血清α-淀粉酶(AMS)测定
血、尿液淀粉酶AMS两点法测定-检验科生化室作业书
血、尿液淀粉酶AMS两点法测定1.实验原理VitrosAMS试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
分布层含有反应所需的染色淀粉底物（与支链淀粉共价化合），样品中的淀粉酶催化该染色淀粉水解成更小的有色糖。
随后这些有色糖进入下面的试剂层。
分别在孵育2.3分钟和5分钟时用反射仪测定试剂层中有色糖的反射强度，两次读数间的差值与样品中的淀粉酶活性成正比。
测定方式：两点法波长：540nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：淀粉酶染色支链淀粉——————→有色糖2.标本：2.1病人准备：无特殊。
2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
定时收集的，稀释后的尿样。
2.3标本采集与处理：2.3.1血清和血浆样品血浆中淀粉酶活性约比血清中高20U/L。
不能使用钙螯合物作抗凝剂，如草酸，枸橼酸和EDTA。
样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
2.3.2尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：含有冰醋酸，浓盐酸或者防腐剂中有乙二羟化四甲铵和氧化汞的样品不能测淀粉酶。
尿液样品在测试前要冷藏在2～8℃。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3.标本的存放：血清、血浆、尿液室温下最多7天；4～8℃冷藏最多1个月；样品不可冷冻保存。
4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5.标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。
6.试验材料：6.1测试AMS所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros7%BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是染色支链淀粉。
其它成份有染色剂，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，稳定剂和媒染剂。
血a—淀粉酶(a-AMY)—生化检测项目
血清a-淀粉酶（a-AMY）
一、检测原理
a-淀粉酶与a葡萄糖苷酶偶联，水解特异性底物4,6-亚乙基-4-硝基苯酚-a-庚糖，产生对硝基苯酚，对硝基苯酚生成速率与a淀粉酶的活性成正比，在405nm波长处，用速率法检测，从而求得a-淀粉酶的活性。
二、参考区间
血清：28—100U/L 尿液<460U/L
三、临床意义
1、血清淀粉酶升高：
（1）急性胰腺炎：最常见于急性胰腺炎，发病后2-12h活性开始升高，12-72h达峰值，3-4天恢复正常。
虽然淀粉酶活性升高程度并不一定和胰腺损伤程度相关，但升高程度愈大，患急性胰腺炎的可能性愈大。
怀疑急性胰腺炎时应连续监测淀粉酶，并结合其他检查，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等。
（2）急腹症：其他急腹症也可引起淀粉酶活性升高。
（3）慢性胰腺炎：慢性胰腺炎时淀粉酶活性可轻度升高或降低，但没有很大诊断意义。
2、尿淀粉酶升高：
血液中淀粉酶能被肾小球滤过，血清淀粉酶升高时，都会使尿中淀粉酶排出量增加，其升高可早于血淀粉酶，下降晚于血淀粉酶。
α-淀粉酶测定标准操作程序
α－淀粉酶测定标准操作程序1.摘要α－淀粉酶试剂盒适用于定量测定人血清、肝素化血浆、尿液样本中α－淀粉酶的活力。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中α－AMY的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定α－AMY浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司的α－AMY试剂测定采用CNPG3方法。
5.原理底物CNPG3在α－AMY催化下产生的 2－氯－4－硝基苯酚（CNP）引起波长405nm 处吸光度上升，上升的速率与α－淀粉酶的活力成正比。
5CNPG3−−→−AMY3CNP+2CNP2+3G3+2G6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：MES缓冲液（PH6.0）、醋酸钙、硫氰酸钾、CNPG3。
表面活性剂、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
试剂打开后冷藏于分析中可保存28天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
α-淀粉酶酶活测定
中温α–淀粉酶酶活测定一、原理α–淀粉酶制剂能将淀粉链中的α-1，4-葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特性反应应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。
二、试剂和溶液1. 碘2. 碘化钾3. 原碘液：称取11.0g碘和22.0g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL，贮存于棕色瓶中。
4. 稀碘液：吸取原碘液2.00mL，加20.0g碘化钾并定容至500mL，贮存于棕色瓶中。
5. 可溶性淀粉溶液（20g/L）:称取2.000g（精确至0.001g）可溶性淀粉（以绝干计）于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒入其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100mL。
溶液现配现用。
6. 磷酸缓冲液（pH=6.0）：称取45.23g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）和8.07g柠檬酸（C6H8O7·H2O）,用水溶解并定容至1000mL。
用pH计校正后用。
7. 盐酸溶液[c（HCL）=0.1mol/L]：按GB/T601配制。
三、仪器1. 分光光度计。
2. 恒温水浴：控温精度±0.1℃。
3. 自动移液器。
4. 试管：25mm×200mm。
5. 秒表。
四、分析步骤1. 待测酶液的制备称取1g~2g酶粉（精确至0.0001g）或准备吸取酶液1.00mL，用少量磷酸缓冲液（2.6）充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液（2.6）充分研磨，最终样品全部移入定量瓶中，用磷酸缓冲液（2.6）定容至刻度，摇匀。
用四层纱布过滤，滤液待用。
注：待测中温α–淀粉酶酶液活力控制酶浓度在3.4u/Ml~4.5u/mL范围内，待耐高温α-淀粉活力控制酶浓度在60u/Ml~65u/mL范围内。
2. 测定---吸取20.0mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液5.00mL，摇匀后，置于60℃±0.2℃（耐高温α-淀粉酶制剂于70℃±0.2℃）恒温水浴中预热8min；---加入1.00mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应5min；---立即用自动移液吸取1.00mL反应液，加到预先盛有0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液的试管中，摇匀，并以0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液为空白，于660nm波长下，用10mm比色皿迅速定其吸光度（A）.五、计算1. 根据吸光度查表A.1，求得测试酶液的浓度。
血清α-淀粉酶(AMS)测定
血清α-淀粉酶（AMS）测定1. 实验原理AMS测定采用酶动态比色测定法。
所用底物为4,6-亚乙基-α,D-麦芽七糖苷-对硝基苯酚（EPS－G7）。
样品中α－淀粉酶分解底物EPS－G7，生成对硝基苯酚（PNP），在405nm处比色，吸光度的上升速率与样品中α-淀粉酶的活力成正比。
2 亚乙基－G5 ＋ 2 G2PNP5EPS-G7＋5H2O α-淀粉酶 2 亚乙基－G4 ＋ 2 G3PNP亚乙基－G3＋G4PNPα-葡萄糖苷酶2G2PNP＋2G3PNP＋G4PNP＋14H2O 5PNP＋14G （反应式中PNP：对硝基苯酚；G：葡萄糖）2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆、尿液。
2.3 血清分离血清或血浆应在收集后尽快分离出来。
未酸化的尿液，随机或限时收取。
3. 标本存放：不要用嘴吸取标本或对标本吹气，以免唾液污染标本唾液中的淀粉酶使结果升高。
血清淀粉酶在20～25℃稳定一个星期，避免微生物降解作用；在2～8℃时稳定一个月。
尿液样品在2～8℃可稳定10天，在15～25℃可稳定2天。
对于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的稳定性减弱，因此，储存前pH值应调至大约7.0。
4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血的不能做测定。
6. 实验材料：6.1 AMS测定试剂盒（试剂1 6×64 ml ＋试剂2 6×16 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：GOOD’S 缓冲液pH 7.1 100mmol/L氯化钠50mmol/L氯化镁10mmol/Lα-葡萄糖苷酶≥23KU/L试剂2：EPS－G73mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
6.1.5注意事项：唾液和皮肤中含有α-淀粉酶，应避免用嘴吸取试剂，避免皮肤接触试剂。
α-淀粉酶
预期用途 用于测定人血清中α-淀粉酶的活性。α-淀粉酶主要来源于胰腺，当急性胰腺炎时，血清中淀粉酶迅速升高， 所以主要用于胰腺炎的辅助诊断。 特点 ●基于IFCC配方 ●液体双试剂，开瓶即用 ●测定范围0~2000U/L* ● 2℃~8℃密闭避光保存有效期为12个月，开瓶2℃~8℃避光可稳定30天
*可根据不同的样本试剂比例获得不同范围线性
