免疫学检测法汇总
免疫学实验方法
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免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分,它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织,以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面,对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合,再加入酶标记的二抗来进行标记,最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器,它利用激光照射细胞,通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布,对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法,通过电泳将待测蛋白分离,再将其转移到膜上,最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法,通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理,再使用特异性的抗体来标记待测蛋白,并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法,通过将待测抗体与蛋白结合,再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来,最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法,它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用,不仅在科研领域有重要应用,同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
常见免疫学检测方法
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常见免疫学检测方法免疫学检测方法是现代医学中重要的实验技术之一,它通过检测机体的免疫反应来评估机体的免疫状态和检测特定的免疫指标。
下面将介绍常见的免疫学检测方法。
一、酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用的免疫学检测方法。
它利用特异性抗体与待测物质结合,并通过酶标记的二抗或底物的酶作用产生可见的颜色反应,从而定量或半定量地测定待测物质的含量。
ELISA具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,广泛应用于疾病诊断、药物检测、生物学研究等领域。
二、流式细胞术流式细胞术(Flow Cytometry)是一种光学技术,用于分析和计数悬浮细胞或微粒。
该技术通过将待测样品中的细胞或微粒单个地通过激光束,测量其散射光和荧光信号来分析细胞的特性和功能。
流式细胞术可以用于细胞表面标记物的检测、免疫细胞亚群的鉴定、细胞凋亡的检测等。
三、免疫组化免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)是一种通过使用特异性抗体来检测组织中特定蛋白质的方法。
该技术通过将组织切片与特定抗体结合,并利用酶标记或荧光标记的二抗来显示特定抗原的分布和表达量。
免疫组化广泛应用于病理学研究、肿瘤诊断、蛋白质定位分析等领域。
四、免疫印迹免疫印迹(Western Blot)是一种用于检测特定蛋白质的方法。
该技术通过将待测样品中的蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用特异性抗体与目标蛋白结合,并通过酶标记的二抗或荧光标记的二抗来显示目标蛋白的分子量和表达量。
免疫印迹常用于蛋白质的检测、定量和鉴定。
五、免疫荧光免疫荧光(Immunofluorescence)是一种利用荧光标记的抗体来检测特定抗原的方法。
该技术通过将待测样品中的抗原与特异性抗体结合,并利用荧光标记的二抗来显示抗原的分布和表达量。
免疫荧光广泛应用于细胞和组织的定位分析、病毒感染的检测等领域。
临床免疫学检验方法与应用
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临床免疫学检验方法与应用免疫学是一门研究机体对抗病原体、维持免疫平衡的科学,其在临床诊断中起着举足轻重的作用。
免疫学检验方法多种多样,能够准确地检测机体的免疫状态,有助于诊断和治疗各种疾病。
本文将介绍几种常见的临床免疫学检验方法及其应用。
1. ELISA法ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种常用的免疫学检验方法,通过酶标法测定抗体或抗原的存在量。
ELISA法可用于检测HIV、乙肝、梅毒等疾病的抗体水平,也可用于测定药物浓度或病毒载量。
由于ELISA法操作简便、灵敏度高,因此在临床诊断中得到广泛应用。
2. 免疫荧光法免疫荧光法是一种通过检测抗体或抗原在细胞或组织中的荧光信号来进行免疫检测的方法。
免疫荧光法被广泛用于自身免疫性疾病的诊断,如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
通过观察免疫荧光信号的强度和分布,可以判断患者的免疫状态和疾病程度。
3. 免疫印迹法免疫印迹法(Western Blot)是一种通过检测抗体与特定抗原结合而形成的免疫复合物来进行检测的方法。
免疫印迹法主要用于检测蛋白质的表达水平和鉴别不同蛋白质。
在临床上,免疫印迹法常用于肿瘤标记物的检测和分析,有助于早期发现恶性肿瘤。
4. 细胞免疫学方法细胞免疫学是研究机体免疫细胞及其功能的学科,其方法主要包括细胞毒活性测定、淋巴细胞亚群分析、细胞因子测定等。
这些方法在免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应的诊断和治疗中起着关键作用。
5. 其他免疫学检验方法除了上述几种常见的免疫学检验方法外,还有许多其他方法,如流式细胞仪、PCR法、化学发光法等。
这些方法在特定疾病的诊断和治疗中有其独特的应用价值,为临床医生提供了更多的诊断手段和治疗选择。
