蛋白酶水解酪蛋白透明圈初筛方法的条件探索与应用效应
蛋白质酶解技术及其在药物研究中的应用
蛋白质酶解技术及其在药物研究中的应用在药物研究领域中，蛋白质酶解技术是一项非常重要的技术。
通过蛋白质酶解技术可以将复杂的蛋白质结构分解成小分子的氨基酸，揭示蛋白质的结构和功能，从而为药物研究提供了更丰富的信息。
本文将详细介绍蛋白质酶解技术及其在药物研究中的应用。
一、蛋白质酶解技术简介蛋白质酶解技术是一种将蛋白质分解成氨基酸的技术。
它可以通过化学、酶法、微生物发酵等不同方式来实现。
其中，酶法是一种常用的蛋白质酶解方法。
目前，常用的蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶、丝氨酸蛋白酶等。
蛋白质酶解技术的实现需要注意的是酶解的条件。
酶解的条件包括酶解酶的种类、酶解时间、酶解温度和pH值等。
这些条件的选择需要根据不同的蛋白质种类和要研究的问题进行确定。
二、蛋白质酶解技术在药物研究中的应用（一）蛋白质药物的研究在蛋白质药物的研究中，蛋白质酶解技术可以用来揭示蛋白质的结构和活性区域，为药物研究提供重要依据。
例如，通过蛋白质酶解技术可以将降钙素原酶解成活性的降钙素，揭示其生物活性和作用机制，为药物研究提供重要参考。
此外，蛋白质酶解技术还可以用于评价蛋白质药物的品质和稳定性。
通过蛋白质酶解技术可以分析蛋白质药物的氨基酸序列、糖基化状态和空间结构等信息，为蛋白质药物制备和品质控制提供重要参考。
（二）蛋白质质量分析蛋白质酶解技术还可以用于蛋白质的质量分析。
蛋白质酶解后的氨基酸序列可以通过质谱分析等技术进行鉴定和定量分析，从而获得蛋白质的分子量、氨基酸组成和糖基化状态等信息。
这些信息对于深入研究蛋白质的结构和功能以及药物研究具有重要意义。
（三）蛋白质互作研究蛋白质酶解技术还可以用于研究蛋白质的互作。
利用蛋白质酶解技术可以将蛋白质分解成多个片段，然后通过质谱分析等技术确定不同片段中的氨基酸序列和质量。
通过这些信息可以确定蛋白质片段之间的互作关系，为研究蛋白质互作提供了新的手段。
三、结语综上所述，蛋白质酶解技术在药物研究中具有重要的应用价值。
碱性蛋白酶对酪蛋白水解的最适宜条件
碱性蛋白酶对酪蛋白水解的最适宜条件
孙浩;蔡兴旺
【期刊名称】《大连工业大学学报》
【年(卷),期】2003(022)001
【摘要】蛋白质酶解是改善蛋白质特性,便于人体吸收的有效途径.我们对富含于乳制品中的酪蛋白,采用碱性蛋白酶进行水解实验.通过对主要影响因素的分析及回归方法,确定碱性蛋白酶对酪蛋白水解的最佳工艺条件:温度55 ℃,酶-底物比为7%,底物质量分数为6%,pH值为8.
【总页数】3页(P25-27)
【作者】孙浩;蔡兴旺
【作者单位】大连轻工业学院,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034;大连轻工业学院,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034
【正文语种】中文
【中图分类】TQ925.2
【相关文献】
1.利用2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPPs的研究 [J], 庞广昌;胡志和;陈庆森;刘剑虹
2.不同条件对胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影响 [J], 于传瑞;杜开书;吴菲;申文鹏;娄伟强;丁凯;李淑梅
3.碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化 [J], 田中原;王亚萍;刘屾;任毅;冯欣;孙建华
4.不同条件对胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影响 [J], 于传瑞;杜开书;吴菲;申文鹏;娄伟强;丁凯;李淑梅;
5.碱性蛋白酶水解劣质干酪素制备酪蛋白磷酸肽的研究 [J], 郑丽娜;张兰威
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酪蛋白磷酸肽的酶水解条件研究
酪蛋白磷酸肽的酶水解条件研究轩诗海;张铁涛【摘要】本研究主要是以粗制的干酪素为原料,采用单因素分析和四因素三水平L9(34)正交试验.确定用碱性蛋白酶从水解的原料-劣质干酪素中提取酪蛋白的最佳条件是温度55℃、pH9.0、时间2.5 h、原料浓度为15%.【期刊名称】《生命科学仪器》【年(卷),期】2011(009)001【总页数】3页(P59-61)【关键词】酪蛋白磷酸肽;干酪素【作者】轩诗海;张铁涛【作者单位】黑龙江省完达山乳业股份有限公司;琼州学院化学系【正文语种】中文近年来，生物活性肽作为保健食品市场的新生力量显示出了强大的市场潜力。
乳源性生物活性肽是生物活性肽中最重要的一类，乳源性生物活性肽的种类繁多，目前已发现的有阿片肽、免疫促进肽、阿片拮抗肽、抗高血压肽、抗血栓肽、酪蛋白磷酸肽和其它一些生物活性肽［1,2］，其中酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides，CPPs）是发现较早的一种，酪蛋白磷酸肽是蛋白酶水解酪蛋白后形成的一种含成簇磷酸丝氨酸基团的生物活性短肽，因其具有促进矿物质吸收，特别是钙质吸收等多种生物活性而倍受关注。