原理 AM Y Et - G7 - PNP → Et − G m + G n − PNP m + n = 7 n = 2� 3� 4� � α - Glucosidase G n − PNP → G n + PNP
25 30
相关性 1200 血清 y = 1.0968x+2.0667 R2 =0.9982 1000 800 y = 1.031x+4.9164 R2 =0.9967 尿液
本试剂(U/L)
600
本试剂(U/L)
800
600
400
400 200 200
0
200
400
600 800 A公司（U/L）
600 A公司（U/L）
800
参考文献 1.Young, D.S. and Friedman, D.S., Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests, 2nd Ed., AACC Press (1989). 2.NCCLS document “Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices”, 2nd Ed. (1992). 3.臨床化学34：350-361，2005
AMS（淀粉酶）—搜狗百科
AMS（淀粉酶）—搜狗百科测定血清淀粉酶同工酶时，发现有两个主要的同工酶区带及数个次要区带。
两个主要区带中的一个和胰腺的提纯物或分泌物电泳的位置相同，因此命名为P-同工酶；另一个和唾液腺提纯物或唾液电泳在同一位置，因此命名为S-同工酶。
测定淀粉酶同工酶有助于对胰腺疾病的鉴别诊断。
参考值：限定性底物法：血清淀粉酶 220U／L（37℃）尿淀粉酶 1200U／L（37℃）P同工酶血清115U／L尿800U／L新生儿血清淀粉酶约为成年人的18%，主要为S-型，到5岁时达成人水平；在一岁内测不出血清P-型淀粉酶，以后缓慢上升，在10～15岁时达成人水平。
血清淀粉酶和尿淀粉酶测定是胰腺疾病最常用的实验医|学教育网搜集整理室诊断方法，当罹患胰腺疾病，或有胰腺外分泌功能障碍时都可引起其活性升高或降低，有助于胰腺疾病的诊断。
尿淀粉酶水平波动较大，所以用血清淀粉酶检测为好，或两者同时测定。
淀粉酶活性变化亦可见于某些非胰腺疾患，因此在必要时测定淀粉酶同工酶具有其鉴别诊断意义。
1.血清淀粉酶升高：最多见于急性胰腺炎，是急性胰腺炎的重要诊断指标之一，在发病后2～12h活性开始升高，12～72h达峰值，3～4天后恢复正常。
淀粉酶活性升高的程度虽然并不一定和胰腺损伤程度相关，但其升高的程度越大，患急性胰腺炎的可能性也越大，因此虽然目前还都用淀粉酶作为急性胰腺炎诊断的首选指标，但其特异性和灵敏度都还不够高。
当怀疑急性胰腺炎时，应对患者血清和尿淀粉酶活性连续作动态观察，还可结合临床情况及其他试验，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定共同分析，作出诊断。
淀粉酶测定对监测急性胰腺炎的并发症如胰腺假性囊肿，胰腺脓肿亦有价值，此种时候血淀粉酶活性多持续升高。
重症急性胰腺炎时可以引起胸腔积液或／和腹腔积液，积液中的淀粉酶活性甚至可高于血清淀粉酶活性100倍以上。
急性胰腺炎的诊断有一定的困难，因为其他急腹症也可以引起淀粉酶活性升高。
所以当怀疑急胰腺炎时，除应连续监测淀粉酶外，还应结合临床情况及其他试验，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定结果共同分析，作出诊断。
α淀粉酶测定方法
α淀粉酶测定方法嘿，咱今儿就来聊聊α淀粉酶测定方法这档子事儿。
你知道吗，α淀粉酶就像是个勤劳的小工匠，在我们身体里默默工作着，对很多生理过程都有着重要作用呢！那要怎么知道它工作得好不好呀，这就得靠测定方法啦。
比如说有一种比色法，就好像是给α淀粉酶来一场特殊的“考试”。
把样本放进去，然后通过一系列的反应和观察颜色的变化，就能大致了解它的情况啦。
这就好比你看一个人做事，通过他完成任务后的成果来判断他干得怎么样。
还有一种黏度法呢，就像是感受α淀粉酶工作时带来的“阻力”变化。
通过测量样本的黏度变化，就能推测出α淀粉酶的活跃程度啦。
这有点像观察水流的顺畅程度来判断有没有东西在里面捣乱一样。
酶联免疫吸附法也挺有意思，它就像是专门去捕捉α淀粉酶的“小侦探”。
通过特定的抗体和反应，精准地找到α淀粉酶并进行检测。
这就好像警察抓小偷，有着专门的手段和工具呢。
你想想看呀，如果没有这些测定方法，我们怎么能知道身体里这个小家伙工作得好不好呢？这可关系到我们的健康呀！要是它出了啥问题，咱不就麻烦啦？所以这些测定方法就像是我们了解身体内部情况的小窗口，透过它们，我们能更好地掌握身体的状态呢。
那这些方法难不难呢？其实呀，只要认真去学，也没那么难啦。
就跟你学骑自行车似的，一开始可能觉得摇摇晃晃不好掌握，但多练习几次，不就会啦？而且这些方法都是科学家们经过研究和实践才找到的呢，肯定是有道理的呀。
咱可不能小瞧了这些测定方法哦，它们可是帮了大忙呢！能让医生及时发现问题，及时治疗。
你说这多重要呀！所以呀，了解α淀粉酶测定方法真的很有必要呢，你说是不是呢？咱得重视起来呀，毕竟这关系到我们自己的身体呢！不管是比色法、黏度法还是酶联免疫吸附法，它们都有着独特的作用和价值，就像我们生活中的各种工具一样，各有各的用处。
那我们就得好好利用这些方法，让它们为我们的健康服务呀！。
淀粉酶(AMS)的标准操作程序