总结免疫学检验方法在临床诊断中发挥着不可替代的作用,能够帮助医生准确判断患者的免疫状态和疾病情况,指导治疗方案的制定和调整。
不断发展的免疫学技术为医学进步提供了强大的支持,相信随着科学技术的不断创新和进步,免疫学检验方法将在临床应用中发挥越来越重要的作用。
免疫学检验常用的方法有哪些
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免疫学检验常用的方法有哪些免疫学是研究身体对致病微生物的防御能力以及防御能力失调的科学。
自从1796年E.詹纳使用疫苗预防天花后,免疫学研究开始全面深入地认识微生物在疾病中的作用,以及抗体和反抗原细胞的形成、动员、作用和相互作用所扮演的角色。
免疫学的范围涵盖了变态反应的治疗、器官移植后的免疫抑制以避免排异反应,以及对自体免疫疾病和免疫缺陷的研究。
免疫学常用检测方法主要包括免疫荧光组织化学法、抗原检测法、抗体检测法、化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验法等。
一、免疫荧光组织化学法免疫荧光组织化学法严格遵循免疫荧光组织化学基本原理,从基本定义来讲,免疫荧光组织化学以及免疫荧光细胞化学会以荧光为标记物,属于免疫组织化学技术。
早在1942年,Coons等首次在报道中指出用FITC标记抗体,能检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原,这是免疫荧光组织化学技术的基础。
在免疫学检验工作中,免疫组织化学技术是用免疫荧光技术对组织内抗原、细胞或者半抗原物质实施检测,结合抗原抗体反应原理,首先将已知抗原或者抗体标记荧光素制作成荧光标记物,然后,用荧光标记物充当分子探针与组织细胞的相应抗原或者抗体反应,这种复合物的荧光素会在检测过程中发出不同颜色的荧光,用荧光显微镜实施观察,就能够对组织细胞中的抗原或者抗体定性,做好定位与定量研究工作。
在检测过程中,蛋白质、酶、核酸、激素、多肽、多糖、磷脂、受体与病原体均可以作为抗原或者半抗原物质。
二、抗原检测法抗原是进入机体内能附着于淋巴细胞表面引发特定免疫反应的外来物质,几乎所有的异物大分子皆可作为抗原,如细菌、病毒、原虫、食物、毒液以及包括人类在内的各种生物细胞和组织。
抗原上面存在一个或者数个可与淋巴球表面接受体结合的部位,称之为抗原决定部位,当抗原决定部位与淋巴球表面接受体结合后,可以激活淋巴球,使其开始分裂繁殖或者引发一系列免疫反应,如制造抗体和活化杀手细胞等以对抗抗原侵入。
免疫学检验方法有哪些 (3)
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免疫学检验方法有哪些
免疫学检验方法主要包括以下几种:
1. 酶联免疫吸附试验(ELISA):通过将待检样品加入特异性抗体或抗原包被的微孔板中,利用酶标记技术和底物发色反应来检测目标物的浓度或活性。
2. 免疫印迹(Western blot):将蛋白质样品分离并转移到膜上,然后用特定抗体标记的酶或荧光染料检测目标蛋白质的存在。
通常用于检测抗体的特异性和蛋白质的表达量。
3. 免疫荧光染色(Immunofluorescence stning):通过将待检样品与特定抗体结合,并用荧光标记的二抗或直接标记的抗体检测目标物的存在。
4. 免疫组织化学(Immunohistochemistry):将组织切片或细胞片贴培养后,使用特异性抗体和酶、荧光染料或金粒等标记物来检测目标蛋白质在组织或细胞中的表达。
5. 流式细胞术(Flow cytometry):将待检样品中的细胞与特异性抗体结合,并用荧光标记的二抗或直接标记的抗体检测目标细胞的存在和数量。
6. 中和试验(Neutralization assay):通过将待检抗体与病毒或细菌感染的细胞或动物结合,观察抗体是否能够中和病毒或细菌的活性。
7. 结合力测定试验(Binding assay):通过将待检抗体与其靶标物结合,并用荧光标记的二抗或直接标记的抗体检测结合的情况。
以上仅为免疫学检验方法的一部分,根据具体实验目的和样品特点,还可以使用其他更特殊的技术,如免疫电镜
(Immunoelectron microscopy)、免疫贴片(Immunospot assay)等。
常见免疫学检测方法
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常见免疫学检测方法免疫学检测方法是一种通过检测人体免疫系统中特定分子或细胞的存在、数量或功能来评估免疫系统状态的方法。
这些方法在临床诊断、药物研发和疾病监测等领域起着重要作用。
本文将介绍几种常见的免疫学检测方法。
一、酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常见的免疫学检测方法,广泛应用于疾病的诊断和研究中。
ELISA基于抗原与抗体的特异性结合原理,通过固相支持物上的抗原或抗体与待测样品中的相应抗体或抗原结合,然后用酶标记的二抗或二抗-抗体复合物来检测结合物质的存在。
ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点,可用于检测多种物质,如病原体、抗体、激素等。
二、流式细胞术流式细胞术(Flow Cytometry)是一种利用激光技术对细胞进行快速、高通量的分析和分选的方法。
该方法通过将待测细胞标记上与特定抗原结合的荧光染料,然后通过激光束照射,测量细胞上荧光信号的强度和特征,以获得细胞的相关信息。
流式细胞术可用于细胞表面标记物的检测、细胞周期分析、细胞凋亡检测等。
此外,流式细胞术还可以进行单细胞分选,用于获得特定细胞亚群进行进一步的研究。
三、免疫组化免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)是一种通过将抗体与待测组织中的特定抗原结合来检测抗原在组织中的分布和表达水平的方法。
免疫组化方法首先将待测组织样本进行处理,使其能够与抗体发生特异性反应,然后使用荧光染料、酶标记物或金标记物等标记抗体,通过显色或荧光信号来显示抗原的分布情况。
免疫组化方法可用于病理诊断、研究组织中特定蛋白的表达和定位等。
四、免疫电泳免疫电泳(Immunoelectrophoresis)是一种结合电泳和免疫学的方法,用于检测和鉴定蛋白质分子。
免疫电泳通过电泳将蛋白质在凝胶中分离,然后在凝胶上进行抗体与蛋白质的反应,形成免疫沉淀线,通过观察免疫沉淀线的形状和位置来判断蛋白质的类型和数量。
病原微生物的免疫学检测方法
