流式细胞术基本原理及应用
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流式细胞术基本原理及应 用
Freq
Two-Color Cell Analysis
Which of the three populations has the most Ab A binding sites?
Ab A 流式细胞术基本原理及应 用
Ab B
双色荧光散点图
流式细胞术基本原理及应 用
现代流式细胞仪包括
12 mL/min
Optical Cuvette
Laminar Flow
High Sample Flow Rate
60 mL/min
Laminar Flow
Sheath
Sheath Sample
流式细胞术基本原理及应 用
Sheath
Sheath Sample
Review Question
Which of the following would cause disturbance in the laminar flow of the optical cuvette?
用
散射光
—散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态 上的差异 - 通常使用“散点图”来看散射光信号 - 散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的 数据
流式细胞术基本原理及应 用
散点图——Dot Plot
流式ly细se胞d w术h基ol本e b原lo理od及应
用
Review Question
Dead cells are known to be smaller and to exhibit more internal complexity than live cells. Which of the populations on this plot would you expect to be dead?
460 500 540
Shortpass
460 500 540
Bandpass
460 500 540
LP 500
SP 500
BP500/50
流式细胞术基本原理及应 用
FACSCalibur光路图
流式细胞术基本原理及应 用
Optics
Laser 488 nm
635 nm
Fluorochromes
FITC PE PerCP APC
fluidic stream
• Collection optics consist of:
Filters that direct the signals to the appropriate optical detectors
流式细胞术基本原理及应 用
Optical Filters
Longpass
—液流系统
聚焦细胞以供检测
—光学系统
激发和收集光信号
—电子系统
将光信号转化为电信号，并使其数字化以供 计算机分析
流式细胞术基本原理及应 用
液流系统
— 液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处
流式细胞术基本原理及应 用
Sample Flow in Optical Cuvette
Low Sample Flow Rate
GFP PI PerCP-CY5.5
Detector Parameter
FL1 FL2 FL3 FL4
Filter
530/30 585/42 670LP 661/16
流式细胞术基本原理及应 用
Electronics
—Converts analog signals to proportional digital signals
流式细胞术原理及应用
For FCM Training
流式细胞术基本原理及应用
流式细胞术
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可 以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常 是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加 以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、 及人工合成微球等
入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性。
流式细胞术基本原理及应 用
前向角散射光 ——FSC
—Forward Angle Light Scatter
Laser
FALS Sensor
流式细胞术基本原理及应 用
侧向角散射光——SSC
Laser
FALS Sensor
流式细胞术基本90原LS理及Se应nsor
Focused laser beam
流式细胞术基本原理及应 用
流式细胞仪的光信号
—散射光信号 —荧光信号
流式细胞术基本原理及应 用
1. 散射光信号
•前向角散射光（FSC,Forward
Scatter） 入射激光的同向散射光信号 细胞相 对大小及其表面积。
•侧向角散射（SSC, Side Scatter）
流式细胞术基本原理及应 用
2. 荧光信号
荧光素吸收激光能量 荧光素将吸收能量释放，转换为
振动能和热能 释放较入射光波长更长的光量子
荧光素与特异抗体结合 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信
号越强
流式细胞术基本原理及应 用
荧光检测器
FALS S源自文库nsor
Fluorescence
Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)
Voltage
Laser Laser Laser
A. bubbles B. cellular concentration C. sample flow rate
流式细胞术基本原理及应 用
Optics
• Excitation optics consist of:
Lasers Lenses and mirrors that route the laser light to the
—Computes Height for each pulse —Calculates width and area —Interfaces with the computer for data transfer
流式细胞术基本原理及应 用
Creation of a Voltage Pulse - Analog Signal
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以 定量
流式细胞术基本原理及应 用
流式细胞仪系统
简介 —通过流式细胞仪我们可以得到以下信息
- 相对细胞大小 - 相对细胞颗粒密度和内部复杂度 - 染色过细胞的相对荧光强度
流式细胞术基本原理及应 用
Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals
Freq
Two-Color Cell Analysis
Which of the three populations has the most Ab A binding sites?