淀粉酶（AMS）的标准操作程序【目的】指导血及尿液淀粉酶（AMS）试验操作。
【该SOP文件变动程序】本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,请专业组长及科主任签字后生效。
【原理】血清或尿液中的а-淀粉酶催化淀粉分子的а-1,4葡萄糖苷键水解，产生葡萄糖，麦芽糖及а-1,6糖苷键支链的糊精。
在底物充分（已知浓度）的条件下，反应加入的碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物，其颜色的深浅与未经酶促反应的空白比较其吸光度，从而推算出淀粉酶的活力单位。
【试剂】1.0.4g/L缓冲淀粉溶液上海捷门生物技术合作公司生产2.0.2mol/L碘贮存液上海捷门生物技术合作公司生产临用时配置碘应用液：100ul碘贮存液加1ml蒸馏水稀释。
【操作步骤】1.稀释尿液：50ul尿液加入到1ml生理盐水2.按下表操作：加入物（ul）测定管1 测定管2 空白管血清 10 -- --稀释的尿液 -- 50 --预温的缓冲淀粉溶液 500 500 500混匀，置37℃水浴7.5分钟（准确）将上述管混匀，用660nm波长，10mm光径比色杯，蒸馏水调零，读取各吸光度。
【计算】单位定义：100 ml血清中的淀粉酶在37℃条件下，15分钟水解5mg淀粉未1个单位。
计算公式：血：空白管——测定管×800空白管尿：空白管——测定管×3360空白管【参考区间】血清：40—200淀粉酶单位尿液：100—1200淀粉酶单位【临床意义】淀粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌。
患流行性腮腺炎，急性胰腺炎时血和尿的AMS显著增高。
急性胰腺炎发病的8—12小时时AMS开始升高，12—14小时达到高峰，2—5天下降至正常。
如超过500单位，既有诊断意义。
达350单位应怀疑此病。
急性阑尾炎，肠梗阻，胰腺癌，胆石症，溃疡病穿孔以及吗啡注射后等均使AMS升高，但常低于500单位。
血清及尿AMS同时降低，见于肝病疾病。
淀粉酶分子量约50000，可通过肾小球滤出。
六、血清淀粉酶(AMS)的测定
思考题：
实验为什么要求空白管吸光度≥0.5？ 对酶活性的影响因素有哪些？
谢谢！
2~5d恢复正常，因此血清淀粉酶活性显著升高 对急性胰腺炎的早期诊断价值较大。 • 淀粉酶可通过肾小球滤过，尿淀粉酶于发病后 12~24h开始升高，持续时间长，下降比血清淀 粉酶慢，故胰腺炎后期测尿淀粉酶更有价值。
黄疸标本
正常标本
脂血标本
慢性胰腺炎、胰腺癌、急性阑尾炎、溃疡 性穿孔、肠梗阻、流行性腮腺炎、唾液腺化脓 等血清淀粉酶均可升高。
一、实验原理
淀粉酶：是水解淀粉和糖原的酶类总称 可溶性淀粉、直链淀粉、糖原等 水解α－1，4-糖苷键的酶。
一、实验原理
α-淀粉酶
β-淀粉酶
人体
植物
淀粉酶分子量40000 ~ 50000，很易由肾排出。
怎么测定血清α-淀粉酶呢？
一、实验原理
样品中α-淀粉酶催化淀粉分子及糖原中的α-1,4葡 萄糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1,6糖 苷键支链的糊精，在淀粉（已知浓度）充分的条件 下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色 复合物，其颜色的深浅与未经酶促反应的空白管比 较，从而推算出淀粉酶的活力。
肾功能障碍时，血清淀粉酶升高，尿淀粉 酶降低。
各种肝病患者，血、尿淀粉酶同时降低。
五、方法学评价
1. 淀粉遇碘呈蓝色反应属有机化学的经典型反 应，方法可靠，反应特异性高。
2. 线性范围：0~800 U/L 3. 精密度：批内CV≤ 5% 4. 准确度：偏差≤15% 5. 空白吸光度：空白管吸光度≥0.5（620nm或
630nm，1cm光径）
六、注意事项
1、样品为不溶血的血清、血浆或尿液（pH值应调至7.0）， 样品应在低温条件下运输保存，血清或血浆中淀粉酶2~8℃ 可稳定30天，室温可稳定7天。
2024血清淀粉酶(AMS)升高的临床意义
2024血清淀粉酶(AMS)升高的临床意义急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)是临床常见的急腹症，实验室检查可见血清淀粉酶及脂肪酶升高。
血清淀粉酶在AP的诊断中具有重要价值：AP起病后6~12h,血清淀粉酶开始上升，48h开始下降，持续3~5天，通常情况下，血清淀粉酶和(或)脂肪酶浓度至少高于正常上限值3倍即可确诊AP o不过，除了急性胰腺炎以外，还有很多疾病也可引起血清淀粉酶升高，需注意鉴别。
什么是淀粉酶？淀粉酶(amylase,AMS)在人体主要来源于腮腺和胰腺,有2种同工酶一来自胰腺的淀粉酶的同工酶P(P-AMS)和来自腮腺的淀粉酶的同工酶S(S-AMSI通过同工酶检测，可以将腮腺炎与引起急腹症的急性胰腺炎相鉴别。
此外,人体内心脏、肺脏、肝脏、甲状腺、脾脏等组织也含有少量的淀粉酶。
淀粉酶主要通过肾脏清除，因此，血液循环内的淀粉酶活性升高时，相应的尿淀粉酶活性也会升高。
除了AP,血淀粉酶升高还可见于这些疾病：1、巨淀粉酶血症血AMY升高的原因大致分两类：进入血液中的淀粉酶数量增加或淀粉酶从血液循环中清除减慢。
巨淀粉酶血症属于后者，巨淀粉酶是由血清中正常淀粉酶与免疫球蛋白（如IgG、IgA）或其他物质结合形成的一种高分子循环复合物。
