中山大学药理学实验——戊巴比妥钠对小鼠催眠作用有效量ed50测定
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图11-4-3剂量对数与有效百分率分布 图11-4-4正态曲线下的面积与标准正 态离差及
概率单位的关系
【实验】
【实验对象】 小鼠。 【实验器材和药品】 注射器(1ml)、针头(4号)、小烧杯、小
鼠罩、托盘、计算器。 戊巴比妥钠、苦味酸(标记动物号用)。
【实验步骤】
1. 实验准备及预试
动物: 一般用健康活泼的小鼠。体重 18~20克,雌雄各 半(雌鼠应无孕)。有时用大鼠、豚鼠等。从外地购进 的动物通常需在本实验室饲养一周。
共需最浓药液体积 P =Vg/(1-r)
所需药量
M= Cm P
(2)配制药液
例: 按上述计算剂量的例子,如果每组需药液Vg= 6ml, 给药体积 V=20ml/kg。 Cm = 30/20 = 1.5 mg/ml P = 6/(1-0.76)= 25 ml P = 1.5X25 = 37.5 mg
戊巴比妥钠对小鼠催眠作用的半数 有效量(ED50)测定
【目的和原理】
➢ 半数有效量(50% Effective dose,简写为 ED50)指药物引起50%实验动物出现阳性结果 (反应)所需的剂量。如以动物死亡率来表示反 应,则用半数致死量(50% Lethal dose, LD50)或半数致死浓度(50% Lethal concentration,LC50)表示。ED50或LD50 是表示剂量一反应的最常用的方法。
称取该药37.5mg,配成25ml───→6ml(第1组) 19ml 加溶剂配成 25ml─────→6ml(第2组) 19ml 加溶剂配成 25ml─────→6ml(第3组) 19ml 加溶剂配成 25ml─────→6ml(第4组) 19ml 加溶剂配成 25ml─────→6ml(第5组)
……
➢ 根据原始数据,用剂量与死亡数分布绘成的, 呈一个长尾S型曲线。
➢ 用对数剂量来表示,则该曲线上所示的大剂量 那一部分,相应地缩短,使曲线成为对称的S 形。数据改为剂量对数与死亡数分布的曲线, 即成为一个正态分布的曲线,这样就可以按正 态曲线的原理处理。曲线上死亡率为50%点的 剂量对数,再从反对数求得的剂量,这是计算 LD50的基本原理。
……
如取n = 5 组,上例公比 = 0.76,各组剂量为 30, 22.8,17.3,13.2,10 mg/kg
(2)配制药液
一般先配制最大剂量组的药液浓度(最浓药液) ,然后按一定的比例逐级稀释,即可得到各组 药液浓度。可参考下述配药法(设每组需药液 Vg(ml),给药体积为Vml/kg):
最大剂量组浓度 Cm = Dm/V
预试
因此预试的目的是确定如下数据(如上例子): Dmax =30 mg/kg ,Dmin =10 mg/kg ,D
max/Dmin =30/10=3
2. 正式实验(1)计算各组剂量
根据预试测出的动物全有效(或全死亡)剂量(Dmax )、全无效(或全不死)剂量(Dmin),在此范围 安排5~8组剂量。设 n 为组数,r 为公比(相邻两剂 量之比,较小的剂量作分子): 各组剂量计算:以上算得的 值小于1 。求出 r 后,各 组剂量分别为: 第1组 Dm 第2组 Dm 第3组 Dm 2
给药途径: 易溶于水的药物可作口服(灌胃)、皮下注射 、腹腔注射或静脉注射。油剂可口服、皮下注射或肌肉 注射。不溶于水的药物可用1%羧甲基纤维素钠制成混 悬剂灌胃。小鼠用药量一般为 0.1~0.2 ml/10g体重, 灌胃每次不超过 0.5 ml,腹腔注射每次不超过 0.6 ml 。
预试
其目的是找到该药0%(Dmin)和100%(Dmax)有 效(或死亡)的大致剂量范围,以便正式实验时在此剂 量范围内设置5~6个实验剂量组。预试方法常用几个 剂量组(每组动物4只),如剂量比为1、3、9 的三个 组,使实验给药液容积相同而药液浓度不同。给药后观 察动物有效(或死亡)情况,观察7天或更长(视药物 而定)。如果剂量10mg/kg无效(或无死亡),而剂 量30mg/kg及90mg/kg均全部有效(或死亡),则D min ~ Dmax的大致范围为10~30mg/kg,即可作正 式实验。如果3组均全无效(或全不死)或全部有效( 或全死亡)均则表示剂量选择不当,要再次预试,往下 或往上找剂量范围
本实验的观察指标
ED50:以翻正反射消失作为判断动物睡眠的指标。把受试 小白鼠轻轻地置于仰卧位,如果在半分钟内不能翻正, 即认为小白鼠处于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生 率。
LD50:在规定的观察7天的时间内记录动物的死亡数并 统 计动物的死亡率。
本实验目的是应用随机、重复、对照的实验设计原则,进 行设计及测定药物的质反应的量效关系。掌握测定药物 半数有效量(ED50)和/或半数致死量(LD50)的方法 、原理、实验步骤、计算过程及意义 。测出药物的ED50 或LD50及其相关参数,认识生物个体差异及衡量药物效 应强弱或急性毒性大小的方法。
(3)分组及给药
取小鼠50只(18~22克),每组雌 雄各半,按体重随机分成五组。每组 分别按设计的浓度、容积腹腔注射药 物。用原始记录本记录给药时间。 ED50 测定时是否要设对照组,应视 情况而定。
பைடு நூலகம்
(4)观察与记录
记录在观察时间内动物的表现或动物中毒症状 、死亡时间。整个实验应记录的事项:日期 、药物名称、批号及制药单位、配药的溶剂 、药液浓度、给药途径、给药容积及给药剂 量、动物名称、性别及体重、实验时室温、 给药时间、动物的表现或中毒症状及出现的 时间、死亡时间、各组有效(或死亡)率、 计算ED50或LD50 。
➢ 除ED50的观察指标(药效)与LD50的观察指标 (死亡)不同外,两者的测定原理相同。
剂量与有效百分率作图
对数剂量与有效百分率作图
➢ 实验动物对药物的敏感性存在着个体差异。如以 不同剂量对动物的死亡率制成曲线图,横轴表示 剂量,纵轴表示死亡率,则见低剂量时动物死亡 率的变动很缓慢,在高剂量时死亡率变动更为缓 慢,以致曲线的上部拖得很长。但在出现50%死 亡的附近,则由于剂量的变动引起死亡率的变动 比较骤急,曲线呈陡直形式。说明50%死亡率是 比较灵敏的指标。但在实验中,不可能用一次实 验正巧得到50%死亡率的剂量,故必须运用科学 的实验设计和结果统计方法处理而求得。