Ab A 流式细胞术基本原理及应 用
Ab B
双色荧光散点图
流式细胞术基本原理及应 用
现代流式细胞仪包括
12 mL/min
Optical Cuvette
Laminar Flow
High Sample Flow Rate
60 mL/min
Laminar Flow
Sheath
Sheath Sample
流式细胞术基本原理及应 用
Sheath
Sheath Sample
Review Question
Which of the following would cause disturbance in the laminar flow of the optical cuvette?
用
散射光
—散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态 上的差异 - 通常使用“散点图”来看散射光信号 - 散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的 数据
流式细胞术基本原理及应 用
散点图——Dot Plot
流式ly细se胞d w术h基ol本e b原lo理od及应
用
Review Question
Dead cells are known to be smaller and to exhibit more internal complexity than live cells. Which of the populations on this plot would you expect to be dead?
460 500 540
Shortpass
460 500 540
Bandpass
460 500 540
LP 500
SP 500
BP500/50
流式细胞术基本原理及应 用
FACSCalibur光路图
流式细胞术基本原理及应 用
Optics
Laser 488 nm
635 nm
Fluorochromes
FITC PE PerCP APC
fluidic stream
• Collection optics consist of:
Filters that direct the signals to the appropriate optical detectors
流式细胞术基本原理及应 用
Optical Filters
Longpass
—液流系统
聚焦细胞以供检测
—光学系统
激发和收集光信号
—电子系统
将光信号转化为电信号，并使其数字化以供 计算机分析
流式细胞术基本原理及应 用
液流系统
— 液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处
流式细胞术基本原理及应 用
Sample Flow in Optical Cuvette
Low Sample Flow Rate
GFP PI PerCP-CY5.5
Detector Parameter
FL1 FL2 FL3 FL4
Filter
530/30 585/42 670LP 661/16
流式细胞术基本原理及应 用
Electronics
—Converts analog signals to proportional digital signals
流式细胞术原理及应用
For FCM Training
流式细胞术基本原理及应用
流式细胞术
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可 以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常 是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加 以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、 及人工合成微球等
入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性。
流式细胞术基本原理及应 用
前向角散射光 ——FSC
—Forward Angle Light Scatter
Laser
FALS Sensor
流式细胞术基本原理及应 用
侧向角散射光——SSC
Laser
FALS Sensor
流式细胞术基本90原LS理及Se应nsor
Focused laser beam
流式细胞术基本原理及应 用
流式细胞仪的光信号
—散射光信号 —荧光信号
流式细胞术基本原理及应 用
1. 散射光信号
•前向角散射光（FSC,Forward
Scatter） 入射激光的同向散射光信号 细胞相 对大小及其表面积。
•侧向角散射（SSC, Side Scatter）
流式细胞术基本原理及应 用
2. 荧光信号
荧光素吸收激光能量 荧光素将吸收能量释放，转换为
振动能和热能 释放较入射光波长更长的光量子
荧光素与特异抗体结合 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信
号越强
流式细胞术基本原理及应 用
荧光检测器
FALS S源自文库nsor
Fluorescence
Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)
Voltage
Laser Laser Laser
A. bubbles B. cellular concentration C. sample flow rate
流式细胞术基本原理及应 用
Optics
• Excitation optics consist of:
Lasers Lenses and mirrors that route the laser light to the
—Computes Height for each pulse —Calculates width and area —Interfaces with the computer for data transfer
流式细胞术基本原理及应 用
Creation of a Voltage Pulse - Analog Signal
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以 定量
流式细胞术基本原理及应 用
流式细胞仪系统
简介 —通过流式细胞仪我们可以得到以下信息
- 相对细胞大小 - 相对细胞颗粒密度和内部复杂度 - 染色过细胞的相对荧光强度
流式细胞术基本原理及应 用
Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals