工厂化育苗

工厂化育苗复习材料提示：本材料只包含65分的考试题目，其他的35分需要大家自己多看看书、笔记和ppt。

1、褐变：指对于富含多酚化合物的植物，在接种时由于切割或剥离使组织收到伤害，该类物质会在多分氧化酶的作用下氧化褐变，是培养基变黑，并严重抑制外植体生长和分化，严重时导致培养物死亡。

2、玻璃化现象：指组织培养中，呈现半透明状的畸形试管植物，这类植物被称为“玻璃化苗”。

在离体培养中，再生植株长成玻璃苗的现象，被称做玻璃化作用。

3、胚状体：在离体培养条件下，植物离体培养的细胞、组织、器官也可以产生类似胚的结构，其形成也经了一个类似胚胎的发生和发育过程，这种类似胚的结构称为胚状体4、植物组织培养：植物组织培养（plant tissue culture）是指无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术与方法，通常又称为植物离体培养5、植物细胞全能性：每一个植物细胞带有该植物的全部遗传信息，在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型的细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株。

6、污染：污染是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的侵染，在培养容器中滋生大量菌斑，使培养材料不能正常生长和发育的现象。

7、植物无糖组培快繁技术：又称为光自养微繁殖技术，是指在植物组织培养中改变碳源的种类，以CO2代替糖作为植物体的碳源，通过输入CO2气体作为碳源，并控制影响试管苗生长发育的环境因子，促进植株光合作用，使试管苗由兼养型转变为自养型，进而生产优质种苗的一种新的植物微繁殖技术。

8、原球茎：原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学构造。

种子萌发初期不出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂、肿胀的胚呈小圆锥状，称为原球茎9、植物工厂：是植物栽培的最高境界，是植物生长发育的最佳环境，它集成了全自动全智能的环境模拟技术为植物的生长与发育创造出最佳的人工环境，是完全可控可调的按照人的意志进行管理的栽培系统10、愈伤组织：是指在培养或自然条件下，植物细胞脱分化，不断增殖所产生的主要由薄壁细胞构成的不定形的组织。

11、组织培养实验室必要的设备：1、基本设备：电炉、冰箱、酸度计、天平、纯水器、搅拌器2、灭菌设备：蒸汽灭菌压力锅、过滤灭菌装置、紫外线灭菌灯3、无菌操作设备：超净工作台、无菌接种箱4、培养设备：恒温振荡培养箱、光照培养箱、摇床5、细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜12、外植体选择原则：1、再生能力强；2、遗传稳定性好；3、外植体来源丰富；4、外植体灭菌容易13、培养基成分：①水分；②无机盐类；③有机营养成分；④植物生长调节物质；⑤天热物质；⑥pH；⑦凝固剂等14、温度是影响外植体生长和分化的重要条件，大多数情况下，由于一个培养室内培养着许多种植物，培养室内的温度一般被设定：25℃±2℃15、活性炭作用：吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质抑制外植体褐变防止玻璃苗的产生促进培养物生长和分化促进生根16、植物快繁技术过程中，根据器官形成方式的不同，植物器官的再生种类根据器官形成方式的不同，将植物器官的再生分为五种类型，即短枝发生型、丛生芽发生型、不定芽发生型、胚状体发生型和原球茎发生型。

17、糖的作用生命活动中必不可少的碳源和能源调节培养基渗透压18、在固体培养时使用最方便、最好的凝固剂：琼脂19、试管苗的年生长量（Y）决定因素：Y=mX nm-无菌母株苗数；X-每隔培养周期增殖的倍数；n-全年可增殖的周期数20、培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径：茎尖培养脱毒21、生长素／细胞分裂素比值的高低决定着外植体的发育方向比值低时促进根的生长，这时脱分化占主导地位；比值高促进芽的生长，这时分化占主导地位。

22、生物学脱毒生产无毒植株的方法1.茎尖组织培养脱毒法2.愈伤组织培养脱毒法3.微体嫁接离体培养脱毒法4.珠心组织培养脱毒法23、培养基灭菌（p20）1、高压蒸汽灭菌法2、过滤除菌法24、植物细胞全能性提出、发展与完善的1902年，haberlandt提出了植物细胞的全能性，即植物的体细胞在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖，发育成完整植株的能力。

20世纪70年代，细胞全能型的概念被解释为：每一个细胞具有该植物的全部遗传信息，具有发育成完整植株的能力。

80年代，此概念又进一步被解释为：每一个植物细胞带有该植物的全部遗传信息，在适当的条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型的细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株。

25、常用的脱病毒植株检测方法和特点（－）直接测定法（二）指示植物法（三）血清鉴定方法（四）核酸分祈法（五）电镜鉴定法26、通过组织培养获得微型薯的技术关键步骤27、使用高压灭菌锅时注意事项：1、使用高压锅前应添加足够的水2、锅内气压太高会引起部分有机物质的分解3、灭菌后在气压表归零之前不要打开锅盖，以免发生危险和培养基外溅现象4、橡胶等有机物品会因高温高压而变性；5、高压灭菌锅内有一个自动排气的小孔，不要使其堵塞，否则会因气压升高而引起危险28、在组培苗工厂化生产中，生产成本及降低商业化生产成本生产成本：①人工费用。

②生产物资费用。

③设备折旧费用。

④水电费用。

⑤其他费用。

降低措施：针对试管苗生产所需的费用，应采取相应措施降低生产成本，增强产品竞争力，提高试管苗经济效益。

1.提高劳动生产率2.减少设备投资，延长使用寿命3.降低消耗4.降低污染，提高繁殖率和成活率5.简化培养基29、植物快繁的程序植物快繁的程序包括四个阶段：1、无菌（或初代）培养的建立；2、繁殖体增殖；3、芽苗生根；4、小植株的移栽驯化30、康乃馨试管苗开花条件培养基：1/2MS大量和微量元素十NAA0.2 mg/L十活性炭0.5 %＋蔗糖3 %十琼脂0.7 %培养条件：温度22 ~ 28 ℃、每天光照约10 h、光照强度约1 000 lx的人工气候箱中培养。

