益赛普对神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏的影响

第21卷第4期河南医学研究

Vol．21No．4

2012年

12月

HENAN

MEDICAL

RESEARCH

December 2012

收稿日期：2012-11-20；修订日期：2012-12-09作者简介：马婕妤（1983－），女，河南新乡人，硕士，医师，主要从事临床麻醉工作。

文章编号：1004-

437X （2012）04-0392-04·基础研究·

益赛普对神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏的影响

马婕妤1，陈彦青2，李保林

1

（1．郑州市中心医院麻醉科河南郑州450007；2．福建医科大学省立医学院麻醉科福建福州

350001）

摘要：目的:观察重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（益赛普）对神经病理性疼痛（CCI ）大鼠痛觉过敏的影响。方法:选择成年雄性SD 大鼠32只，

随机分为假手术组、慢性坐骨神经损伤（CCI ）组、0．4mg /kg 益赛普组和0．8mg /kg 益赛普组，CCI 组和益赛普组按Bennett 法建立CCI 模型，益赛普组于术后即刻开始至取材点每天给予皮下注射益赛普0．4mg /kg 或0．8mg /kg ，假手术组和CCI 组皮下注射生理盐水，容积与益赛普组相同，分别测定术前1d 、术后1d 、术后3d 、术后7d 大鼠的机械性痛觉阈值（MWT ）、热痛觉阈值（TWL ）和运动功能评分。结果:与假手术组相比，

CCI 组术后1d 、3d 、7d 机械痛和热痛阈值都有明显下降（P ＜0．05），益赛普组在术后各时间点机械痛和热痛阈值较CCI 组都有明显的升高（P ＜0．05），且高剂量组较低剂量组升高更明显（P ＜0．05）。结论:益赛普能够抑制CCI 引起的痛觉过敏反应，且高剂量比低剂量更有效。

关键词：益赛普；神经病理性疼痛；大鼠中图分类号：R-332文献标识码：B

doi ：10．3969/j．issn．1004-437X2012．04．003

The effect of etanercept on hyperalgesia in neuropathic pain rats

MA Jie-yu 1，CHEN Yan-qing 2，LI Bao-lin 1

（1．Anaesthesia Staff Room of Zhengzhou Central Hospital ，Zhengzhou 450007，China ；2．Anaesthesia Staff Room of Fujian Provin-cial Hospital ，Fuzhou 350001，China ）

Abstract ：Objective ：To investigate the effect of recombinant human tumor necrosis factor receptor type Ⅱ-antibody fusion protein （etanercept ）on hyperalgesia in neuropathic pain （CCI ）rats．

Methods ：Thirty-two adult male SD rats were selected and randomly divided into four groups ，which included sham-operation group ，chronic constriction injury （CCI ）group ，0．4mg /kg etan-ercept group and 0．8mg /kg etanercept group．CCI group and etanercept groups were establish CCI model according to the method of Bennett．Etanercept groups given daily subcutaneous injec-tion of 0．4mg /kg or 0．8mg /kg etanercept from the immediate postoperative to sampling point ，and sham-operation group and CCI group given subcutaneous injection of saline at same volume．Measure the mechanical withdrawal threshold （MWT ），the thermal withdrawal latency （TWL ）and the motor function score in preoperative 1d ，postoperative 1d ，postoperative 3d ，postoperative 7d respectively．Results ：Compared with sham-operation group ，the postoperative 1d ，postoperative 3d ，postoperative 7d of MWT and TWL in CCI group have significantly decreased （P ＜0．05）．Compared with CCI group ，at each time point after operation ，the MWT and TWL of etanercept group have significantly elevated （P ＜0．05），and the high-dose group increased more significantly

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第4期马婕妤等：益赛普对神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏的影响

than the low-dose group（P＜0．05）．Conclusion：Etanercept can inhibit hyperalgesia response induced by CCI，and high-dose more effectively than low-dose．

Keywords：etanercept；neuropathic pain；rat

神经病理性疼痛是一种由于外周或中枢神经系统损伤或疾病引起的慢性疼痛症状，其发生与背根神经节（DRG）感觉传入纤维的损伤和破坏相关，临床症状包括异常性疼痛，痛觉过敏和自发性疼痛。促炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在神经病理性疼痛的发生和维持中起着非常重要的作用。益赛普是由我国生产的首个抗体类药物，可以明显的抑制TNF-α的产生，因此本实验通过皮下给予益赛普，观察其对慢性坐骨神经结扎损伤（chronic constriction injury CCI）大鼠痛觉过敏的影响。

