黄曲霉毒素标准检测规程.
黄曲霉素检测法
食品中黄曲霉毒素的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。
本标准适用于玉米、花生及其制品（花生酱、花生仁、花生米）、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。
样品中黄曲霉毒素的检出限：免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法为1mg/kg；免疫亲和层析净化—荧光光度法测定酱油样品中黄曲霉毒素检出限为2.5mg/kg。
2 免疫亲和层析净化高效液相色谱法2.1 方法提要试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。
用水或吐温/PBS将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。
2.2 试剂和溶液除非另有规定，仅使用分析纯试剂、重蒸馏水。
2.2.1甲醇（CH3OH）：色谱纯2.2.2甲醇-水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水2.2.3 甲醇-水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水2.2.4甲醇-水（45+55）：取45mL甲醇加55mL水2.2.5 苯：色谱纯2.2.6乙腈：色谱纯2.2.7苯-乙腈（98+2）：取2mL乙腈加98mL苯2.2.8氯化钠（NaCl）2.2.9磷酸氢二钠（Na2HPO4）2.2.10磷酸二氢钾（KH2PO4）GB/T 18979-20032.2.11氯化钾（KCl）2.2.12 PBS缓冲溶液：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL。
2.2.13 吐温-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐温-20，加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL。
中药材中黄曲霉毒素的检测
黄曲霉毒素 B1 标准品
黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 混标 （GB/T 5009.23-2006） 标准品 Athena C18-WP 液相色谱柱 优级纯氯化钠，ACS-ISO，≥ 99.5% SPE 小柱连接件【1，3，6mL】，PP 材质 CNW 12 位固相萃取真空装置 亲水 PTFE 针式滤器 2ml 无针注射器 3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未灭菌
3mL，20 支 / 盒 (4℃ -8℃保存 ) 1mL，25 支 / 盒 (4℃ -8℃保存 ) 3mL，20 支 / 盒 (4℃ -8℃保存 )
3 mg/L 乙腈，1mL 于 Certan Vial
不同浓度于乙腈，1 ml 于 Certan Vial 4.6*150mm，5um 500g 12 个 / 包 12 位 13mm*0.22um，金色，100 只 / 罐 100 只 / 包 500/ 箱 2ml，12*32mm，9mm，100 只 / 盒
安谱实验推出 Beacon 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱用于中药材（僵蚕，酸枣仁，陈皮，桃仁）中的黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2 的检测 , 方法简单易行 , 回收率高。
一 . 前处理方法
1. 称取供试品粉末约 5g( 过二号筛 ) 于 50ml 离心管中，加入氯化钠 1g； 2. 加入 70％甲醇溶液 25ml，高速混匀震荡 5 分钟，离心 5 分钟 ( 离心速度 4000 转／分钟 )； 3. 量取上清液 15ml，置 50ml 容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀； 4. 用玻璃纤维滤纸滤过； 5. 量取滤液 20.0ml，通过免疫亲合柱，用去离子水 20ml 淋洗，淋洗液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用 1.5ml 甲醇洗脱，收 集洗脱液，待测。 6. 取洗脱液 500ul，加入 500ul 去离子水，混匀后待测。
黄曲霉毒素B1快速检测
黄曲霉毒素B1快速检测产品说明黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是目前已知的化学物质中致癌性最强的一种。
黄曲霉毒素B1对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。
本品采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，通过单克隆抗体竞争结合AFB1-BSA偶联物和样品中可能含有的AFB1的原理。
试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的AFB1-BSA偶联物和被胶体金标记的抗AFB1单克隆抗体。
一、使用方法1. 样品处理谷物：任取5g以上有代表性样品并粉碎过20目筛，准确称取2.0g均匀粉碎试样于配套离心管中，再准确加入2mL蒸馏水或纯净水和8.0mL 的乙酸乙酯，将瓶塞盖紧密封，充分振荡5min，4000rpm离心1min得上清液，将上清液用吸管吸出2.0mL到蒸发皿或小玻璃杯中，用电吹风吹干，再根据稀释液用量表准确加入稀释液2，用铝箔袋内配套吸管反复冲洗，彻底溶解杯底所有的固体，此溶解液即为待测液。
酱油、醋：准确量取2.0mL样品于15mL离心管中，准确加入4.0mL乙酸乙脂，塞紧管塞后充分震荡5min，静置1～2min，待溶液分层以后将上清液用移液枪（或移液管，吸管）全部转移到另一只15mL离心管中，加入2.0mL 稀释液1，充分震荡3min，待溶液分层以后准确吸出2.0mL上清液到蒸发皿或小玻璃杯中，用电吹风吹干上清液，待容器冷却后，再根据稀释液用量表准确加入稀释液2，用铝箔袋内配套吸管反复冲洗，彻底溶解杯底所有的固体，此溶解液即为待测液。