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病原微生物的免疫学检测方法
病原微生物免疫学检测方法是一种重要的实验室检测手段,用于识别和鉴定病原微生物的存在。
以下是几种常见的病原微生物免疫学检测方法:
1. 免疫荧光抗体技术:免疫荧光抗体技术是一种用于检测特定微生物抗体的技术,通常用于细菌和病毒的检测。
该技术利用荧光染料标记抗体,通过荧光显微镜观察样本中的微生物。
2. 酶联免疫吸附试验(ELISA):酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫学检测方法,用于检测特定微生物的抗体或抗原。
该方法通过将微生物抗原或抗体与酶标记物结合,然后通过显色反应进行检测。
3. 免疫印迹试验(Western blot):免疫印迹试验是一种用于检测复杂样品中特定蛋白质的技术,可以用于检测病原微生物的抗原。
该方法通过将样本中的蛋白质印迹到膜上,然后与特异性抗体结合进行检测。
4. 核酸杂交技术:核酸杂交技术是一种用于检测核酸序列的技术,如核酸探针技术和聚合酶链式反应(PCR)。
该方法可以用于检测病原微生物的核酸,如病毒核酸或细菌基因组。
5. 免疫吸附实验(IHA):免疫吸附实验是一种用于检测特定抗体或抗原的系统性免疫学实验。
该方法通过将样本中的抗原或抗体吸附到特定的载体上,然后与特异性抗体结合进
行检测。
这些免疫学检测方法在病原微生物的识别和鉴定中发挥着重要作用,可以提高诊断的准确性和效率。
然而,每种方法都有其优点和局限性,因此在实际应用中需要根据具体情况选择合适的检测方法。
同时,还需要注意操作过程中的质量控制和标准化的实验室程序,以确保检测结果的可靠性和准确性。
免疫学检测法汇总
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免疫学检测法汇总免疫学检测法是现代医学中常用的一种检测方法,通过检测人体免疫系统产生的抗原-抗体反应来确定疾病的存在与否,以及疾病的类型和程度。
免疫学检测法广泛应用于临床诊断、流行病学调查、药物监测和研究等领域。
以下将对常用的免疫学检测法进行汇总。
1.酶联免疫吸附试验(ELISA):ELISA是一种常用的免疫学检测方法,利用酶标技术来检测抗原或抗体的存在。
ELISA分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接荧光ELISA等多种类型,适用于检测各种疾病,如感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等。
2.免疫磁珠技术:免疫磁珠技术是通过抗体与磁性颗粒结合,然后利用磁力分离的原理实现对抗原或抗体的检测。
该技术具有高灵敏度和高特异性的特点,常用于病原微生物的检测、蛋白质的分离等。
此外,免疫磁珠也可用于药物检测、生物分子的富集等。
3. 蛋白质印迹(Western blot):蛋白质印迹是一种用于检测蛋白质的存在和表达水平的方法。
首先将蛋白质分离并转移到膜上,然后利用抗体与目标蛋白质结合,最后通过荧光标记或酶标记的二抗进行信号的检测。
该方法常用于疾病的诊断和研究,如肿瘤标记物的检测和鉴定。
4.免疫组织化学(IHC):免疫组织化学是一种通过对组织切片中特定抗原的免疫反应进行染色来检测该抗原的存在和分布的方法。
该技术应用广泛,在病理学诊断中常用于确定肿瘤的类型和分级、鉴别不同组织类型等。
5.流式细胞术:流式细胞术是一种通过检测细胞表面或内部抗原的免疫反应来对细胞进行分类和分析的方法。
流式细胞术结合免疫标记物和激光技术可以实现对单个细胞的快速高通量检测,常用于免疫细胞亚群的检测、免疫细胞活性的评估等。
6.荧光免疫检测:荧光免疫检测利用荧光标记的抗体或荧光探针与靶分子结合来检测目标物的存在和表达水平。
该技术具有高灵敏度、高分辨率和多重检测的优势,常用于疾病的诊断和治疗监测。
除了上述常用的免疫学检测法外,还有ELISPOT(酶联免疫斑点法)、免疫电镜(Immuno-EM)等特殊的检测方法,用于对特殊细胞亚群或抗原的检测。
检验科免疫学检测方法与结果评估
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检验科免疫学检测方法与结果评估免疫学检测方法在临床医学中起到了至关重要的作用,它能够帮助医生做出准确的诊断和治疗方案。
本文将详细介绍检验科免疫学检测方法以及如何评估检测结果的准确性和可靠性。
一、免疫学检测方法1. 直接免疫法直接免疫法是通过检测患者体内的抗原或抗体来进行诊断。
常见的直接免疫法包括放射免疫测定法、酶联免疫吸附试验、免疫荧光法等。
这些方法可以提供快速、准确、灵敏的结果,对于急性感染和疾病早期诊断有重要作用。
2. 间接免疫法间接免疫法是通过检测患者体内的特定抗体来诊断疾病。
常见的间接免疫法包括酶联免疫吸附试验、补体结合试验、凝集反应等。
这些方法可以用于检测慢性感染、免疫缺陷病和风湿免疫相关疾病等。
3. 标记免疫法标记免疫法是通过将标记物(如放射性同位素、酶或荧光物质)与抗原或抗体结合,来实现对物质的检测和定量。
常见的标记免疫法包括放射免疫测定法、酶联免疫吸附试验、荧光免疫分析等。
这些方法具有高灵敏度和高特异性,广泛应用于临床实验室和疾病监测领域。
二、结果评估1. 准确性评估准确性评估是评估免疫学检测方法结果与真实情况的一致性。
常用的准确性评估指标包括敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。
敏感性指标反映的是方法能够正确检测出病例的能力,特异性指标反映的是方法能够正确排除非病例的能力。
阳性预测值指标反映的是方法对于疾病的检出率,阴性预测值指标反映的是方法对于健康样本的正确排除率。
通过评估这些指标,可以全面评估免疫学检测方法的准确性。
2. 精密度评估精密度评估是评估免疫学检测方法的重复性和可再现性。
常用的精密度评估指标包括变异系数和可靠性系数。
变异系数反映了同一样本在不同时间内或不同实验室之间重复检测结果的差异程度,可靠性系数则反映了方法的稳定性和可靠性。
通过评估这些指标,可以判断免疫学检测方法是否具有良好的重复性和可再现性。
3. 参考范围评估参考范围评估是评估免疫学检测结果与正常人群参考值的一致性。
免疫学检测方法
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免疫学检测方法
免疫学检测方法是一种通过检测人体免疫系统对特定病原体的反应来诊断疾病的方法。
这种方法已经被广泛应用于临床诊断、药物研发和疫苗研究等领域。
根据不同的检测原理和技术手段,免疫学检测方法可以分为以下几类。
1. 免疫荧光法
免疫荧光法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用荧光染料标记抗体或抗原,通过荧光显微镜观察样品中的荧光信号来确定是否存在特定的抗原或抗体。
免疫荧光法可以用于检测多种病原体,如细菌、病毒和真菌等。
2. 酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用酶标记抗体或抗原,通过检测酶的活性来确定是否存在特定的抗原或抗体。
酶联免疫吸附法可以用于检测多种病原体,如HIV、乙肝病毒和肺结核杆菌等。
3. 免疫印迹法
免疫印迹法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用电泳将样品中的蛋白质分离出来,然后用抗体检
测特定的蛋白质。
免疫印迹法可以用于检测多种疾病,如癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病等。
4. 免疫电泳法
免疫电泳法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用电泳将样品中的蛋白质分离出来,然后用抗体检测特定的蛋白质。
免疫电泳法可以用于检测多种疾病,如癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病等。
总之,免疫学检测方法是一种非常重要的诊断工具,可以帮助医生快速准确地诊断疾病,为患者提供更好的治疗方案。
随着技术的不断发展,免疫学检测方法将会越来越成熟和完善,为人类健康事业做出更大的贡献。
常用的临床免疫学检测技术【可编辑全文】
![常用的临床免疫学检测技术【可编辑全文】](https://img.taocdn.com/s3/m/2ffce36ebb1aa8114431b90d6c85ec3a87c28bdd.png)
可编辑修改精选全文完整版常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点:1、自动化免疫分析稳定性好,敏感性高(达ng/L)、精确度高(CV<5%),干扰因素少,结果判断更加客观、准确,也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便,结果回报时间短,便于及时将各种信息向临床反馈,又可节约大量人力物力,利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪,同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目,血清用量少,具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类(一)透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法,测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减,读数以吸收光单位(A)或OD表示,这种A值反映了入射光和透射光的比率。
(二)散射比浊法散射比浊法应用越来越多,且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的,当复合物较小时(<3*10)呈全透射,透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时,形成不对称前向散射,在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果,散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法,前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多,但终点法稳定性好。
所谓速率,是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量(不是积累数),当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时,即出现速率峰,该峰值的高低,即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点:1、时间快,一般在30-60s之内就可完成测试;2、比较准确,因其测定形成速率,抗原多,速率快;3、节省试剂。
免疫学检验常用的方法
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免疫学检验常用的方法
免疫学检验是临床医学中非常重要的一门学科,主要用于诊断疾病的发病机制、检测疾病的标志以及评估疾病的预后。
下面列举几种常用的免疫学检验方法: 1. 抗体检测:抗体检测是免疫学检验中最常用的方法之一。
它主要用于检测患者体内是否存在特定病原体的抗体,例如乙肝抗原抗体检测、艾滋病抗体检测等。
2. 抗原检测:抗原检测是指通过检测患者体内是否存在特定抗原来诊断疾病的方法。
例如,流感病毒抗原检测可用于诊断季节性流感。
3. 免疫荧光检测:免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它主要用于检测细胞内的蛋白质、抗体等分子。
例如,免疫荧光染色可用于检测宫颈鳞状细胞中 HPV 病毒的存在。
4. 聚合酶链反应 (PCR) 检测:聚合酶链反应检测是一种用于检测病原体的分子生物学方法。
它主要用于诊断病毒、细菌等病原体感染。
例如,PCR 检测可用于诊断 HIV 感染。
5. 免疫细胞检测:免疫细胞检测是一种用于评估免疫系统功能的方法。
它主要用于检测免疫细胞的数量和功能,例如,流式细胞术可用于检测免疫细胞的表型。
以上是几种常用的免疫学检验方法。
除此之外,还有免疫印迹法、生物传感器法、纳米颗粒法等先进的检测技术,这些技术不仅可以提高检测的灵敏度和特异性,还可以降低检测的成本。
免疫检测法分类的说明(3篇)
![免疫检测法分类的说明(3篇)](https://img.taocdn.com/s3/m/7b80a379fe00bed5b9f3f90f76c66137ee064fef.png)
第1篇免疫检测法是一种利用抗原与抗体特异性结合原理,检测生物体内各种抗原和抗体含量的技术。
随着生物技术的发展,免疫检测法在医学、生物工程、食品安全、环境保护等领域得到了广泛应用。