巨淀粉酶分子量巨大，不易通过肾小球，故巨淀粉酶血症患者血淀粉酶明显增高而尿淀粉酶正常或减少，一般肾淀粉酶清除率/肾肌酢清除率＜1%时，可诊断为巨淀粉酶血症，并有助于对高淀粉酶血症的鉴别诊断。
因此，如果碰到血清淀粉酶长期增高而尿淀粉酶正常，又无肾功能损害者,或血脂肪酶正常者，需考虑巨淀粉酶血症的可能性。
2、糖尿病酮症酸中毒糖尿病酮症酸中毒（DKA）是糖尿病常见的急性并发症之一，在DKA患者中经常出现高淀粉酶血症（约有17%~50%）,且临床表现与胰腺炎相似。
血AMY在DKA中升高的原因包括唾液AMY的释放增加，肾脏对AMY的清除减少，以及神经和代谢紊乱导致从胰腺腺泡渗出到循环的AMY增加。
碘—淀粉吸光系数标准化法检测α—淀粉酶的实验研究
碘—淀粉吸光系数标准化法检测α—淀粉酶的实验研究
张丽霞;彭凤生
【期刊名称】《中国医科大学学报》
【年(卷),期】1996(025)005
【摘要】为达到α－淀粉酶（α－ＡＭＳ）测定的最好的准确性和精密度，最大线性范围及与酶法的可比性，进行了碘－淀粉吸光系数标准化法测定淀粉酶的实验研究。
底物浓度改为０．７９ｇ／Ｌ，底物缓冲液以Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０，３７℃，５０ｍｍｏｌ／Ｌ）为缓冲剂，并加入２．５ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２和１００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ以保证对α－ＡＭＳ的激活作用，酶促反应时间
选为５ｍｉｎ，测定波长选定为７００（或８００／
【总页数】4页(P522-525)
【作者】张丽霞;彭凤生
【作者单位】第一临床学院检验科;第一临床学院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】Q556.2
【相关文献】
1.淀粉酶碘-淀粉比色法在全自动生化分析仪上的应用 [J], 郝陆飞;张妮
2.国产葡萄糖淀粉酶替代丹麦葡萄糖淀粉酶实验研究 [J], 莫肇江
3.加试剂顺序对淀粉酶碘比色法空白吸光度的影响 [J], 陈宇宁
4.血尿淀粉酶-碘淀粉比色法操作步骤及计算公式的修定 [J], 强卫民
5.碘—淀粉吸光光度法测定饲料中的碘 [J], 王新平
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血清淀粉酶测定实验报告
血清淀粉酶测定实验报告一、实验目的血清淀粉酶（serum amylase，AMS）主要由胰腺和唾液腺分泌。
测定血清淀粉酶的活性对于诊断胰腺疾病，如急性胰腺炎等，具有重要的临床意义。
本实验旨在掌握血清淀粉酶活性的测定方法，熟悉实验操作步骤，了解实验原理，并通过实验数据的分析，对血清淀粉酶的活性进行准确测定和评估。
二、实验原理血清淀粉酶能将淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖等还原糖。
3,5 二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在沸水浴中反应生成棕红色的 3 氨基 5 硝基水杨酸，其颜色的深浅与还原糖的量成正比。
通过比色法测定生成的还原糖量，即可计算出血清淀粉酶的活性。
三、实验材料与设备1、材料新鲜血清1%淀粉溶液04mol/L 氢氧化钠溶液3,5 二硝基水杨酸（DNS）试剂标准麦芽糖溶液（1mg/ml）2、设备分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管、容量瓶等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 7 支干净的试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5、6。
按表 1 向各试管中加入试剂。
｜试管编号|0|1|2|3|4|5|6|｜：：｜：：｜：：｜：：｜：：｜：：｜：：｜：：｜｜标准麦芽糖溶液（ml）｜0|02|04|06|08|10|12|｜蒸馏水（ml）｜20|18|16|14|12|10|08|｜DNS 试剂（ml）｜30|30|30|30|30|30|30|将各试管摇匀，在沸水浴中加热 5 分钟，取出后立即用冷水冷却至室温。
用蒸馏水定容至 25ml，摇匀。
以 0 号管为空白对照，在 540nm 波长下，用分光光度计测定各管的吸光度值。
以麦芽糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、血清淀粉酶活性的测定取 3 支试管，分别编号为测定管、对照管 1 和对照管 2。
按表 2 向各试管中加入试剂。
｜试管编号|测定管|对照管 1|对照管 2|｜：：｜：：｜：：｜：：｜｜血清（ml）｜05|05|——｜｜蒸馏水（ml）｜——｜——｜05|｜1%淀粉溶液（ml）｜10|10|10|将测定管和对照管 1 置于 37℃恒温水浴中保温 75 分钟，对照管 2置于冰水中。
α-淀粉酶检测试剂盒(硝基水杨酸法)
α-淀粉酶(α-AMS)检测试剂盒(硝基水杨酸法)简介：淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。
淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。
Leagene α-淀粉酶(α-AMS)检测试剂盒(硝基水杨酸法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等。
麦芽糖在一定条件下和硝基水杨酸反应生成黄绿色化合物，通过比色法检测产生的麦芽糖的量，以此表示酶的活力，可计算出淀粉酶的活力单位。
该试剂盒通过分光光度计或酶标仪检测处吸光度，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的α-淀粉酶活性。
该试剂盒优点是灵敏、准确、精确度高，适宜精确测量小样品α-淀粉酶活性；其缺点是测定步骤较繁，不便分析大量样品，测定范围较窄 。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 比色杯或96孔板3、 生理盐水4、 分光光度计或酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 稀释标准品：按下表稀释麦芽糖标准，分别获得0、0.3、0.6、1.2、1.8、2.4、3.0μmol/ml 的标准液。
0 1 2 3 4 5 6 麦芽糖标准(10μmol/ml)/ml 0 0.03 0.06 0.12 0.18 0.24 0.3 蒸馏水/ml1.00.970.940.880.820.760.7编号 名称TE0207 100T Storage试剂(A): 麦芽糖标准10ml 4℃ 试剂(B): α-AMS Assay buffer 50ml 4℃ 试剂(C): DNS 显色液 100ml4℃ 避光 使用说明书1份麦芽糖含量(μmol) 0 0.3 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0 相应麦芽糖浓度(μmol/ml) 0 0.3 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0 注意：如果需要快速简易检测，则无需稀释上述多个浓度的标准品，直接使用麦芽糖标准(10μmol/ml)，直接根据公式计算即可。
血清淀粉酶的测定方法
血清淀粉酶的测定方法
血清淀粉酶是一种催化分解淀粉的酶，通常用于检测炎症和组织损伤。
以下是常用的血清淀粉酶测定方法:
1.试纸条法：将待测血清与一种试纸条接触，试纸条上含有一种特定的淀粉酶抑制剂，如果血清中的淀粉酶活性较高，则会使得试纸条上的划线更为明显，通过观察试纸条的颜色变化可以判断淀粉酶活性的高低。
2.酶标法：将待测血清与一种酶标抗体接触，酶标抗体可以与淀粉酶抗原结合，如果血清中的淀粉酶活性较高，则会使得结合的酶标抗体更为稳定，通过测量吸光度的变化可以判断淀粉酶活性的高低。
3.化学发光法：将待测血清与一种化学发光剂接触，化学发光剂可以与淀粉酶活性相关的产物结合，如果血清中的淀粉酶活性较高，则会使得化学发光信号更为强烈，通过测量化学发光信号可以判断淀粉酶活性的高低。
需要注意的是，不同的测定方法可能会有不同的灵敏度、特异性和精度，因此在实际应用中需要根据具体情况选择最合适的测定方法。
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α-淀粉酶(AMY)测定试剂盒（EPS 底物法）说明书
α-淀粉酶(AMY )测定试剂盒（EPS底物法）说明书【产品名称】α-淀粉酶(AMY)测定试剂盒（EPS 底物法）【包装规格】a)试剂1：2×45mL 试剂2：2×15mL b)试剂1：4×45mL 试剂2：4×15mL c)试剂1：2×60mL 试剂2：2×20mL 【预期用途】用于体外定量测定人体血清中淀粉酶的活性。
临床上常用于急性胰腺炎的诊断，血淀粉酶的增高常见于急性胰腺炎、唾液腺疾病、胆管疾病、糖尿病酮酸中毒及破裂异位妊娠等[1]。
【检验原理】PNPG7−−→−淀粉酶PNPG3+麦芽三糖PNPG3−−−→−葡糖苷酶PNPG1+葡萄糖PNPG1−−−→−葡糖淀粉酶对-硝基酚+葡萄糖生成的对-硝基酚为黄色物质，通过在405nm 测定对-硝基酚吸光度值的的上升速率，即可计算出样本中淀粉酶的活性。
【主要组成成分】试剂1主要组分Tris 缓冲液50mmol/L 葡糖苷酶25KU/L 氯化钠50mmol/L 牛血清白蛋白适量试剂2主要组分Tris 缓冲液50mmol/L P-硝基苯D-麦芽庚烷（PNPG7）0.9mmol/L 氯化钙5mmol/L 牛血清白蛋白适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】贮存于2～8℃，有效期为18个月，生产日期、有效期见标签。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI 7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT 008AS 型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR /TBA-2000FR ；罗氏cobas 8000c 702/cobas 8000c 701/cobas 8000c 502；西门子SIEMENS ADVIA 1800/ADVIA 2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C ；科华KHB 卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M ；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray 420；英诺华D280；特康TC6010L ；锦瑞GS400；普康6066。