2个月后可分化出相当数量的花芽，分化率约56 %。

3~4个月后白色花开放。

31、组织培养用的培养基配制1、培养基母液的配制为了减少工作量，减小误差，最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液。

（1）配置原则：相同类型的试剂混合；易形成沉淀的药品分开；母液浓度要适宜；用量要认真计算和核对；药品要准确称量2.MS培养基母液的配制MS培养基母液根据试剂特性通常配成五种母液，即大量元素母液（10或20倍）、微量元素母液（100或1000倍）、Fe盐（100倍）、Ca盐（50倍）、有机物（100倍）。

3.激素母液的配制生长素类、赤霉素类及脱落酸等用95％乙醇溶解；细胞分裂素类用1N HCl或1N NaOH溶解。

常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细胞分裂素母液浓度为0.2~1.0 mg/ml.培养基的配制的具体步骤：1、取出母液并按顺序放好。

将洁净的各种玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液枪和玻璃棒等放在指定位置；2、取一只容量瓶，放入配制培养基总量的1/3左右纯水，将母液按顺序加入，不断搅拌；3、加入植物生长调节剂后定容；4、将定容的培养基倒入容器中，加入蔗糖和琼脂，并加热使其完全溶解；5、调整pH；6、将培养基分装倒培养器皿中，封好瓶口；7、灭菌，用高压锅灭菌（121℃，15～20min）或过滤除菌；8、灭菌后待高压锅温度下降到50℃以下时，便可以取出、冷却凝固后待用。

32、试管苗的生态环境（要自己拓展）高温且恒温高湿弱光无菌33、草莓组培脱毒的方法与病毒检测手段脱毒的方法主要有：1.茎尖培养法剪取5cm左右的顶梢→ 剪去叶片→ 自来水冲洗→ 70％酒精浸3～5s → 0.1％升汞消毒2～10min → 无菌水冲洗3～5次→ 剥离茎尖外面的幼叶和鳞片→切取茎尖分生组织→接种于诱导培养基MS+BA0.5+GA3 0.1+IBA0.2 →分化培养基MS+BA0.5～1.0→ 20d分化丛生芽→生根培养基1/2MS+IBA0.2～1.0→生根→炼苗→移栽2.茎尖培养和热处理相结合（1）40℃处理16h，35℃处理8h；时间4～5周（2）38℃恒温，湿度60～70％，处理12～50d（3）35℃ 7d，38℃，湿度40～68％，光照强度4000～5000Lx，35d3.花药培养法。

取单核期的花蕾→低温（4～5℃）处理24h→70％酒精浸3～5s → 0.1％升汞消毒10～15min → 无菌水冲洗3～5次→ 剥离花冠，取下花药→接种→诱导愈伤组织培养基MS+BA1.0+NAA0.2+IBA0.2→20d愈伤组织→培养基MS+BA1.0+IBA0.05→50～60d植株脱毒苗的检测1. 指示植物小叶嫁接鉴定法2. 电子显微镜鉴定法34、培养基的基本类型及其特点：培养基形态不同：固体培养基、液体培养基培养过程不同：初代培养基、继代培养基其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基营养水平不同：基本培养基、完全培养基成分和浓度不同：含盐量较高的培养基、硝酸钾含量较高的培养基、中等无机盐含量的培养基、低无机盐含量的培养基1、MS培养基：无机盐浓度高；高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐；含有一定数量的铵盐；营养丰富；不需要添加更多的有机附加物；2、White培养基：1943年由White为培养番茄根尖而设计；1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素；无机盐浓度较低；使用广泛；在生根培养、胚胎培养中有良好的效果；3、B5培养基：1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计；含有较低的铵盐；较高的硝酸盐和盐酸硫胺素；4、N6培养基：1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计；KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含钼；35、一般组织培养的操作程序36、胡萝卜体胚发生体系的建立程序及影响体胚发生的影响因素。

（1）愈伤组织的诱导和保存外植体：无菌苗的下胚轴（长0.5 cm）、消毒叶柄（长0.5 ~ 1.0 cm）、贮藏根（横切面0.5 cm2）。

诱导培养基：MS＋2,4-D 0.1 ~ 1.0 mg/L，蔗糖30 g/L，琼脂8 g/L。

培养条件：26 ℃、黑暗条件下培养4 ~ 8周，即可获得愈伤组织。

继代培养：相同成分的悬浮培养基上或固体培养基上。

2）体细胞胚的诱导继代4次以上的愈伤组织，用不锈钢的32 μm、63 μm和125 μm的过滤筛过滤。

将保留在32 μm的细胞团在1 000 r/min下离心5次后，沉淀物用于体细胞胚诱导。

诱导培养基：MS, 加入5 mmol/L的Ca2+有利于胚胎发生。

每10 ~ 18 d将上述悬浮培养物移入1/2MS固体培养基上使体细胞胚成苗3）体细胞胚发生的主要阶段体细胞胚胎发生至少经历两个阶段，即需要生长素阶段和不需要生长素阶段形成胚性细胞团（0期）生长素→细胞缓慢增殖（1期）无激素→形成球形胚（2期）→经历心形胚、鱼雷形胚→再生植株（3期）37、影响体胚发生的主要因素（一）外植体基因型往往是体细胞胚胎发生的决定因素。