本研究主要是以粗制的干酪素为原料，采用四因素三水平L9（34）正交试验，确定碱性蛋白酶水解干酪素制备酪蛋白磷酸肽的最佳工艺条件［3,4,5］。
1 材料与方法1.1 原料与主要试剂本试验所用的原料是甘肃华羚乳品集团公司工业精一级干酪素，颜色呈淡黄色，其主要成分见表1-1，其它化学试剂均为分析纯。
1.2 碱性蛋白酶水解干酪素制备CPPs单因素试验为了确定正交试验各因素的水平范围，以水解度为指标，对影响蛋白酶水解的[E]/[S]、pH、温度和时间做单因素分析。
1.2.1 [E]/[S]对水解度影响固定底物浓度为15%，pH为9.0，温度为50℃，水解时间为2.0 h。
选取[E]/[S]为 400 u/g～2000 u/g（相差为400 u/g），对底物进行水解。
北京理工大学生物实验产蛋白酶菌种的分离与纯化
产蛋白酶菌种的分离与纯化--初筛一、目的要求1 学习蛋白酶产生菌的筛选方法。
2 掌握稀释涂布平板法从自然环境中分离纯化微生物的基本操作技术。
3 进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术。
二、基本原理土壤是微生物生长的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化得到许多有价值的菌株。
工业微生物菌种最初都来自于自然界。
但是自然界中微生物种类繁多，而且都是混居在一起的，要获得工业发酵菌株，首先必须把它们从混杂的微生物群体中分离出来。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的方法有：简单单细胞挑取法和平板分离法。
本实验用平板分离法。
平板分离法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理包括两个方面：(1)选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养，酸碱度，温度和氧等或加入某种抑制剂造成只利于该微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
(2)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获取单个菌落的方法可通过稀释涂平板法或平板划线等技术完成。
值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单菌落并不一定保证是纯培养。
因此纯培养的确定要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
蛋白酶是一类重要的工业用酶制剂，它能将蛋白质分解成短肽甚至氨基酸。
根据三氯乙酸能将酪蛋白变性从而产生沉淀这一原理，可在平板培养基上直接筛选蛋白酶产生菌株。
产酶菌株能将酪蛋白水解成小分子物质，菌落周围不形成沉淀蛋白而出现透明圈，根据透明圈大小还能判断产酶活力。
三、实验器材与试剂1 样品土壤样品。
2 培养基酪素培养基配方如下：葡萄糖0.5gNaCl 5gK2HPO4 0.5gKH2PO4 0.5g干酪素10g蒸馏水1000ml琼脂20gpH 7.5115℃灭菌30min。
一株高产蛋白酶菌株的筛选及其产酶条件(
一株高产蛋白酶菌株的筛选及其产酶条件*林玩庄，林淑娜，陈汶聪，刘荣莲，黄可佳，黄丹敏，谢桂仁，陈宇豹，邓毛程，王瑶，李静广东轻工职业技术学院，广州，510300摘要：为了提高水产行业蛋白质资源的综合利用率，从南海海域大型鱼类的肠道中筛选蛋白酶高产菌株。
采用平板透明圈法和摇瓶发酵法进行筛选，获得一株蛋白酶高产菌株PE11。
通过菌体形态观察、生理生化实验和16S rDNA鉴定，菌株PE11被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
通过摇瓶发酵试验，优选出可溶性淀粉和牛肉膏分别为最佳的碳源和氮源，并确定菌株PE11产蛋白酶的最佳条件为：温度30 °C、初始pH7.0、转速200 rpm和时间36 h。
在最佳的产酶条件下，发酵液中的蛋白酶活力可达376 U/mL。
关键词：蛋白酶；高产；筛选；产酶条件Study on screening and enzyme-producing conditions of a highprotease producing strainLING Wan-zhuang, LING Shu-Na, CHEN Wen-cong, LIU Rong-lian, HUANG Ke-jia, HUANG Dan-min, XIE Gui-ren, CHEN Yu-bao, DENG Mao-cheng, WANG Yao, LI Jing(Guangdong Industry Technical College, Guangzhou 510300)Abstract：In order to improve the comprehensive utilization rate of protein resources