1材料和方法

1．1动物选择与分组清洁级成年雄性SD大鼠32只，体重（220ʃ25）g，饲养1周适应环境后随机分为假手术组、CCI组、CCI+0．4mg/kg益赛普（上海中信国健药业有限公司）组和CCI+0．8mg/kg益赛普组。CCI组和益赛普组按Bennett法［1］建立CCI模型，假手术组仅暴露坐骨神经并游离周围组织，但不行坐骨神经结扎。益赛普组于手术后即刻开始到取材点每天皮下注射0．4mg/kg或0．8mg/kg益赛普，假手术组和CCI组注射相同容积的生理盐水。各组于手术前1d、手术后1d、3d、7d进行行为学测定，并于第7d处死大鼠。

1．2CCI模型的制备［1］大鼠给予40mg/kg10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，选择左侧后肢，依次完成备皮、消毒、切开皮肤、分离皮下组织及肌肉、暴露坐骨神经等步骤，以4．0号无菌丝线相隔1mm对坐骨神经行松结扎4道，至坐骨神经神经外膜稍受压即可，每道丝线打结时均可见大鼠左下肢轻微抽动，然后对切口进行逐层缝合。

1．3痛觉过敏测定机械性缩足反射阈值（mechani-cal withdrawal threshold，MWT），采用电子von Frey纤维测痛仪（Model2390Series，IITC Life Science Inc，意大利）按照Chaplan等［2］的方法测定：将术后大鼠放置于升高约0．5m的金属网上，盖上有机玻璃透明罩，待大鼠适应10min熟悉环境后，用尖端约0．7mm2的Von Frey纤维探刺针垂直刺激大鼠后肢足底中部，逐渐用力加压，使之稍弯曲，大鼠出现舔足或抬足行为时，测痛仪上所显示的最大数值作为机械性缩足反射阈值（单位g）（MWT），每只大鼠重复测定5次，每次测定间隔时间为30s，取中间3个数值求平均值。

热缩足反射潜伏期（thermal withdrawal latency，TWL）按照Hargreaves等［3］的方法测定：将装有大鼠的有机透明玻璃箱放置于厚度约为6mm的玻璃板上，待大鼠适应10min熟悉环境后，采用PL-200热刺痛仪（成都泰盟科技有限公司）产生热量致痛，将可移动光束对准大鼠损伤侧足趾底中部进行照射，从照射开始至大鼠出现抬腿的时间为热缩足反射潜伏期（单位s）（TWL），为防止热辐射损伤，设定光束自动切断时间为20s。每只大鼠重复测定5次，每次测定间隔时间为5min，取中间3个数值平均值。

运动功能评分按照Hwang等［4］的方法进行测定：0分：可以正常行走，没有运动功能改变；1分：可以正常行走，有轻度运动功能减弱，对足底的刺激缩爪反应正常；2分：可以正常行走，中度运动功能减弱，自主活动减弱，对足底的刺激仍有缩爪反应，但减弱；3分：不能正常行走，不能自主活动，有拖爪现象，对足底的刺激没反应。2分以上评定为存在运动功能障碍。以上痛觉过敏测定均由另一名实验者执行。

1．4统计学处理采用SPSS13．0软件进行统计学数据分析，计数资料采用四分位数间距表示，计量资料采用均数ʃ标准差（x－ʃs）表示，两两比较采用Dunnett t 检验，组间比较采用单因素方差分析，运动功能采用Kruskal-Wallis H检验，检验水准α=0．05。

2结果

行坐骨神经结扎组大鼠术后术侧后爪均出现轻度内收、跛行等，3组手术组各时间点的MWT和TWL较术前1d均明显降低（P＜0．05），运动功能评分均明显升高（P＜0．05）。与假手术组相比，CCI组、CCI+益赛普组的MWT和TWL在术后1d、3d、7d均明显降低（P＜0．05），运动功能评分明显升高（P＜0．05）；与CCI组相比，CCI+益赛普组的MWT和TWL在术后1d、3d、7d均明显升高（P＜0．05），运动功能评分

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