有机溶剂残留量

方法学验证：
方法学验证试验一般包括： ➢ 专属性 ➢ 检测限 ➢ 准确度 ➢ 定量限 ➢ 线性 ➢ 耐用性
提高检测灵敏度的方法
➢利用盐析作用，即在水溶液中加入无机盐来改 变挥发性组分的分配系数。 ➢在有机溶液中加入水，可以减少有机物在有机 相中的溶解度，增大其在顶空气体中的含量 ➢减小相比提高分析灵敏度，如使用小体积的顶 空瓶或加大供试品溶液的体积。 ➢可适当提高平衡温度以减小分配系数，从而提 高分析灵敏度。
谢谢大家！
原料药残留溶剂试 验的要求及常见问 题分析
周立春 2011.4
主要内容
1. 前言 2. 药物残留溶剂研究对象的确定原则 3. 质量标准的制订和修订 4. 残留溶剂测定方法包含要素及常见问题
前言
1) 残留溶剂定义 2) 残留溶剂的分类 3) 药物中残留溶剂的特点 4) 药物研发中残留溶剂研究存在问题
一般依据待测溶剂极性选择毛细管色谱柱。 ➢实践证明，使用非极性至中等极性色谱柱，配合 适当梯度升温程序可分离大部分有机溶剂。 ➢当分析溶剂数目较多时，为了使组分得到较好分 离建议优选非极性至中等极性色谱柱。增加色谱柱 的柱长和膜厚是增加分离的有效手段。
注意问题：
➢ 当待测溶剂仅有两三种时，可选择极性较 强色谱柱，优点为出峰快、分析时间短。
▪ 催化燃烧检测器(CCD)用于对可燃性气体 及化合物的微量分析
▪ 光离子化检测器(PID)用于对有毒有害物质 的痕量分析
进样方式：
➢ 直接进样 ➢ 顶空进样
直接进样： ➢ 在室温条件下样品必须溶解。 ➢ 样品中不挥发组分对GC进样口、色谱柱
产生不同程度的污染。 ➢ 因进样口温度较高，使得样品容易发生
药物残留溶剂研究对象的确定原则：
第一类溶剂 考虑到其毒性，建议做相 应的替代研究，尽量避免使用。如不得 不使用，建议严格控制残留量，且无论 在任何步骤使用，均需进行检测。
药物残留溶剂研究对象的确定原则：
第二类溶剂 应限制使用，无论在任何 步骤使用，均需进行检测。
药物残留溶剂研究对象的确定原则：
质量标准的制订和修订
一般依据临床研究前、临床研究期间及产 品上市后等不同阶段对药物的研究结果， 制订和修订相应的质量标准。
由于不同的生产企业采用不同的生产工艺 （使用不同的有机挥发性化合物）生产相同的药 品，因合成工艺纷繁复杂，有机溶剂的使用也情 况各异。因此，药物研发者应需根据所研究产品 的生产工艺确定检测对象，应是具体问题具体分 析。
➢ 方法建立时应对顶空瓶的平衡温度及时间 进行考察，并在质量标准中明确表述。
溶媒 :
➢溶媒的选择原则是能溶解样品，且对色谱 柱无损坏。
➢最常用的溶媒为水、DMF和DMSO
注意问题：
1.如待测溶剂为水溶性不好的溶剂， 且选择水为溶媒时，可先用少量乙醇 或甲醇溶解待测溶剂后再用水稀释的 方法配制对照品溶液。 2. 避免所选溶媒干扰测定。
药物中有机溶剂的来源：
原料药与辅料中有机溶剂主要来源于合 成过程中的引入，包括： ➢ 作为合成原料或反应溶剂引入 ➢ 作为反应副产物 ➢ 由其他合成原料或其他溶剂带入
药物中有机溶剂的来源：
制剂中有机溶剂主要来源于: ➢ 原料药或辅料的带入 ➢ 制剂制备过程中的引入
薄膜衣片、透皮贴剂剂、胶囊剂、微囊剂
3.在采用顶空方式进样时，如待测溶 剂在有机相中的分配系数明显大于水 相，溶媒采用水时灵敏度明显高于采 用有机相。 4.有报道加5%SDS可助溶。
溶液的配制 ：
注意问题： 1.为了避免残留溶剂挥发，不可用超声或 加热方式溶解样品。如果采用顶空进样， 样品置顶空瓶并封盖之后可以超声或加热 溶解样品。 2.大颗粒样品不可以研磨取样，只能取原 态样品（或冷冻粉碎）。