from aquatic industry, strains having the ability to produce protease were isolated and screened from the gastrointestinal tract of large fish of South China Sea. Using flat transparent circle and shake flask fermentation test, a high producing protease strain PE11 was obtained. The strain PE11 was identified as Bacillus amyloliquefaciens through the systematic investigations of morphology, physiological and biochemical characteristics and 16S rDNA sequences analysis. By means of shake flask fermentation tests, the optimal carbon resource and nitrogen resource for strain PE11 were soluble starch and beef extract, respectively. In addition, the best conditions for protease-producing were determined as temperature of 30 °C, initial pH of 7.0 and rotation speed of 200 rpm. At the optimal condition, the highest protease activity of fermentation broth reached 376 U/mL.Key words：protease；high producing；screening；enzyme-producing condition*基金项目：广东高校特色调味品工程技术开发中心建设项目（GCZX-B1103），广东省教育部产学研结合项目（2012B091000040），广东轻工职业技术学院自然科学启动基金项目（KJ201307），广东轻工职业技术学院自然科学启动基金项目（KJ201203）。
蛋白质酶解技术及其应用
蛋白质酶解技术及其应用蛋白质酶解技术是一种通过酶的作用来将蛋白质分解为较小的片段的方法。
这种技术在生物学和生物化学研究中得到了广泛的应用。
本文将介绍蛋白质酶解技术的原理和应用，并探讨其在生物研究领域的重要性。
一、蛋白质酶解技术的原理蛋白质酶解技术是通过酶的特异性作用来将蛋白质分解为较小的肽段或者氨基酸残基。
蛋白质酶是特异性酶，它们在特定的条件下作用于蛋白质分子，将其水解为比较小的片段。
常用的蛋白质酶有胃蛋白酶、胰蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和蛇毒蛋白酶等。
每种蛋白质酶都有特定的作用靶点和作用条件。
例如，胃蛋白酶主要作用于具有芳香性氨基酸的肽键，胰蛋白酶则能够识别和水解含有碱性氨基酸的肽键。
二、蛋白质酶解技术的应用1. 蛋白质酶解在蛋白质分析中的应用蛋白质酶解技术在蛋白质分析中起到了至关重要的作用。
通过将蛋白质酶解成一系列肽段，可以方便地进行质谱分析和蛋白质定量。
此外，蛋白质酶解还可用于特定蛋白质的识别和富集，为蛋白质组学研究提供了有效的工具。
2. 蛋白质酶解在药物研发中的应用蛋白质酶解技术在药物研发中扮演着重要的角色。
药物的研发过程中，需要对目标蛋白质进行结构和功能研究。
蛋白质酶解可将蛋白质分解为较小的肽段，有助于进一步了解蛋白质的结构和功能。
此外，蛋白质酶解还可用于药物的靶标识别和筛选，对于药物设计和优化具有重要意义。
3. 蛋白质酶解在食品工业中的应用蛋白质酶解技术在食品工业中有广泛的应用。
例如，酶解大豆蛋白可产生味道浓郁的酱油和豆酱；酶解鱼肉蛋白可用于生产鱼肉酱和鱼丸等食品；酶解牛奶蛋白可制作出口感细腻的酸奶和奶酪等。
4. 蛋白质酶解在环境保护中的应用蛋白质酶解技术在环境保护领域也发挥着重要作用。
例如，通过利用酶类对废水中的污染物进行降解，可以实现废水的净化和回收利用。
此外，蛋白质酶解还可用于生物能源的开发，通过酶解蔗糖等生物质材料，生产出生物能源如生物乙醇。
三、蛋白质酶解技术的前景蛋白质酶解技术以其独特的特异性和高效的分解能力在各个领域得到了广泛的应用，并取得了显著的成果。
酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究
酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究胡文琴;王恬;霍永久;张金霞【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2004(025)004【摘要】采用正交试验设计,以羟自由基清除率为衡量指标,筛选三种蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件.试验结果表明,木瓜蛋白酶最佳酶解条件为pH7.5,酶浓度8%,温度45℃,反应时间90min,羟自由基清除率为71.28%,与同浓度维生素C、维生素E的清除率差异均不显著(p＞0.05);枯草杆菌蛋白酶(As1.398)最佳酶解条件为pH7.0,酶浓度2%,温度50℃,反应时间90min,羟自由基清除率为68.60%;胃蛋白酶最佳酶解条件为:pH1.4,酶浓度6%,温度37℃,反应时间30min,羟自由基清除率为66.53%.试验发现,不同的酪蛋白酶解物都有抗脂质过氧化作用,最大抑制率为59.28%.【总页数】5页(P158-162)【作者】胡文琴;王恬;霍永久;张金霞【作者单位】南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095【正文语种】中文【中图分类】R151.2【相关文献】1.牛乳酪蛋白酶解物的分离纯化及抗菌肽乳基料的制备研究 [J], 熊清权;李志成;童伟;郑晓莹;苏晋文;葛武鹏;任娇2.山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究 [J], 李志成;蒋爱民;熊清权;童伟;郑晓莹3.酪蛋白酶解物中抗菌肽的抑菌性及稳定性研究 [J], 杜军;袁永俊;侯恩娟;戴斌;胡丽丽;杨攀4.κ-酪蛋白酶解物对双歧杆菌的促生长效果研究 [J], 汤茜;李楠;成雪;毛学英;滕国新5.大米蛋白胃蛋白酶酶解物体外抗氧化作用的研究 [J], 王改琴;朱秋凤;张莉莉;王恬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白膜的动力学研究
木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白膜的动力学研究
左起亮;林锋;姚江武
【期刊名称】《口腔医学研究》
【年(卷),期】2011(27)10
【摘要】目的:采用消散因子石英晶体微天平(QCM-D)原位、实时和动态监测木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白生物膜的动力学过程,比较不同浓度酶的水解效率。
方法:用β-酪蛋白在QCM-D上建立体外蛋白膜模型,采用不同浓度的木瓜蛋白酶水解膜,观察频率和厚度的改变,运用Boltzmann方程对实验数据进行拟合,单因素方差分析和SNK-q检验比较水解参数B、Δh、V50和C。
结果:随着酶浓度增大,膜的厚度Δh减薄,ΔF上升增多,水解参数B增大,C减小,V50缩短(P<0.05)。
结论:在一定浓度范围内水解蛋白生物膜时,酶的水解效率随浓度增大而提高。
【总页数】3页(P853-855)
【关键词】消散因子石英微天平;木瓜蛋白酶;β-酪蛋白;Boltzmann方程
【作者】左起亮;林锋;姚江武
【作者单位】福建医科大学口腔医学院修复科;福建医科大学厦门市口腔医院修复科
【正文语种】中文
【中图分类】R783.1
【相关文献】
1.木瓜蛋白酶水解制备乳酪蛋白肽工艺条件的研究 [J], 陈新峰;王君虹;洪狄俊;周利亘
2.3种条件下木瓜蛋白酶水解唾液膜的动力学和形态学研究 [J], 姚江武;林锋;左起亮
3.木瓜蛋白酶水解对β-酪蛋白膜的润湿性和构象的影响 [J], 姚江武;左起亮;林峰
4.木瓜蛋白酶水解对β-酪蛋白膜的形态和黏弹性的影响 [J], 张怡;姚江武
5.消散石英晶体微天平对木瓜蛋白酶水解唾液膜的动力学研究 [J], 李水根;林志明;姚江武
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实验十一 产蛋白酶菌株的筛选
实验十一产蛋白酶菌株的筛选碱性蛋白酶是一类最适宜作用PH为碱性的蛋白酶，在轻工、食品、医药工业中用途非常广泛。
微生物来源的碱性蛋白酶都是胞外酶，具有产酶量高，适合大规模工业生产等优点，被认为是最重要的一类营业性酶类。
从自然界筛选获取有用的微生物资源一直是微生物学的一项重要工作，也是学习微生物学的学生应该掌握的基本技能。
一基本原理⏹自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈。
⏹水解圈与菌落直径的比值常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。
不同类型的蛋白酶都能在牛奶平板上形成蛋白水解圈，细菌在平板上的生长条件和液体环境中生长的情况相差很大，因此在平板上产圈能力强的菌株不一定就是碱性蛋白酶的高产菌株。
⏹碱性蛋白酶活力测定按中华人民共和国颁布标准QB747-80进行。
⏹原理：Folin试剂与酚类化合物（Tyr,Trp,Phe）在碱性条件下发生反应形成蓝色化合物，用蛋白酶分解酪蛋白生成含酚基的氨基酸与Folin试剂呈蓝色反应，通过分光光度计测定可知酶活大小。