本文将详细介绍免疫检测法的分类及其应用。
一、免疫检测法的基本原理免疫检测法的基本原理是抗原与抗体特异性结合。
当抗原进入生物体后,生物体会产生特异性抗体,抗体与抗原结合形成抗原抗体复合物。
通过检测抗原抗体复合物,可以了解生物体内抗原或抗体的含量。
二、免疫检测法的分类1. 酶联免疫吸附测定(ELISA)ELISA是一种基于抗原抗体特异性结合原理的免疫检测方法。
该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强、检测范围广等优点。
ELISA主要用于检测各种病毒、细菌、寄生虫、肿瘤标志物、自身抗体等。
(1)间接ELISA:以抗原包被固相载体,加入待测抗体,再加入酶标记的第二抗体,最后加入底物显色。
通过检测酶催化底物产生的颜色变化,判断待测抗体含量。
(2)直接ELISA:将酶标记的抗体直接包被在固相载体上,加入待测抗原,再加入底物显色。
通过检测酶催化底物产生的颜色变化,判断待测抗原含量。
(3)竞争性ELISA:待测抗体与酶标记抗体竞争结合抗原,通过检测酶催化底物产生的颜色变化,判断待测抗体含量。
2. 免疫荧光技术(IFA)免疫荧光技术是一种利用荧光物质标记抗体或抗原,检测生物体内抗原或抗体含量的方法。
该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强、可检测多种生物分子等优点。
(1)直接免疫荧光法:荧光标记的抗体直接与抗原结合,通过荧光显微镜观察荧光信号。
(2)间接免疫荧光法:荧光标记的第二抗体与抗原抗体复合物结合,通过荧光显微镜观察荧光信号。
3. 放射免疫测定(RIA)放射免疫测定是一种利用放射性同位素标记抗原或抗体,检测生物体内抗原或抗体含量的方法。
该方法具有灵敏度高、特异性强、可检测多种生物分子等优点。
(1)直接RIA:放射性同位素标记的抗原直接与待测抗体结合,通过放射性计数仪检测放射性信号。
常见免疫学检测方法
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常见免疫学检测方法免疫学检测是一种重要的临床检测方法,通过检测免疫系统的功能来评估机体的健康状况。
在临床中,常见的免疫学检测方法包括免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术和免疫电泳等。
本文将对这些常见的免疫学检测方法进行详细介绍。
一、免疫荧光法免疫荧光法是一种通过荧光显微镜观察样本中荧光染色物的方法,用于检测抗原和抗体的相互作用。
这种方法可以用于检测多种疾病的诊断和病原体的鉴定。
通过标记荧光染料的抗体与待检测物相结合,然后在荧光显微镜下观察荧光信号的强度和位置,以确定样本中是否存在目标物质。
免疫荧光法具有高灵敏度和特异性,广泛应用于临床诊断。
二、酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的免疫学检测方法,广泛应用于疾病的早期诊断和治疗监测。
ELISA通过将待测物与特异性抗体结合,然后用酶标记的二抗结合抗体检测目标物质的含量。
ELISA 方法具有高灵敏度、高特异性和较宽的线性范围,可以同时检测多个样本,适用于大规模筛查和临床诊断。
三、流式细胞术流式细胞术是一种通过激光扫描和细胞荧光标记来分析和鉴定细胞的方法。
该方法可以检测细胞表面标记物、细胞内蛋白的表达以及细胞的功能状态。
流式细胞术通过将细胞悬浮液通过流式细胞仪,利用激光激发细胞中的荧光染料,然后通过多个光学参数来分析细胞的特征。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度和多参数分析的优势,被广泛应用于免疫学研究和临床诊断。
四、免疫电泳免疫电泳是一种通过电场将免疫反应产物分离的方法,用于检测血清或其他生物液中的蛋白质成分。
免疫电泳将待检测样本与抗体结合后,通过电泳分离,然后在电泳胶上观察免疫反应产物的带型。
免疫电泳具有高分辨率和灵敏度,可以检测多种蛋白质异常,如免疫球蛋白、肿瘤标志物等,对于一些免疫相关疾病的诊断具有重要意义。
五、其他免疫学检测方法除了上述常见的免疫学检测方法,还有一些其他方法也被广泛应用于临床检测。
临床常用免疫学检验方法
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抗原抗体反应检测
利用抗原和抗体特异性结合的原理,通过标记技术对抗体 或抗原进行标记,从而对目标抗原进行定量或定性检测。
细胞免疫检测
通过对免疫细胞表面的标志物或其功能活性进行检测,了解机体 的细胞免疫状态。常用的方法包括T细胞亚群分析、细胞因子检测
等。
体液免疫检测
通过对血清或血浆中的免疫球蛋白、补体等成分进行检测,了解 机体的体液免疫状态。常用的方法包括免疫球蛋白检测、补体活
一种基于胶体金标记抗体的免疫学检测方法,通过观察胶体金颜色变化来判断抗 原或抗体的存在。
详细描述
胶体金免疫层析试验利用胶体金标记的抗体与抗原结合后产生的颜色变化,通过 肉眼观察或仪器检测来判断抗原或抗体的存在。该方法具有快速、简便、无需特 殊仪器等优点,广泛应用于临床诊断和快速检测领域。
04 细胞免疫学检测方法
间接凝集试验的优点是敏感性较高,但操作相对复杂。
抗球蛋白试验
抗球蛋白试验是一种用于检测红细胞表面抗原 的试验方法,通过将待测红细胞与相应抗体结 合后,观察是否发生凝集反应。
该方法常用于诊断自身免疫性溶血性贫血等疾 病。
抗球蛋白试验的优点是特异性高,但操作难度 较大。
补体结合试验
补体结合试验是一种通过检测 补体活化程度来判断抗原或抗
有重要价值。
0ห้องสมุดไป่ตู้ 其他免疫学检测方法
免疫散射比浊法
要点一
总结词
一种基于抗原抗体反应的检测方法,通过测量反应液中颗 粒物的散射光强度来定量测定抗原或抗体浓度。
要点二
详细描述
免疫散射比浊法是一种简便、快速、准确的免疫学检测方 法。其原理是当抗原抗体反应发生时,会产生一定大小的 复合物颗粒,这些颗粒在光的作用下产生散射光。通过测 量散射光的强度,可以推算出抗原或抗体的浓度。该方法 广泛应用于临床实验室,用于检测各种免疫相关疾病,如 风湿性疾病、肾脏疾病等。
免疫检测方法汇编
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免疫检测方法汇编免疫检测方法是一种用于检测和诊断疾病的方法,它基于人体免疫系统对外界入侵物质的反应。
免疫检测方法可以分为血清学检测和细胞学检测两类。
