抗人球蛋白试验操作规程

抗人球蛋白试验操作规程
抗人球蛋白试验（又称Coombs试验）分为直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验，直接抗球蛋白试验是直接把抗球蛋白加入患者的红细胞悬液中，若红细胞已被抗体致敏便出现凝集，用以检测红细胞表面结合的抗体，如新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血的检查。

间接抗球蛋白试验是将已知（未知）抗原的红细胞和未知（已知）抗体的血清混合，然后加入抗球蛋白血清，若抗原抗体相对应，即出现可见的红细胞凝集。

用以检测游离于血清中的抗体，亦可用已知抗原的红细胞检测血清中的相应抗体效价，输血前的交叉配血或不相容输血后的抗体测定。

抗球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测定补体组分（C3、C4）。

9.1目的规范抗球蛋白试验的技术操作，保证试验结果的准确性，为临床进行诊断及治
疗提供依据。

9.2职责输血科(血库)技术人员负责抗球蛋白试验。

9.3适用范围适用于临床须进行抗球蛋白试验的各种血标本。

9.4原理
9.5所需材料和设备
9.5.1材料抗球蛋白试剂、IgG抗-D抗体、AB型血清、3%Rh（D）阳性红细胞悬液、患者血标本。

9.5.2 设备普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。

9.6检测环境条件
室温应保持在18～27℃，湿度应保持30%～70%。

9.7操作步骤
9.7.1 直接抗球蛋白试验
9.7.1.1取受检者红细胞，以生理盐水充分洗涤3次，末次洗涤后将上清液倒尽，用滤纸将
管口残余的盐水吸去，再配成3%红细胞盐水悬液。

9.7.1.2取试管3支，分别标记好受检者、阳性对照、阴性对照。

其中受检者试管中加入3%受检红细胞盐水悬液1滴，再加入抗球蛋白血清1滴，混匀。

9.7.1.3阳性对照管抗球蛋白血清1滴，IgG抗-D致敏的3% RhD阳性红细胞盐水悬液1滴，混匀。

9.7.1.4阴性对照管抗球蛋白血清1滴，AB型血清致敏的正常人3% Rh（D）阳性红细胞悬液1滴，混匀。

9.7.1.51300g离心15s，肉眼观察有无凝集，若肉眼不见凝集，以显微镜检查，记录结果。

9.7.1.6结果判定阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者为阳性，不凝集者为阴性。

9.7.2间接抗球蛋白试验
9.7.2.1取试管3支，标明受检、阴性对照和阳性对照。

9.7.2.2按表3-10将反应物加入相应试管内
表3-10 受检者、阴性、阳性对照管加入反应物
反应物受检者阳性对照阴性对照
血清（已知或受检）2滴——
3%红细胞悬液（受检或已知）1滴——
IgG抗-D —2滴—
AB型血清——2滴
3%RhD阳性红细胞悬液1滴1滴
9.7.2.3混匀，置37℃水浴1h，用生理盐水洗涤3次。

末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸
将残余管口的盐水吸去。

9.7.2.4每管各加最适稀释度抗球蛋白血清1滴，混匀。

1300g离心15s，肉眼观察有无凝集，
若肉眼不见凝集，以显微镜检查，记录结果。

9.7.2.5结果判定:阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，受检管
不出现凝集者为阴性。

9.8质量控制
试剂在有效期内使用，且在使用前用阴、阳性对照试验确认其有效性。

9.9注意事项
9.9.7血标本采取后应尽快进行检测，延迟检测或中途停止可使抗体从细胞上释放。

如果不能立即进行测定，应将样本存放于2-8℃。

9.9.8抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则可产生前带和后带反应，而误为阴性结果。

9.9.9未抗凝血标本以及CPDA-1保存液保存的血标本，在4℃或室温保存时，补体可以体外致敏红细胞，使DAT出现假阳性，故应用EDTA-K2抗凝标本进行DA T试验。

9.9.10红细胞洗涤应迅速，一经开始洗涤就不应中途停止。

受检红细胞一定要用盐水洗涤3次以上，洗涤时盐水要足量并用力冲入管底，使压积于管底的红细胞松离，以除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白。

9.9.11如果需要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗-IgG、抗-IgM或抗-C3单特异性抗球蛋白血清进行试验。

9.9.12红细胞上吸附抗体太少，以及极少数自身免疫性溶血性贫血患者直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。

9.9.13脐血标本含有Wharton胶和较多的网织红细胞，抗球蛋白血清中可能含有抗运铁蛋白，故应充分洗涤。

9.9.14全凝集或冷凝集血液标本，如洗涤不充分，可使红细胞发生凝集。

9.9.15离心速度和时间不当可造成错误结果，应严格掌握离心速度和时间。

9.9.16如果检测补体依赖性的抗体，则必须加入新鲜的AB型血清，抗球蛋白血清中也应含有抗-C3。

9.9.17要做好阴阳性对照，如果对照管没有出现预期结果表示结果不可靠，应仔细分析原因。

9.10相关文件
9.9 .1 《中国输血技术操作规程》（血站部分）. 天津：天津科学技术出版社，1997
9.11相关记录
9.11.1《血型血清学试验报告单》。