二实验目的⏹学习用选择平板从自然界中分离胞外蛋白酶产生菌的方法⏹学习并掌握细菌菌株的药瓶液体发酵技术⏹掌握蛋白酶活力测定的原理与基本方法三实验器材1 菌株从自然界筛选获得的蛋白酶产生菌株2 溶液和试剂蛋白胨，酵母粉，脱脂奶粉，琼脂，干酪素，三氯醋酸，NaOH，Na2CO3,Folin试剂，硼砂，酪氨酸，水等3 仪器和用品三角烧瓶，培养皿，吸管，试管，涂布棒，玻璃搅拌棒，水浴锅，分光光度计，培养摇床，高压灭菌锅，尺，玻璃小漏斗和滤纸四操作步骤1 培养基和试剂的配制（1）牛奶平板：在普通肉汤蛋白胨固体培养基中添加终质量浓度为1.5%的牛奶（2）发酵培养基：玉米粉4%，黄豆饼粉3%，Na2HPO4 0.4%,KH2PO4 0.03%,3 mol/l NaOH 调节pH到9.0,0.1MPa 灭菌20min,250ml三角烧瓶的装瓶量为50ml。
产蛋白酶菌株的筛选与酶活力的测定【文献综述】
文献综述生物科学产蛋白酶菌株的筛选与酶活力的测定摘要[摘要]本文主要按照实验设计步骤从海水中筛选出可以产蛋白酶的放线菌，并对获得的放线菌进行初步研究，如形态观察以及酶活力的测定。
从舟山沿海中分离得到几株产蛋白酶的放线菌，并通过酪蛋白平板培养基，水解酪蛋白试验可对菌株的产酶情况进行定性研究，酶活较高的菌株都能产生较大的水解圈。
对其中2株产酶活性较高的菌株进行了以酪蛋白为底物的紫外分光光度法进行酶活性的测定。
[关键词]：蛋白酶；分离纯化；透明圈；酶活力1蛋白酶的简介水解蛋白质肽键的一类酶的总称。
按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。
内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的肽。
外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶[1]。
按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。
按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。
工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。
根据蛋白酶对所作用的反应底物的选择性，一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键。
种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。
如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。
2蛋白酶的广泛应用蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。
微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。
例如，乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)是一大类能在可利用的碳水化合物发酵过程中产生大量乳酸的细菌，目前已知有200多种LAB[2]。
相当多的LAB是益生菌，其作为益生菌有如下依据：其属于肠道正常菌群，对人和动物的健康是有益的[3]。
在农业、兽医、医学以及食品工业[4、5]中是很重要的。
如果对产蛋白酶的乳酸菌种进行了筛选，并将所产的蛋白酶进行了分离纯化，就可以为酸奶的生产研制和微生态制剂的研发提供更优良的菌种。
产蛋白酶菌的分离鉴定及产酶条件优化
产蛋白酶菌的分离鉴定及产酶条件优化王鼎;余淼;付洋洋;郭春华;彭忠利;高彦华【摘要】This research isolated protease-producing strain from cattle rumen,16 strains were selected by the casein hydrolysis bined HE value and protease activity,a strain(named A18)with the mighest activity of proteinase(415.82 U/mL)as the test strain.And it was identified as Aspergillusoryzae by morphological observation and 18S rDNA sequence analysis.We got the inoculation amount 4%,the optimum temperature 30 ℃,time 60 h through the single factor test.By th e response surface analysis(RSA)methods and repeated experiments,the optimal fermentation conditions were determined as follows:inoculation quantity 4%,temperature 29 ℃, time 55 h.The highest enzyme activity reached 527.57 U/mL,which increased by 22.6% than before optimization.