Fra Baidu bibliotek
干扰峰的排除 ：
对于供试品色谱图中出现的未知峰，应进 行归属确认。 ➢ 分析是否为合成过程中使用而未进行残 留量研究的溶剂。 ➢ 分析是否为样品裂解峰。
系统适用性试验 ：
➢以待测物色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论 板数一般不低于5000；填充柱的理论板数一般 不低于1000。 ➢色谱图中，待测溶剂色谱峰与相邻色谱峰的 分离度应大于1.5。 ➢对照品溶液连续进样5次，以内标法测定时所 得待测物与内标物峰面积比的相对标准偏差（ RSD）不大于5％，以外标法测定时，所得待 测物峰面积的相对标准偏差（RSD）不大于10 ％。
0.5-50
对人体有低毒
50
没有足够毒性资料 的溶剂
常见残留溶剂
苯 四氯化碳
乙腈、三氯甲烷、 二氯甲烷、甲醇、
甲苯、正己烷
乙醇、丙酮、 醋酸乙酯 三氟乙酸 石油醚
药物中残留溶剂的特点
种类相对固定，中国药典规定了69种，与 ICH的要求相同 ； 在样品中具有不确定性； 残留量相对较低，一般在痕量或微量范围； 同一样品中不同溶剂的残留量相差较大
毛细管色谱柱：
➢ 非极性色谱柱 ➢ 弱极性色谱柱 ➢ 中极性色谱柱 ➢ 极性色谱柱
毛细管色谱柱常用固定液
非极性固定 弱极性固定 相
中极性柱固定相 极性柱固定相
固 1 0 0 ％ 二 甲 5 % 苯基-甲 1 4 % 氰 苯 6%氰苯基 聚 乙 二 醇 -
定 基聚硅氧烷 基聚硅氧烷 基 - 8 6 % 甲 -94%聚二 20M
升温速率与色谱柱最高使用温度、组 分的沸点及样品的复杂程度有关。 ➢ 顶空瓶平衡温度：一般依据检测溶剂 沸点、溶媒沸点及样品性质选择顶空 温度。
色谱柱温度注意问题：
实际应用时可依据所用色谱柱的长度、柱效 及待测溶剂分离情况合理改变梯度程序以满 足系统适用性试验的要求。
顶空瓶平衡温度注意问题：
➢ 对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的 平衡温度，但应同时兼顾供试品的热分解 特性，尽量避免供试品产生挥发性分解产 物干扰测定。
究 c. 不重视质量标准的修订
药物残留溶剂研究对象的确定原则
➢ 2010版药典凡例中规定：除正文已明确列有“残留溶剂” 检查的品种必须依法进行检查外，其他未在“残留溶剂” 项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项的品种， 如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录 “残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的规定
DB-1301, HPRtx-624, INNOWax,
SE-30, T-1, Rtx-5,SECP-Sil5CB， 54, 等
CP-
HP-1301, BP-20,CBP-
Sil19CB， Rtx-1301 20,
Rtx-1等
Rtx-1701 等
SUPEROX-2
等
Supelco-Wax
注意问题：
➢ 当待测溶剂与样品基质间有较强烈的相 互作用时，外标法与内标法的测定结果 较差，标准加入法因对照品溶液中加入 与样品相同基质而消除基质效应。
➢ 当待测溶剂与样品基质间没有较强的相 互作用时，内标法比外标法、标准加入 法的测定结果更加精准。
