秀丽线虫生殖细胞凋亡检测 细胞学实验报告

生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组

姓名同实验者 2018年 4 月 23日

题目：秀丽线虫生殖细胞凋亡检测

一．实验目的:

1.掌握检测凋亡细胞的方法

2.学习使用荧光染料活体染色的方法和步骤

二．实验原理

1.秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）：是一种无毒无害、可

以独立生存的线虫。其个体小，成体仅 1.5mm长，为雌雄同体（hermaphrodites），雄性个体仅占群体的0.2%，可自体受精或双性生殖；在20℃下平均生活史为3.5天，平均繁殖力为300-350个；但若与雄虫交配，可产生多达1400个以上的后代。1976年，Sulston和Horvitz利用秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）研究发现，其约13%的体细胞在胚胎发育中注定死亡，使得人们认识到细胞凋亡的遗传基础。

2.荧光染料活体染色：本实验使用吖啶橙（Acridine orange）作为

染色剂，该染料对细胞具有慢性毒性，致癌性强，由于凋亡细胞因DNA片段化可结合更多染料，荧光显微镜下呈亮绿色，可在荧光显微镜下快速方便的检测出，适用于多数品系。

生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组

姓名同实验者 2018年 4 月 23日

三．实验材料及设备

1.实验材料：

a)各品系秀丽隐杆线虫：N2（实验组）, ced-1::gfp（方法对照组），ced-

3（阴性对照）

b)OP50

c)M9培养基

d)NGM培养基

2.实验设备：

a)普通光学显微镜

b)载玻片若干，盖玻片若干，铂金丝

c)暗箱

d)吸水纸、滴管等

e)荧光显微镜

四．实验方法及步骤

1.线虫接种、同步化

2.取样：在12孔板培养板上，每孔吸取900μL预先接入少量OP50

的M9培养基，每孔用铂金丝挑取培养20~30条成体线虫

3.染色：向N2与ced-3品系中每孔加入250μg/mL吖啶橙100μL,

混匀后置于培养箱（避光）染色45~60min。

生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组

姓名同实验者 2018年 4 月 23日

4.方法对照组观察：向ced-1::GFP品系中加入1滴盐酸左旋咪唑，

麻痹线虫后在荧光显微镜下观察。

5.恢复：将已染色的线虫吸出置于35mm培养基中，恢复45~60min，

使摄入的含染料的OP50排出。麻痹线虫并置于荧光显微镜下观察。

6.观察：上述三个品系用相同方法观察：蓝光激发，在20倍物镜中，

凋亡细胞位于生殖腺臂弯转弯附近，呈亮黄色（染色时间长）或亮橙色（染色时间短）（ced-1::GFP组凋亡细胞呈亮绿色），未凋亡细胞核为均匀的暗绿色。

五．实验结果

（一）方法对照组：

图1方法对照组荧光显微镜观察结果