发酵酒：准确量取2.0mL样品于15mL离心管中，准确加入4.0mL 乙酸乙脂，塞紧管塞后充分震荡5min，静置1～2min，待溶液分层以后准确吸出2.0mL上清液到蒸发皿或小玻璃杯中，用电吹风吹干上清液，待容器冷却后，再根据稀释液用量表准确加入稀释液2，用铝箔袋内配套吸管反复冲洗，彻底溶解杯底所有的固体，此溶解液即为待测液。
黄曲霉毒素检验方法
一、目的规范实验室检验方法。
二、内容（一）试验准备1、标定荧光计。
（1）、将仪器后的电源开关打开。
（2）、按SELECTTEST键，直至显示出AflaTest，按ENTER。
（3）、荧光计显示：START CALBRATION…OPEN THE LIDINSERT RED VIAL打开仪器盖，将红色的真菌毒素标定管放入。
一定要确认标定管是否已放到了仪器的底部。
（4）、仪器显示：HIGHCAL 22PPB如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值，请按ENTER键。
否则，从键盘上所规定的设定值，确认准确无误后，按ENTER键。
（5）、仪器显示：READING HIGH CAL…SA VING HIGH INENSTTYOPEN THE LIDINSERT GREEN VIAL打开仪器盖取出红色的标定管，插入绿色的真菌毒素标定管。
一定要确认标定管是否已充分插入仪器的底部。
（6）、仪器显示：LOW CAL 1.0PPB如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值,请按ENTER键.否则,从键盘上所规定的设定值,确认准确无误后,按ENTER键。
（7）、仪器显示：READING LIW CAL…SA VING HIGH INTENSITJY 接着显示：OPEN THE LIDINSERT GREEN VIAL打开仪器盖取出绿色的标定管。
（8）、仪器显示：VICAM V1.3 READY按SELECT TEST键,仪器显示: AFLATEST, 按ENTER键。
（9）、仪器显示：START RUN TEST OPEN THE LID （10）、插入黄色的真菌毒素标定管，其读数应该在分析方法的测定范围内。
（11）、荧光屏计标定工作完毕，可经进行样品分析了。
荧光计每周需要标定一次。
如果需要重新标定，请按STOP键，再按OPIONS 键，直至仪器显示：CALIBRATE TEST然后按ENTER键，仪器显示：AFLATEST如果不是这样，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST，按ENTER键。
实验十一 食品中黄曲霉毒素B1的检测
2. 玉米（脂肪含量3.0～5.0％）： 样品粉碎后过20目筛，称取20.0g，加入250mL具塞锥形瓶中。准 确加入50.0mL甲醇一水（80+20）溶液和15.0mL石油醚，盖塞后 滴水封严，150rpm振荡30min。用快速定性滤纸过滤于125mL分 液漏斗中,待分层后，放出下层甲醇水溶液于50mL烧杯内，从中取 10.0mL （相当于4.0g样品）于75mL蒸发皿中,以下按上述“65℃ 水浴通风挥干”起，依法操作。 3．花生（脂肪含量15.0－45.0％）： 样品去壳去皮粉碎后称取20.0g，加入250mL具塞三角瓶中，准确 加人100.0mL甲醇水(55 ＋45）溶液和30mL石油醚,盖塞后滴水封 严，150rpm振荡30min，静置15min后用快速定性滤纸过滤于 125mL分液漏斗中，待分层后，放出下层甲醇水溶液于100mL烧 杯内，从中取20.0 mL（相当于4.0g样品）置于另一125mL分液漏 斗中，加入20.0mL三氯甲烷，振摇2min，静置分层（如有乳化现 象可滴加甲醇促使分层）．放出三氯甲烷于75mL蒸发皿中，再加 5.0mL三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取后，放出三氯甲烷层一 并于蒸发皿中，以下按上述“65℃水浴通风挥干”起，依法操作。
实验二十、食品中黄曲霉毒素B1的检测
标准依据: GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测 定
一、实验目的与要求：
1、学习酶联免疫(ELISA)方法测定粮食及食品中黄曲 霉毒素B1的实验原理，掌握实验的操作要点及测定方 法 2、了解酶联免疫(ELISA)的工作原理，正确熟练使用 酶标仪。
六、使用进口试剂盒检测的主要实验步骤
1、样品提取：取5.0g样品与锥形瓶中，加入70％甲醇 25ml，振摇3min，过滤于分液漏斗中，静置分层，放 出下层的甲醇水提取液，即为样品提取液。（亦可根 据样品中黄曲霉毒素含量进行适当稀释为待测样液） 2、免疫反应：红色微孔中加入蓝色试剂100μl，分别加 入标准品和样品各100μl，三次混匀，移100μl到白色 抗体孔，摇匀，室温反应10min，弃去液体，用去离 子水洗5次，用吸水纸扣干。 3、显色反应：加入绿色试剂100μl，摇匀，室温反应 10min，加入红色试剂100μl，终止反应。 4、结果检测：在450nm处用酶标仪检测。
黄曲霉毒素AFB1检测操作规程
黄曲霉毒素AFB1检测操作规程1 原理AgraQuant® 黄曲霉毒素检测试剂盒应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理，用70%甲醇从研磨样品中提取黄曲霉毒素。
样品提取液或黄曲霉毒素标准品与酶-黄曲霉毒素偶合物混匀后加入到抗体包被的微孔中，样品中的黄曲霉毒素或黄曲霉毒素标准品与酶-黄曲霉毒素偶合物中的黄曲霉毒素竞争结合微孔中的特异抗体。
经过洗板去除未参加抗原-抗体反应的的黄曲霉毒素，当酶的底物被加入到微孔中，颜色变为蓝色，且颜色深浅与样品中或标准品中黄曲霉毒素含量成反比。
加入反应终止液终止反应后，反应液颜色应由蓝色转为黄色。
在450nm(OD450)滤镜及630nm示差滤镜下使用酶标仪对微孔板进行吸光度值测量。
利用标准品的吸光度值对标准品浓度制作标准曲线，将样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较以进行结果的判读。