%本试验菌源取自肉牛瘤胃液,首先用酪蛋白水解圈法初选出16株产蛋白酶菌株,综合HE值和蛋白酶活性,选出一株蛋白酶活性最高A18作为后续试验菌株,该菌株蛋白酶活为415.82 U/mL,通过形态和分子鉴定确定此菌株为米曲霉菌.单因素试验确定接种量为4%、培养温度为30℃、培养时间为60 h,通过响应面分析法及多次重复试验,得出接种量4%、温度29℃、时间55 h为其最佳产酶条件,最高酶活达527.57U/mL,比优化之前提高了22.6%.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2018(000)007【总页数】6页(P14-19)【关键词】蛋白酶;米曲霉;优化;响应面法【作者】王鼎;余淼;付洋洋;郭春华;彭忠利;高彦华【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;成都大帝汉克生物科技有限公司,四川成都611130;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】S816.3蛋白酶存在于动物、植物、微生物中，属于水解酶类，约占世界酶制剂销量的60%（马俊阳等，2014）。
高产蛋白酶纳豆芽孢杆菌的分离筛选与鉴定
高产蛋白酶纳豆芽孢杆菌的分离筛选与鉴定孙妍;王加启;奚晓琦;卜登攀;魏宏阳;周凌云【摘要】以北京、大连和日本3个产地的纳豆产品为试验材料,从中筛选可用于畜禽生产的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)蛋向酶高产菌株.先通过酪蛋白平板初筛得到9株芽孢杆菌,再以N1型纳豆芽孢杆菌为模式菌株,对初筛得到的菌株进行菌落和菌体形态观察、生理生化鉴定,确定有5个菌株为纳豆芽孢杆菌.测定5个菌株48 h发酵液中蛋白酶活性,结果表明:菌株NB1为蛋白酶高产菌株,发酵液中蛋白酶活性为19.41 U·mL-1,产蛋白酶特性在6代内可保持稳定.【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2010(041)002【总页数】6页(P175-180)【关键词】纳豆;纳豆芽孢杆菌;蛋白酶;筛选;鉴定【作者】孙妍;王加启;奚晓琦;卜登攀;魏宏阳;周凌云【作者单位】中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室,北京,100193【正文语种】中文【中图分类】Q939.11.8纳豆芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）是1906年SAWAMURA从日本传统大豆发酵食品——纳豆中分离得到一种产蛋白酶益生菌[1]。
除了具有抗菌、调节肠道微生物平衡、提高免疫力等益生功能，纳豆芽孢杆菌在增殖过程中还可以产生大量蛋白酶，能够提高畜禽体内消化酶活性[2]，促进消化道生长发育[3]，提高饲料的消化利用率[4]。
一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法[发明专利]
![一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/5e39478cf5335a8103d22005.png)
专利名称：一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法
专利类型：发明专利
发明人：徐煜,刘振民,游春苹
申请号：CN201610081013.5
申请日：20160204
公开号：CN105524978A
公开日：
20160427
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法。
该方法包括：(1)将微生物培养液离心、取上清液；(2)将一部分上清液加热；(3)将经过与未经过热处理的上清液与反应缓冲液混合，35-45℃反应2-3小时，终止反应，离心，取上清转移至多孔板，加入强碱溶液，检测
450nm吸光值；(4)将450nm吸光值换算为胞外蛋白酶酪蛋白水解活性；胞外蛋白酶的耐热性为经过热处理与未经过热处理的上清液中的胞外蛋白酶酪蛋白水解活性的比值。
本发明方法可以同时对微生物胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性进行定量测试，更加精确比较菌株之间的差异，使操作更便捷，节省了培养基，能够实现批量操作并可直接检测菌液上清。
申请人：光明乳业股份有限公司
地址：201103 上海市闵行区吴中路578号
国籍：CN
代理机构：上海弼兴律师事务所
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酶法水解酪蛋白的方法及水解产物[发明专利]
