h，检查有无杂菌生长。
五、实验结果与分析1、培养基的制备成功按照配方配制出了所需的培养基，外观呈均匀的液体状态，无沉淀和浑浊现象。
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实验一微生物培养基得制备与灭菌(８课时）
一、目得要求
1、学习配制微生物培养基得一般方法与步骤。
2、掌握高压蒸汽灭菌得原理与操作方法。
二、基本原理
正确掌握培养基得配制方法就是从事微生物学实验工作得重要基础。
由于微生物种类及代谢类型得多样性，因而用于培养微生物得培养基得种类也很多，它们得配方及配制方法虽各有差异,但一般培养基得配制程序却大致相同,例如器皿得准备，培养基得配制与分装,棉塞得制作，培养基得灭菌,斜面与平板得制作以及培养基得无菌检查等基本环节大致相同.
三、实验材料
1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、１ｍｏl/Ｌ得NaＯH与１moｌ/L HCl溶液。
２、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿与玻璃棒等.
３、其她物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳与注射器等。
四、操作步骤
(一）玻璃器皿得洗涤
玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净,然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。
（二）牛肉膏蛋白胨培养基得配制
1、培养基配制
（１)称量：按培养基配方计算出各成分得用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中.
注意:称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。
称药品用得药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
（2）溶解:用量筒称量所需体积得水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，倒入烧杯中,用玻璃棒搅动溶解即可。
(3）调ｐH：一般用pＨ试纸测定培养基得pH，可用1mｏl/Ｌ NａOH或1mol/L H Ｃl溶液进行调节。
调节ｐH时,应逐滴加入NaOH或HＣI溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分.边加边搅拌,并不时用PH试纸测试,直至达到所需ｐH 为止。
注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子得浓度。
2、制备液体培养基
（1)用量筒准确量取2０mｌ培养基，倒入100ｍl三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
注意:倒溶液时不要把瓶口沾湿。
包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。
3、制备固体培养基
（1)平板培养基
Ａ、用量筒准确量取100ml培养基，倒入２５0ml三角瓶中，加入２g琼脂粉,塞好棉塞,用报纸包好瓶口并用棉线包扎好,灭菌.
Ｂ、将洗净烘干得培养皿用报纸包扎好，灭菌。
C、在超净工作台中,将装在三角瓶中已灭菌得琼脂培养基冷至５０℃左右倾入无菌培养皿中.温度过高时,皿盖上得冷凝水太多；温度低于50℃,培养基易于凝固而无法制作平板。
平板得制作应在火旁进行,左手拿培养皿，右手拿三角瓶得底部,左手同时用小指与手掌将棉塞打开,灼烧瓶口,用左手大拇指将培养皿盖打开，倾入1０—1５ml培养基,迅速盖好皿盖,置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中,冷凝后即成平板。
(2)斜面培养基
Ａ、用量筒量取１０0mｌ培养基,倒入一个烧杯中，加入２g琼脂粉，置于石棉网上加热，用玻璃棒搅动溶解至琼脂粉溶解。
B、将洗净烘干得试管放置在试管架上，用注射器将融化琼脂粉得培养基倒入试管至试管高度得1／4处。
注意:不要将试管口弄脏。
C、待培养基冷却凝固后，塞上棉塞,以2支或4支为一组,用报纸将试管口包扎好,灭菌。
D、灭菌后,趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，便斜面得长度不超
过试管总长得1/２。
１０。
无菌检查将灭菌得培养基放入３7℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁得橱内,备用。
(三)培养基得灭菌
培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定得灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。
（四)培养基得灭菌检查
灭菌后得培养基，一般需进行无菌检查。
最好取出1－2管（瓶）,置于37℃温箱中培养1—２天，确定无菌后方可使用。
五、实验内容
1、根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行烘干与包扎。
2、根据要求配制微生物培养基.
3、掌握用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌.
4、掌握液体培养基、平板培养基与斜面培养基得制备。
六、实验报告
１、记录本实验配制培养基得名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。
2、记录所做培养基得无菌检查结果.