AMY 文档,α-淀粉酶测定试剂盒(α-AMY)检测标准操作规程
1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司α-淀粉酶测定试剂盒(α-AMY)测定方法 2、适用范围：适用于人血清、血浆或尿液α-淀粉酶(α-AMY)的测定。
3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。
3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃～8℃有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定14天，试剂不可冰冻。
3.3 仪器：迈瑞BS-2000M 全自动生化分析仪. 4、操作程序4.1方法原理本试剂采用亚乙基-pNP-G 7（E-pNP-G 7）为底物，防止外酶分解。
5E-pNP-G 7 + 5H 2O2E-G 5 + 2pNP-G 2 + 2E-G 4 + 2pNP-G 3 + E-G 3 + pNP-G 42pNP-G 2 + 2pNP-G 3 + pNP-G 4 +14H 2O5pNP +14G 式中G 为葡萄糖，pNP 为对硝基苯酚，对硝基苯酚与样本中α-AMY 的含量成正比，通过在波长405nm 处测定吸光度的上升速率，即可计算出样本中α-AMY 的活力。
4.2样本要求血清、血浆或尿液。
保存于2℃～8℃可稳定2周。
4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M 全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。
4.3.2 校准：α-AMY葡萄糖苷酶4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。
当有以下情况时需重新定标：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行定标，定标通过后进行检测。
4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。
4.3.3 测试基本参数4.4参考范围血清/血浆：<100 U/L尿液：<460 U/L（注：各实验室应有自己的参考范围）4.5 方法评价线性范围：5～1500）U/L。
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血清a -淀粉酶（AMS 测定
1. 实验原理
AMS 测定采用酶动态比色测定法。
所用底物为4,6- 亚乙基
-:,D-麦芽七糖苷-对硝基苯酚（EPS — G 7 ）。
样品中 :一淀粉酶分解底物EPS — G ,生成对硝基苯酚（PNP ）, 在405nm 处比色，吸光度的上升速率与样品中一淀粉酶 的活力成正比。
2
G 2PNP 5EPS-G + 5HO
:-淀粉酶 2
GPNP
:
-葡萄
糖苷酶
2G 2PNP+ 2GPNP + GPNP+ 14甩0
（反应式中PNP 对硝基苯酚；G:葡萄糖） 2. 标本采集与处理：
亚乙基一G 5 + 2
亚乙基一G + 2 G 3PNP
亚乙基一G
+ + 14G
2.1病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆、尿液。
2.3血清分离血清或血浆应在收集后尽快分离出来。
未酸化的尿液，随机或限时收取。
3. 标本存放：不要用嘴吸取标本或对标本吹气，以免唾液污染标本唾液中的淀粉酶使结果升高。
血清淀粉酶在20〜25 C稳定一个星期，避免微生物降解作用；在2〜8 C 时稳定一个月。
尿液样品在2〜8 C可稳定10天，在15〜25 C可稳定2天。
对于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的稳定性减弱，因此，储存前pH值应调至大约7.0。
4. 标本运输：常温条件下运输
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血的不能做测定。
6. 实验材料：
6.1 AMS测定试剂盒（试剂1 6 X 64 ml +试剂2 6 X 16 ml ）
6.1.1 试剂组成
试剂1 :
GOODS 缓冲液pH 7.1 100mmol/L
50mmol/L
氯化钠
氯化镁10mmol/L
-葡萄糖苷酶> 23KU/L
试剂2 :
EPS—G 3mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2〜8C ,
若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
6.1.5 注意事项：唾液和皮肤中含有〉-淀粉酶，应避免用嘴吸取试剂，避免皮肤接触试剂。