血清学检测主要通过检测血清中的抗体或抗原来确定感染病原体的存在,而细胞学检测则通过检测细胞的特定表面分子或内部分子来诊断疾病。
常见的血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)和免疫荧光法。
ELISA是一种灵敏度高、操作简单、结果可靠的方法,它通过将待测样品与含有特定抗原或抗体的试剂反应,并用染色剂或荧光标记的抗体来检测反应产物,从而确定目标物的存在和浓度。
RIA是一种应用放射性同位素标记的抗体或抗原来测定待测物浓度的方法,虽然具有高灵敏度和高特异性,但由于放射性物质的使用会带来一定的安全隐患,现已逐渐被其他方法所取代。
免疫荧光法是一种利用荧光标记的抗体来检测目标物存在的方法,它可以在显微镜下观察到荧光信号的反应,从而确定目标物的位置和分布。
细胞学检测方法包括流式细胞术和免疫组化。
流式细胞术是一种通过流式细胞仪分析细胞的荧光标记物来确定细胞表面分子或内部分子的方法。
它可以同时分析大量细胞,并获取多参数数据,从而提供更详细的信息。
免疫组化是一种应用免疫组化试剂盒来检测组织切片中特定抗原的方法,它可以通过显微镜观察到特定抗原的标记物,从而确定抗原的存在和分布情况。
除了上述方法外,还有一些新兴的免疫检测方法正在不断发展。
例如,免疫贴芯技术是一种利用芯片上固定的特定抗体或抗原来检测目标物的方法。
它具有高通量、高灵敏度和高特异性的优势,可以同时检测多个目标物,极大地提高了检测效率。
此外,免疫传感器是一种利用生物分子与传感器相互作用来检测目标物的方法。
它结合了生物技术和传感器技术的优势,可以实时监测和定量分析目标物,具有快速、实时和便携的特点。
综上所述,免疫检测方法是一种重要的诊断手段,广泛应用于临床诊断、药物研发和生物学研究等领域。
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免疫学检测方法免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。
随着学科间的相互渗透,免疫学涉及的范围不断扩大,新的免疫学检测方法层出不穷。
免疫学方法的应用范围亦在日益扩大,不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法,也为众多学科的研究提供了方便。
本章将从抗原、抗体、免疫细胞和细胞因子检测等方面概括介绍试验的基本类型、原理和主要用途,并对分子生物学技术(分子杂交、转基因、多聚酶链反应)在免疫学领域的应用作一简要介绍。
第一节检测抗原抗体的体外方法抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合,并在外界条件的影响下呈现某种反应现象,如凝集或沉淀,藉此可用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)。
试验所采用的抗体常存在于血清中,因此又称之为血清学反应(serological reaction)。
一、抗原抗体反应的特点(一)抗原抗体结合的特异性抗原借助表面的抗原决定簇与抗体分子超变区在空间构型上的互补,发生特异性结合。
同一抗原分子可具有多种不同的抗原决定簇,若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇,则与抗体反应时可出现交叉反应(cross reaction)。
(二)抗原抗体结合的可逆性抗原抗体结合除以空间构型互补外,主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的非共价方式结合,结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离,回复抗原抗体的游离状态。
解离后的抗原和抗体仍保持原有的性质。
抗原抗体复合物解离度在很大程度上取决于特异性抗体超变区与相应抗原决定簇三维空间构型的互补程度,互补程度越高,分子间距越小,作用力越大,两者结合越牢固,不易解离;反之,则容易发生解离。
(三)抗原抗体结合的比例性与结合物的可见性抗原与抗体的结合能否出现肉眼可见的反应,取决于两者的比例。
若比例合适,则可形成大的抗原抗体结合物,出现肉眼可见反应现象;反之,虽能形成结合物,但体积小,肉眼不可见。
由于这种分子比例的差异,分别形成了三种区带现象。
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免疫学检测法免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。
如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测,对诊断、治疗均有很大帮助。
此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究,而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。
本章仅介绍常用免疫学检测方法的原理,简要过程和实用意义。
第一节抗原或抗体的检测一、检测的原理借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象,对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。
1.抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合,激素与其受体的结合一样不是化学的反应,而是非共价键的可逆的结合。
抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型,造成两分子间有较强的亲和力。
空间构型互补程度不同,抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。
互补程度高,则亲和力强。
此外,反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响,抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。
高亲合力的抗体与抗原的结合力强,即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。
2.抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点,对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。