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(10)申请公布号 CN 102379359 A(43)申请公布日 2012.03.21C N 102379359 A*CN102379359A*(21)申请号 201010268478.4(22)申请日 2010.08.30A23J 3/10(2006.01)A23J 3/34(2006.01)(71)申请人内蒙古伊利实业集团股份有限公司地址010110 内蒙古自治区呼和浩特市金山开发区金山大道1号(72)发明人王彩云 云战友 石丹 荆莹(74)专利代理机构北京三友知识产权代理有限公司 11127代理人韩蕾(54)发明名称酶法水解酪蛋白的方法及水解产物(57)摘要本发明提供了一种酶法水解酪蛋白的方法，其中是利用复合酶技术水解酪蛋白降低其过敏原含量，所述的方法包括步骤：将欲进行酶解的酪蛋白溶解成酪蛋白溶液，先添加碱性蛋白酶进行水解，然后再添加胰蛋白酶进行水解，控制最终水解产物的水解程度为10％～20％。
本发明还提供了按照所述的方法制备得到的酪蛋白水解产物。
按照本发明的方法所得酪蛋白水解产物中分子量在180～1000Dal 的寡肽含量为50～90％，该水解产物吸收性好，且过敏原含量低，与原料相比过敏原含量降低99％以上。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 8 页1.一种酶法水解酪蛋白的方法，该方法包括步骤：将欲进行酶解的酪蛋白溶解成酪蛋白溶液，先添加碱性蛋白酶进行水解，然后再添加胰蛋白酶进行水解，控制最终水解产物的水解程度为10％～20％。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，碱性蛋白酶和胰蛋白酶的总添加量为10000～20000U/100mL。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，碱性蛋白酶与胰蛋白酶的添加比例为9～0.5∶1。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述酪蛋白溶液的浓度为5％～12％。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，先添加碱性蛋白酶进行水解，当水解程度为5％～10％时，再添加胰蛋白酶进行水解。
核酸水解酶的透明圈法
核酸水解酶的透明圈法
核酸水解酶的透明圈法是一种用于检测核酸水解酶活性的方法。
以下是对该方法的简单介绍：
1. 原理：该方法基于核酸水解酶能够分解核酸产生核苷和核苷酸的特性。
在特定的条件下，核酸水解酶将核酸分子切割成较小的片段，从而在琼脂平板上形成透明圈。
2. 实验步骤：
- 制备含有核酸的琼脂平板：将含有核酸的琼脂培养基倒在培养皿中，待其凝固。
- 接种：将待检测的微生物接种到琼脂平板上，并在适当的条件下培养。
- 观察：培养一段时间后，观察平板上是否出现透明圈。
如果微生物产生了核酸水解酶，它们会在生长过程中分解周围的核酸，形成透明圈。
3. 结果解释：如果平板上出现透明圈，说明该微生物具有核酸水解酶活性；透明圈的大小可以反映酶活性的强弱。
核酸水解酶的透明圈法是一种定性或半定量的方法，主要用于初步筛选和鉴定具有核酸水解酶活性的微生物。
对于更精确的酶活性测定和动力学研究，可能需要使用其他方法。
胃蛋白酶胰蛋白酶水解酪蛋白的研究
胃蛋白酶胰蛋白酶水解酪蛋白的研究
王芃
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2010(031)007
【摘要】主要研究胃蛋白酶、胰蛋白酶水解酪蛋白的过程.首先通过正交试验研究了胃蛋白和胰蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件,分别为酶浓度0.15%、温度55℃、pH7.5、底物浓度6%和酶浓度1%、温度55℃、pH=1.6、底物浓度1%.然后对于胃蛋白酶胰蛋白酶组合水解进行研究,最后通过层析分离和液相色谱初步验证了水解产物含有β-啡肽-7等生物活性多肤.
【总页数】5页(P143-147)
【作者】王芃
【作者单位】天津现代职业技术学院,天津,300222
【正文语种】中文
【相关文献】
1.胰蛋白酶水解酪蛋白生产CPP水解工艺条件的研究 [J], 牟光庆;曹冬梅;巩军;张丽萍
2.胃蛋白酶中性蛋白酶水解酪蛋白的研究 [J], 王立晖;卢楠;李培骏
3.胃蛋白酶水解酪蛋白生成β-酪啡肽-7的研究 [J], 王立晖;袁永俊;孙勇民;李培俊
4.胰蛋白酶水解法生产酪蛋白源活性肽的条件研究 [J], 周根来;方希修;方波
5.酪蛋白的胰蛋白酶水解物分离及其抗氧化性研究 [J], 秦娟娟; 何超群; 刘金龙; 李晶; 杨继涛; 杨敏
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酪蛋白水解物的酶法修饰优化与抗氧化活性改善
酪蛋白水解物的酶法修饰优化与抗氧化活性改善
吴丹;李铁晶;赵新淮
【期刊名称】《农业机械学报》
【年(卷),期】2010(041)001
【摘要】利用木瓜蛋白酶对酪蛋白水解,并对所得到的水解物进行类蛋白反应修饰,制备高活性抗氧化肽.以水解物的游离氨基含量变化为响应值,利用响应面分析法对类蛋白反应条件进行优化,得到适宜条件为:酶添加量为500 U/g,温度30℃,底物质量分数50%,反应时间5.6 h.毛细管电泳分析确认,水解物经类蛋白反应修饰后肽分子组成发生变化.抗氧化活性分析结果表明,所制备的3个修饰产物对3种自由基的清除能力显著提高.