试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。
6.2校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：无需手工计算，在37 °C每个标本的结果仪器自动以U/L报告。
手工测定计算方法为：
:-淀粉酶（U/L） = △ A/ min x F
反应总体积（ml ）x 1000
F = ________________________________________________
毫摩尔消光系数x样品体积（ml）x比色杯光径注：1000 = IU/ml到U/L的转换系数
PNP在405 nm 处的毫摩尔消光系数：9.90
12. 参考值范围
血清或血浆16-108U/L
随机尿液100-1200U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：-淀粉酶是将淀粉降解为麦芽糖的水解酶类。
人体内的-淀粉酶来源于多种器官：胰淀粉酶由胰腺产生并释放到肠道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。
血液中的淀粉酶由肾脏清除并经尿液排泄。
因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。
检测血清、尿液中-淀粉酶活力主要用于诊断胰腺功能紊乱和监测并
发症的发展。
急性胰腺炎发作病人在腹痛开始后的几小时内，血液
淀粉酶活力升高，约12小时后达到峰值；并至少在5天后活力回复
至参考范围内。
由于多种非胰腺疾病如腮腺炎、肾功能不全等也会
引起-淀粉酶的升高，所以-淀粉酶对胰腺功能紊乱的诊断特异性不
高。
因此，为了确诊急性胰腺炎，还应进行脂肪酶检测
14. 操作性能
14.1 线性范围：3〜2400U/L
14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法7,AU2700批内不精密度小于5%,总不精密度小于10%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对100 个样品进行AMY活力检测，将检测结果作方法学比较，
其统计结果如下：y=1.00x+1.00U/L ; r=0.998
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为3U/L。
14.5 病人结果可报告范围：3〜2400U/L
15. 超出范围结果处理：本法线性上限为2400U/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9 %氯化钠溶液作1 : 10稀释，重新测定，结果乘以11。
16. 病危报警值的处理当血清AMS>300U/L时，在经过复查等确认手段处理
后应及时向临床主管医生汇报。
17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为2400U/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9 %氯化钠溶液作1 : 10稀释，重新测定，结果乘以11 O
17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度叮704」mol/L，胆红
素浓度岂6845ol/L ,甘油三酯浓度叮1.3mmol/L时没有观察到干
扰。
即使极低浓度的血红蛋白都会对检测产生干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献：
1. Friedma n,R.B. and Youn g,D.S.Effects of Diseases on
Cli nical Laboratory Tests,2 nd Editio n,AACC
Press,Washi ngto n,DC,1989.
2. Blair,H.E.,Ge nzyme,US Pate nt Pendin g.
3. Tietz,N.W.(Ed), Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Editio n,W.B. Sau nders,1990.
4. He nry,R.J.,Ca nnon ,D.C.a nd Win kelma n,J.W.,Cli ni cal Chemistry,Pri nciples & Tech nciques,2 nd Editi on ,Harper & Row,943-949;1974.
5. NCCLS,I ntefere nee Testi ng in Cli ncial
Chemistry,EP7-P,1986.
6. Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory
Tests,4th Editi on ,AACC Press,1995.
7. NCCLS,Evaluatio n Protocol EP5-T2,1992.
8. Rauscher,E. et al.,Frese nius Z, An alyt.
Chem.,324,304;1986.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。