定性和定位检测比较简单,即用已知的抗体和待检样品混合,经过一段时间,若有免疫复合物形成的现象发生,就说明待检样品中有相应的抗原存在。
若无预期的现象发生,则说明样品中无相应的抗原存在。
同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
对抗原或抗体进行定量检测时,以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。
(1)根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原(或抗体)的含量:在一定的反应条件下,加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定,反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。
也就是抗体浓度一定时,免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。
可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体)的含量。
如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于类方法。
(2)抗原或抗体效价滴定的原理:当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时,就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。
在实际工作中,把浓度低的反应成分(抗原或抗体)的浓度固定,把浓度高的另反应成分作一系列稀释。
例如用人血清作抗原免疫3只家兔,比较3只家兔产生抗体的多少,即滴定3只兔血清抗体效价,可用双向琼脂扩散法来滴定,例如将抗体浓度固定,将抗原作不同的稀释度,分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中,观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/2000,而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高)。
也就是表示效价的稀释度越高,样品中所含待检成分越多。
因人血清(抗原)和抗体(免疫兔血清)相比,浓度高,故应稀释抗原。
二、抗原或抗体检测的实用意义1.抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。
抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。
临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体,对有关疾病的诊断有重要意义。
2.抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可以下四类:(1)各种微生物及其大分子产物:用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。
(2)生物体内各种大分子物质:包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。
在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。
(3)人和动物细胞的表面分子:包括细胞表面各种分化抗原(如CD抗原)、同种异型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。
检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究,均有重要意义。
(4)各种半抗原物质:某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原,可以分别将它们偶联到大分子的载体上,组成人工结合的完全抗原。
用其免疫动物,制备出各种半抗原的抗体,应用于各种半抗原物质的检测,例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。
对运动员进行服用违禁药品的检测,都是应用半抗原检测的方法。
三、抗原或抗体检测的方法由于各种检测方法中所用的抗原性状不同,出现结果的现象也不同。
最广泛应用方法有下述几种:(一)沉淀反应可溶性抗原与抗体结合,在两者比例合适时,可形成较大的不溶性免疫复合物。
在反应体系中出现不透明的沉淀物,这种抗原抗体反应称为沉淀反应(prec ipitation neaction)。
1.环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm 的小试管底部。
将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上,让抗原与抗体在两液体的界面相遇,形成白色免疫复合物沉淀环,故名为环状沉淀试验(ring precip itationtest),此法简便易行,需用材料较多是其缺点。
2.单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验(single immunodiffusion)是在凝胶中进行的沉淀反应。
将抗体混入加热溶解的琼脂中,倾注于玻片上,制成含有抗体的琼脂板,在适当位置打孔,将抗原材料加入琼脂板的小孔内,让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散,与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。
当复合物体积增加到一定程度时停止扩散,出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。
本方法简便,易于观察结果,可测定抗原的灵敏度(最低浓度)约为10~20μg/ml,常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA 和C3等,其缺点是需1~2天才能看结果(图20-1)图20-1 单向免疫扩散试验示意图3.免疫比浊法当抗体浓度高,加入少量可溶性抗原,即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物,它可使通过液体的光束发生散射,随着加入抗原增多,形成的免疫复合物也增多,光散射现象也相应加强。