【总页数】7页(P139-145)
【作者】吴丹;李铁晶;赵新淮
【作者单位】东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.1
【相关文献】
1.大豆蛋白水解物的酶法修饰及其亚铁和钙离子的螯合能力 [J], 张美玲;赵新淮
2.三种氨基酸添加下酶法修饰酪蛋白水解物的ACE抑制活性 [J], 汪敬科;赵新淮
3.酪蛋白水解物的中性蛋白酶修饰及其ACE抑制活性 [J], 徐微;赵新淮
4.酪氨酸存在下酪蛋白水解物的Plastein反应修饰与抗氧化活性影响 [J], 吴丹;赵新淮
5.丙醇-水介质中酪蛋白水解物的酶修饰与ACE抑制活性变化 [J], 赵博;赵新淮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蛋白质透明圈方法
蛋白质透明圈方法我折腾了好久蛋白质透明圈方法，总算找到点门道。
一开始我真的是一头雾水，根本不知道从哪下手。
我就先看了一些理论知识，那感觉就像是看天书似的，好多专业术语，什么蛋白质水解之类的。
我最初按照书上最简单的步骤尝试，先把含有蛋白质的底物和要检测其产生蛋白质水解酶能力的微生物放在一起，就像把两个小伙伴放在一个屋子里，看他们能不能产生点反应。
但是问题来了，我根本就没得到明显的透明圈。
后来我才发现，我底物的浓度可能没弄对，就像做饭盐放少了都没味道一样，底物浓度不够，那些微生物产生的酶即便在分解蛋白质也显示不出明显效果。
后来我重新调整底物浓度。
我也试过好几种不同的底物，就像想给微生物准备不同口味的菜，看它对哪种更来电。
我还得特别小心微生物的接种量，这个接种量啊，就像是往菜里放调料，多了少了都不行。
接种量太多的话，整个培养板上都是那种浑浊的状态，根本看不清楚透明圈，太少又可能酶产生的量不够看不到效果。
还有温度，这个可太重要了。
就如同人在不同的温度下干活积极性不一样，微生物在不同温度下产生酶的能力也不同。
我刚开始没太在意温度，有时候放在室温，有时候又放到温箱里但温度不合适，结果就不太好。
有一次啊，我感觉我一切都弄得差不多了。
底物浓度也好，微生物接种量合适，温度也控制好了，可透明圈还是不太明显。
我当时就特别沮丧，感觉自己又失败了。
后来我仔细检查，才发现我观察的时间点不对。
有些微生物产生酶分解蛋白质需要一定的时间，没到那个时间就去看，那肯定看不到完美的透明圈啊，就像菜没煮熟就着急去吃，味道肯定不对。
对了，还有培养容器的清洁度也很关键。
要是容器不干净，混合了别的物质，那就像在干净的水里滴入墨汁，整个系统就被污染了，可能会干扰透明圈的形成。
如果要做蛋白质透明圈这个实验，我的建议就是一定要多注意这些细节，从底物浓度、微生物接种量、温度、观察时间点到培养容器的清洁度都要严格控制心里有数。
书上讲的理论知识也得反复琢磨，结合自己的实际操作不断调整改进，这样才能得到比较理想的蛋白质透明圈。
具有免疫调节作用的酪蛋白水解产物制备条件的确定
具有免疫调节作用的酪蛋白水解产物制备条件的确定胡轶;胡志和;王丽娟;姚宇;周之鹏【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2009(030)011【摘要】以酪蛋白为原料,利用酶解法制备具有免疫调节作用的水解产物.用MTT 法测定不同水解条件下胰蛋白酶水解酪蛋白的水解产物对小鼠脾脏细胞免疫刺激指数,并以免疫刺激指数作为指标,确定出最佳的水解条件.结果表明,酪蛋白在不同水解条件下的水解产物,用1640培养液配成浓度为10μg/ml,采用MTT法测定小鼠脾脏淋巴细胞免疫刺激指数最大值为2.77,其水解条件为底物浓度4%、酶与底物比为1:90.【总页数】3页(P155-157)【作者】胡轶;胡志和;王丽娟;姚宇;周之鹏【作者单位】天津市食品生物技术重点实验室,天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津,300134;天津市食品生物技术重点实验室,天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津,300134;天津市食品生物技术重点实验室,天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津,300134;天津市食品生物技术重点实验室,天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津,300134;天津市食品生物技术重点实验室,天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津,300134【正文语种】中文【中图分类】Q93.3【相关文献】1.α-酪蛋白水解产物对高血压大鼠血压的影响 [J], 张艳;胡志和2.酪蛋白水解产物对含益生菌酸奶中益生菌数量的影响 [J], 张晓蕾;陈曦;陈庆森3.酪蛋白水解方法及水解产物功能性的研究进展 [J], 高长永;于鹏;张兰威;刘翠平;陈文亮4.甲醇芽孢杆菌蛋白酶的水解特性及酪蛋白水解产物活性分析 [J], 杨智杰;郑喆;蔡淼;赵笑;罗天淇;黎润坤;陈超;曹永强;杨贞耐5.酪蛋白水解产物对不同酸奶发酵时间及品质影响 [J], 罗安东;周雪松;曾建新;赵谋明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。