丙二醛含量测定方法
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植物组织或器官中 丙二醛含量的测定
一、实验目的
1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及 方法。
2.了解丙二醛积累对细胞的伤害
二、实验原理：
逆境
O HN 2 S N H O O H O H 100 C
O
膜脂的过氧化作用
O
丙二醛
OH N S
+
HN HS O N H
酸性
N H
HO
硫代巴比妥酸 TBA
丙二醛
五、结果计算
以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计 算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μ mol/L)=6.45OD532-0.56OD450
D450、D532分别代表450nm、532nm波长下的光密度 值。
六、注意事项：
1.
2.Leabharlann Baidu
3. 4.
5.
0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于 此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴1015min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸 收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植 物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol· -1） L 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最 大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆 境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干 扰。
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川） 棕红色(最大吸收峰 在532nm)
三、实验材料：
受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰 老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：
实验仪器：
紫外可见分光光度计
离心机
四、实验步骤：
1 MDA的提取 称2g叶片，加入10％三氯乙酸 (TCA)2ml及少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA 充分研磨，接着把匀浆液以4000r／min离心10min， 其上清液即为MDA提取液。 2 MDA显色反应及测定 取2ml MDA提取液（对照 组取2ml 蒸馏水），在加2ml 0.6％TBA混匀，在试 管上加棉塞，置沸水中加热15min，迅速拿出水浴锅 冷却，以4000r／min离心15min ，于波长532nm和 450nm下测定OD值。
一、实验目的
1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及 方法。
2.了解丙二醛积累对细胞的伤害
二、实验原理：
逆境
O HN 2 S N H O O H O H 100 C
O
膜脂的过氧化作用
O
丙二醛
OH N S
+
HN HS O N H
酸性
N H
HO
硫代巴比妥酸 TBA
丙二醛
五、结果计算
以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计 算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μ mol/L)=6.45OD532-0.56OD450
D450、D532分别代表450nm、532nm波长下的光密度 值。
六、注意事项：
1.
2.Leabharlann Baidu
3. 4.
5.
0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于 此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴1015min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸 收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植 物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol· -1） L 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最 大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆 境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干 扰。
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川） 棕红色(最大吸收峰 在532nm)
三、实验材料：
受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰 老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：
实验仪器：
紫外可见分光光度计
离心机
四、实验步骤：
1 MDA的提取 称2g叶片，加入10％三氯乙酸 (TCA)2ml及少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA 充分研磨，接着把匀浆液以4000r／min离心10min， 其上清液即为MDA提取液。 2 MDA显色反应及测定 取2ml MDA提取液（对照 组取2ml 蒸馏水），在加2ml 0.6％TBA混匀，在试 管上加棉塞，置沸水中加热15min，迅速拿出水浴锅 冷却，以4000r／min离心15min ，于波长532nm和 450nm下测定OD值。