1-2组实验干扰因素斑马鱼实验设计方案

1-2组实验干扰因素斑马鱼实验设计方案
一、实验目的及原理
1.通过斑马鱼早期发育过程的观察，巩固对硬骨鱼胚胎发生的认识。

2.通过设置环境因子(蔗糖)来研究其对斑马鱼胚胎发育的程度。

3.通过对比对照组和实验组，进一步巩固对硬骨鱼胚胎发育模式的认识。

4.锻炼独立开展科学实验、分析和解决实际问题的能力。

5.加深环境对动物受精及早期发育影响的理解。

6.蔗糖作为植物光合作用的主要产物,是动物生存所需能量的重
要供能物质，是生物生长发育所必须的成分。

在动物的胚胎发育过程也是重要的影响因素。

蔗糖水解后生成的葡萄糖是能量循环的重要组成部分和供能物质。

研究表明，低浓度的蔗糖对斑马鱼的胚胎成长有明显的促进作用，高浓度的蔗糖与高浓度葡萄糖对斑马鱼的胚胎发育有差异巨大的影响，高浓度蔗糖对斑马鱼胚胎发育无明显抑制作用,而高浓度的葡萄
糖对斑马鱼胚胎发育有较为明显的抑制作用。

本实验的目的也在探究和验证蔗糖对斑马鱼胚胎发育的影响,学术界对这项研究也处于较为
空白的状态。

二、材料与方法
1.实验材料:
①所需胚胎:发育良好的、健康的斑马鱼胚胎(原肠胚早期 )60枚。

②试剂:蔗糖( 分析纯)。

③器材:培养容器12孔板、恒温培养箱、显微镜、解剖镜、载玻片、塑料滴管、手表、100uL移液枪、1000uL移液枪、量筒100mL*2。

2.实验方法:
①在本实验中，使用蔗糖作为实验用环境因子,共设四个梯度，分别为:0, 2%，5%，8%。

每个梯度设3个平行组，每个平行5 组个胚胎,共需60个胚胎。

②实验处理起始时间:卵裂期(受精后两小时以内)
实验处理终止时间:孵化期。

③实验操作:
A.挑选胚胎
由于斑马鱼卵受精及发育的不均匀性，要对斑马鱼卵进行挑选。

挑选时要挑透明、无白色斑点、卵膜完整的。

之后的实验中还要不断将败育卵挑出。

用滴管(塑料滴管口部要剪短且一定要圆滑,并且直径要大于卵径)将选择好.的卵依次吸出,然后放入12孔板中进行孵化。

注意剔除异物眼观有白色小斑点、畸形异常卵。

B.实验体系:
12孔板培养胚胎,每孔放入5个胚胎，共使用12 个孔，60个胚胎。

12 个孔分别标上A1~A3， B1~B3， C1~C3, D1~D3。

A1~A3组作
为对照组的三个平行组，B1~B3作为2%组的三个平行组，C1~C3 作为5%的三个平行组，D1~D3 组作为8%的三个平行组。

C.实验期间的培养管理
1.孵化用水:
孵化水温一般要25~28%C，在这个温度范围内，温度越低，孵化所需时间相应越长。

水温25°C时，受精卵经48~72h 孵出仔鱼,水温28C时，经36h孵出仔鱼。

水温太高或太低，会造成受精卵死亡。

[实验中设定的培养温度为25°C，由于恒温培养箱的示数与实际温度有较大差异,而且在实验后期(60h) 提高培养箱温度以加速孵化,所以本次实验实际中的温度并不恒定，暂以25°C为准。

]
2.孵卵卫生:
定期观察,每12h换一次水,水温要相近,而且每次换水量在原水量的1/3~1/2，以尽量使胚胎缩短适应期，使发育流畅。

定期将死卵挑出，以确保不影响其他卵的正常发育。

3、观察记录:
前3h实时观察、拍照并记录，之后每12 小时对斑马鱼胚胎发育不同时期以及畸变进行观察、拍照并记录。

4.预期结果:
相关文献显示,较低浓度的葡萄糖、蔗糖能明显地加快斑马鱼胚胎的发育速度、缩短孵化时间,从适当浓度的蔗糖溶液中孵育的胚胎及孵出的仔鱼,在外部形态和运动行为等方面均未发现有异常表现。

特别是2%的蔗糖和能使其孵化时间提前显著缩短，且孵化后的仔鱼
发育状态良好。

高浓度的蔗糖溶液(8%)对胚胎发育的有害影响则表现不很明显。