免疫比浊法(immunonephe lomytry)就是在一定的抗体浓度下,加入一定体积的样品,经过一段时间,用光散射浊度计(nephelometry)测量反应液体的浊度,来推算样品中的抗原含量。
本法敏感、快速简便,可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。
4,双向免疫扩散试验双免疫扩散试验(double immunodiffusion)是在琼脂板上按一定距离打数小孔,在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。
当抗原和抗体向四周凝胶中扩散,在两孔间可出现2~3条沉淀线,本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测,或用于两种抗原材料的抗原相关性分析(图20-2)。
图20-2 双向免疫扩散试验示意图5.对流免疫电泳对流电泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的检测方法,即在电场作用下的双向免疫扩散。
将琼脂板放入电泳槽内,使琼脂板的两孔沿着电场的方向,于负极侧的孔内加入抗原,于正极侧的孔内加入抗体,通电后,抗原带负电荷向正极泳动,抗体分子虽也带负电荷,但因分子量大,向正极的位移小,而受琼脂中电渗作用向负极移动,抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。
只需1小时左右即可观察结果。
6.免疫电泳免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤,即先进行电泳,再进行琼脂扩散。
先将样品加入琼脂中电泳,将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。
然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽,于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液,让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散,可形成多答卷沉淀线。
常用此法进行血清的蛋白种类分析。
对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义(图20-3)。
图20-3 免疫电泳法基本步示决图7.免疫印迹法免疫印迹法(immunoblotting)又称为Western印迹法,用于AIDS的血清抗体检测。
第一步,为电泳分离HIV抗原,在电场中根据分子量大小不同病毒抗原各成分散开。
第二步,将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上(电印迹),然后将印迹有病毒抗原的硝酸纤维膜浸湿于病人血清中。
如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话,则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。
在洗去未沉淀的抗原和抗体后,在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体,此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应,最后加入显色底物(如果抗人Ig是用酶标记的)或做放射自显影(抗人Ig用125Ⅰ标记)以显示结果(图20-4)。
图20-4 用免疫印迹法检查血清中的HIV病毒抗体第一步:经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离;第二步:将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上;第三步:将待检病人血清加入覆盖于硝酸纤维膜上;第四步:加入标记的第二抗体使之覆盖膜上;第五步:加入显色底物(或放射自显影)显现第二抗体(二)凝集反应细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原,当与相应抗体结合,抗原与抗体结合形成凝集团块,即称为凝集反应(agglutination)。
1.直接凝集直接凝集(direct agglutination)是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。
可用于传染病诊断如肥达氏反应(W idal reaction)诊断伤寒病。
或利用血细胞凝集现象检查血型。
2.间接凝集间接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面,与相应抗体混合出现的凝集现象。
如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子,用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。
也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原,如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒,一旦与含有相应抗原的脑脊液混合,便可发生凝集,可进行快速诊断。
故凝集反应即可测定抗原,也可测抗体,方法简便、敏感。
3.抗球蛋白试验抗球蛋白试验(antiglobulin test,coombs test)的原理为间接凝集试验。
例如应用于诊断自身免疫溶血性贫血症时,Rh+红细胞与抗Rh血清间的反应。
因抗Rh抗体是IgG只有两个结合价,分子较小(不如IgM结合价多,分子大)很难直接引起Rh+红细胞凝集。
如果加入抗IgG的抗体,就可帮助抗Rh的IgG的抗体凝集红细胞。
也就是经抗Ig的作用提高凝集反应的灵敏度。
(三)补体参与抗原抗体反应这一类反应主要包括溶血反应(hemolytic assay)、补体介导的细胞毒试验(complement mediated cytotoxicuty test)及补体结合试验(complement fixatio n test)。