HER2检测规范流程介绍(1)

100ml 4.0g 6.5g 900ml
缓冲体系
避免外界物质造成固定液pH值显著变化
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固定液
所有公开发表的指南都推荐10%的中性缓冲福尔马林
Walker et al
Wolff et al ASCO/CAP
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为什么选择10%的中性缓冲福尔马林？
很多原因：
（1）临床病理实验均使用10%NBF，经过验证
（2）如要选择其他的固定液需要经过验证
（3）FDA 批准的试剂盒的要求，否则为无效检测
（4）其他的固定液会导致不一致的结果
乙醇/丙酮降低IHC/ISH的染色质量
Bouin’s 固定液降低很多抗原的表达
Bouin’s 固定液会导致FISH检测的自发荧
光
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Step 2= 固定液的质量 成品vs 自家配置
剪开手术标本
钉于标本板上
浸泡于足量的固定液 中
准确记录离体时间和固定(开始)时 间
供图：绍兴市人精民品课医件 院病理科
剖开固定
将标本切为5至10毫米厚， 用表面皮肤将其串联
两层间夹一张纸，利于待检 组织较好吸收固定液
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Step4=固定时间
固定液的持续和渗透时间 （1）胃癌：8－48小时 （2）剖开固定
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固定的标准化
Step 1
选择合适的固定液
Step 2
固定液的质量
Step 3
固定液的体积
良好的组织固定是保证 良好切片染色的前提
Step 4
固定时间
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Step 1= 选择合适的固定液
10%中性缓冲福尔马林（PH7.0）
10%NBF溶液 福尔马林（40%甲醛水溶液） 磷酸二氢钠一水物 无水磷酸二氢钠 蒸馏水
①组织切除下来的时间（临床医生或手术室工作人员填写） ②组织放入固定液中起始时间（手术室工作人员填写）
③接收到组织的时间（病理科填写）
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为什么固定这么重要？
固定的目的
防止组织自溶和分解 尽可能是保持组织处于其离体前的状态 保护组织以防在之后的处理和包埋过程中受损
良好固定的必要条件
新鲜组织 固定液的渗透性 选择合适的固定液
使用新鲜的固定液 不可重复使用
盛放固定液的试剂瓶上标注有配置时间和过期时间 （如是成品试剂应注明开封时间和过期时间）
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Step3= 固定液的体积
固定液:组织＝10:1
容器要有足够的尺寸
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组织处理不良示例
未来自百度文库开固定 固定液比例不足
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组织处理规范示例
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20
组织处理规范示例
及时送检
离体时间：组织离体至浸入固定液的时间 组织离体后，组织缺血、自溶 组织离体后，手术室应及时将标本送到病理科或及时剖开固定 胃癌组织：30min之内送检
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及时固定
• 中国胃癌HER2检测指南
– 规范的标本固定是HER2检测质量的保障，能使组织形态保存良好，防止细胞内蛋白和 核酸的降解
• 比利时癌HER2检测指南
– The interval between tissue sampling and fixation should be as short as possible; ideally the tissue should be fixed within 20-30 min, but at leastbest within 1 hour.
– 所有标本应在离体后20~30min内进行标记、切开、固定等初步处理
• 西班牙内科肿瘤学会/西班牙病理学会胃癌HER2检测共识
– Once the sample has been obtained, fixation shall be completed as soon as possible. In the case of surgical specimens, this shall be within 30 minutes of excision [34]. It is advisable to process a gastrectomy specimen (opening and placing it in a suitable container) when the laboratory receives it in order to facilitate fixation.
病理检测需要多学科的合作
检测前－临床科室
①及时送检新鲜标本 ②送检完成的标本送 ③准确的标记组织 ④及时固定 ⑤合适且足量的固定液 ⑥填写完整病理申请单
检测中－病理科
①接受及登记 ②剖开固定样本 ③取材、描述 ④制作蜡块 ⑤切片、染色 ⑥判读、报告
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报告后－临床&病理
①临床医生根据病 理报告制定相应的 治疗方案 ②对病理报告有疑 惑时及时与病理医 生沟通
1. 《胃癌HER2检测指南》编写组. 中华病理学杂志 2011; 40:553-
557
2.. Gómez-Martín C, et al. Clin Transl Oncol 2011; 13:636-
651. 3. Belg J Med Oncol 2011; 5:14-22.
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抗原丢失或抗原扩散
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影响HER2检测结果之因素
评分系统 报告内容
取样
判读标准
检测后
使用图像 分析
HER2检测偏倚
组织处理
固定时间
检测前
固定方式
检测方 法验证
实验条件 对照
实验试剂
检测中
抗原修复类型
检测仪器精准 度
检测人员
实验室步 骤
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Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118─145.
《胃癌HER2检测指南》2011年
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固定时间对HER2检测的影响
组织非特异性着色
细胞形态破坏
固定1小时，固定不足
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固定52小时，过度固定
固定时间对FISH检测的影响
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剖开固定－应该由谁来完成
应当根据医院的实际情况， 由临床和病理协商决定
✓ 如标本能于离体后30min内送至病理科并完成处理， 由病理科完成
延迟固定 的结果
组织形态破坏
不可靠的IHC和ISH检测结果
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5周龄雄性小鼠
腹部注射肿瘤细胞系分组
SNU-16
1+
SCH
2+
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NCI-N87
3+
离体时间对3+样本的改变
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8
离体时间对2+样本的影响
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离体时间对1+样本的影响
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送检时间
（1）胃癌标本：30min之内 （2）病理申请单上需要注明：