温度:
➢ 进样口温度：常用250ºC ➢ 检测器温度：FID通常设置为300ºC ➢ 色谱柱温度：初始温度、最终温度及
液
基 聚 硅 氧 甲基聚硅
烷
氧烷
商 DM-1,DB-1, DM-5,DB-5, DM-1701, AT-1301, DB-Wax,
品 HP-1, BP-1, HP-5,SPB- HP-1701,
名 SPB-1, ZB- 5, BP-5, SPB-7,
1,
SE-52,
ZB-1701,
DB-24, HP-Wax,
残留溶剂定义：
药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料 的生产中，以及在制剂制备过程中使用 的，但在工艺过程中未能完全去除的有 机溶剂。
残留溶剂的分类：
类别 第一类
第二类
第三类 第四类
毒性
PED(m g/天）
为人体致癌物、疑 为人体致癌物或环 境危害物
小于0.1
（1，1，1 －三氯乙
烷除外）
有非遗传致癌毒性、 或其他不可逆毒性、 或其他严重的可逆 毒性
热裂解。
顶空进样：
➢ 样品至少在顶空条件下溶解。 ➢ 样品中不挥发组分不影响GC分析。 ➢ 减轻样品中不挥发组分对GC进样口、色谱
柱的污染。
注意问题：
1.顶空进样体积可达到2ml气体，直接进样 体积一般为1至3l液体。 2.待测溶剂如在溶解样品的溶媒中溶解度小 时，采用顶空进样方式测得的灵敏度将大于 直接进样；反之，直接进样的灵敏度将大于 顶空进样。
药物研发中残留溶剂研究存在问题：
▪ 一、测定方法存在问题： a. 表述不全面或不准确。 b. 对色谱图中出现的未知峰未进行研究。 c. 试验条件未进行考察。 d. 方法学验证不全面。
药物研发中残留溶剂研究存在问题：
▪ 二、质量研究存在问题： 不进行研究（制剂）或研究不全面
▪ 三、质量标准的制订和修订中存在问题： a. 不重视数据积累 b. 不重视对中试规模、大生产规模产品的研
第三类溶剂 建议在合成过程的最后三步 使用，特别是在产品精制过程中使用时， 进行残留量的测定。
药物残留溶剂研究对象的确定原则：
第四类溶剂 因无足够毒性资料， 不能评估其使用的安全性，建议尽量 不使用。如必须使用，建议注意中间 体的处理，尽量除尽；并依据结构和 理化性质，参考其他有机溶剂测定方 法进行检测和控制。
3.直接进样不应采用酸或碱做溶媒，同时要 求样品在室温下完全溶解于溶媒中。 4.测定二氯甲烷、三氯甲烷等卤代烃时，如 果溶剂为水，直接进样容易造成FID检测器 灭火，建议选择顶空进样方式。
5.基质效应的影响：顶空分析的一大特点就 是对照溶液顶空气体的组成与供试品溶液的 组成不同，特别是那些在样品基质中溶解度 大的溶剂，其基质效应更为明显。
头孢泊肟酯中残留溶剂的测定
残留溶剂测定方法包含要素及常见问题
残留溶剂测定方法包含要素： ➢色谱柱 ➢检测器 ➢进样方式 ➢温度 ➢溶媒 ➢溶液的配制 ➢系统适用性试验
色谱柱：
填充柱： 固定相一般为直径0.25～0.18mm的二 乙烯苯－乙烯乙基苯型高分子多孔小球
因填充柱口径大，造成溶剂峰扩散，柱 效低，检测灵敏度低 。
➢ 除另有规定外，极性相近的同类色谱柱间 可相互代替使用。
检测器：
常用检测器 ➢火焰离子化检测器（FID）
含碳化合物 ➢电子捕获检测器（ECD）
电负性物质（卤代烃） ➢氮磷检测器（NPD）
氮/磷化合物 ➢热导检测器（TCD)
有机物、无机物
检测器：
▪ 火焰光度检测器(FPD)用于有机磷、硫化 物的微量分析