七、实验思考题
１、为什么微生物实验室所用得三角瓶口或试管口都要塞上棉塞才能使用？能否用木塞或棉皮塞代替?
2、配制培养基时为什么要调节pH?
３、高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短?
4、高压蒸汽灭菌得原理就是什么？就是否只要压力表上得指针指到所需得压力时就能达到所需灭菌温度？为什么?
５、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌得培养基如何进行无菌检查?
6、请设计实验对饮料进行无菌检查。
附录高压蒸汽灭菌技术
一、目得要求
了解消毒与灭菌得原理，并掌握各种灭菌方法得操作步骤。
二、实验材料
上述配制得培养基,包扎得培养皿、试管,高压蒸汽灭菌锅，注射器,镊子，玻璃涂棒。
三、基本原理
在微生物实验中,需要进行纯培养,不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养基与工作场所进行灭菌与消毒。
灭菌就是指杀死一定环境中得所有微生物,包括微生物得营养体、芽孢与孢子。
实验室常用得灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。
这些方法得基本原理就是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌得目得。
四、操作步骤
高压蒸汽灭菌就是将物品放在密闭得高压蒸汽灭菌锅内,在一定得压力下保持15—３0分钟进行灭菌.此法适用于培养基、无菌水、工作服等物品得灭菌,也可用于玻璃器皿得灭菌.
将待灭菌得物品放在一个密闭得加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅夹套间得水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内得冷空气从排气阀中排尽,然后关闭排气阀,继续加热，此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌锅内得压力，从而使沸点增高,获得高于1００℃得温度,导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌得目得。
在相同得温度下,湿热灭菌得效果好于干热灭菌。
有三点原因:1、在湿热灭菌中菌体吸收水分,蛋白质容易凝固变性，蛋白质随着含水量得增加,所需凝固温度降低；2、湿热灭菌中蒸汽得穿透力比干燥空气大;3、蒸汽在被灭菌物体表面凝结，释放出大量得汽化潜热，能迅速提高灭菌物体表面得温度，从而增加灭菌效力.
实验室常用得灭菌锅有非自控手提式高压蒸汽灭菌锅与自控式灭菌锅，其结构与工作原理就是相同得。
本实验介绍得就是半自控高压蒸汽灭菌锅,自控式灭菌锅得使用可参考厂家说明书。
具体操作步骤如下:
1、加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量得水,使水面没过加热蛇管,与三角搁架相平为宜。
切勿忘记检查水位,加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起
炸裂事故。
2、装料:放回内层锅，并装入待灭菌得物品。
注意不要装得太挤,以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
装有培养基得容器放置时要防止液体溢出,三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎得纸而透入棉塞。
3、加盖:将盖上与排气孔相连得排气软管插入内层锅得排气槽内，摆正锅盖,对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对得两个螺栓,使螺栓松紧一致，勿使漏气,并打开排气阀。
４、排气：打开电源加热灭菌锅,将水煮沸,使锅内得冷空气与水蒸汽一起从排气孔中排出。
一般认为当排出得气流很强并有嘘声时，表明锅内得空气已排尽,沸腾后约需３分钟.
５、升压：冷空气完全排尽后,关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。
6、保压:当压力表指针达到所需压力时,控制电源,开始计时并维持压力至所需得时间。
如本实验中采用０、１Ｍpａ,１２1、5℃,20分钟灭菌。
注意：灭菌得主要因素就是温度而不就是压力，因此锅内得冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。
７、降压:达到灭菌所需得时间后,切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力表得压力降至“0"后，方可打开排气阀，排尽余下得蒸汽，旋松螺栓,打开锅盖,取出灭菌物品。
压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。
否则就会因锅内压力突然下降，使容器内得培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染,甚至灼伤操作者。
8、无菌检查：将已灭菌得培养基放入３７℃恒温培养箱培养２４ｈ，无杂菌生长后即可使用.。