2 试剂与仪器2.1 单道移液枪（量程：0~200μL、0~1000μL）2.2 八道移液枪（量程：0~300μL）2.3 定时器2.4 吸水纸2.5 试剂槽3个2.6 仪器：酶标仪3 操作步骤3.1样品的准备/萃取3.1.1获取具有代表性的样品，使用研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
3.1.2称取20g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
3.1.3加入100mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。
注意：样品与萃取溶液比例应为1:5（w:v）。
3.1.4摇床上振荡混合10分钟。
3.1.5静置样品，用双层滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液（滤液必须澄清）。
3.1.6用提供的分析缓冲液对滤液进行1:2稀释。
例如：将100µL待检滤液加入100µL分析缓冲液中，混匀准备进行随后实验。
3.2 检测步骤3.2.1将绿色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。
黄曲霉毒素检测标准方法汇总
流动相的梯度变化表（GBT 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定）
标准方法检出限（GBT 23212-2008）
次氯酸钠溶液（消毒用）：
取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀。
另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌、澄清后过滤。
此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。
若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。
所得溶液的浓度约为50g/L。
污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）
AFT B1标准溶液配制
1 仪器校正，测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素f
2 标准溶液配制，配制AFT B1标准溶液，用紫外分光光度计测此溶液最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值，计算AFT B1标准液浓度，后用苯-乙腈混合液调到标准液为10.0ug/ml，并用分光光度计核对浓度。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）。
黄曲霉素的检测
黄曲霉素的检测黄曲霉素的检测000部分国家检验检疫要求● 1995年,世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15ug/kg.●我国政府对各种食物中黄曲霉毒素的最高允许量见表2.表2 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量食物名称最高允许含量/(ug/kg)玉米,花生,花生油,坚果和干果(核桃,杏仁)玉米,花生仁制品(按原料折算)大米,其他食用油(香油,菜籽油,大豆油,葵花油,胡麻油,茶油,麻油,玉米胚芽油,米糠油,棉籽油)其他粮食(麦类,面粉,薯干),发酵食品(酱油,食用醋,豆豉,腐乳制品),淀粉类制品(糕点,饼干,面包,裱花蛋糕)牛乳及其制品(消毒牛奶,新鲜生牛乳,全脂牛奶粉,淡炼乳,甜炼乳,奶油),黄油,新鲜猪组织(肝,肾,血,瘦肉)20(黄曲霉毒素b1)20(黄曲霉毒素b1)10(黄曲霉毒素b1)5黄曲霉毒素b1)0.5(黄曲霉毒素m1)●美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量(指b1+b2+g1+g2的总量)不能超过15ug/kg.人类消费的牛奶中的含量不能超过0.5ug/kg,其他动物饲料中的含量不能300ug/kg.●而欧盟国家规定更加严格,要求人类生活消费品中的黄曲霉毒素b1的含量不能超过0.05ug/kg.检验检疫方法薄层层析法薄层层析(thin-layer chromatography,tlc)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年,它被列为aoac (association of official agricultural chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能.液相色谱法液相色谱(liquid chromatography,lc)与薄层层析在许多方面具有相似性,二者互相补充.通常用tlc进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后,再用lc进行黄曲霉毒素的定量测定.免疫化学分析方法利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法,也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法(radioimmunoassay,ria),酶联免疫法(enzyme-linked of immunosorbent assay,elisa)和免疫层析法(immunoaflinity columnassay,ica).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定.(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-hplc法免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果,但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素b1)含量,而且易出现假阳性结果,难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和hplc法)却能达到既定量准确又快速简便的要求.免疫亲和柱的使用可以避免传统tlc和hplc的缺点,同时免疫亲和柱与tlc和hplc法结合可以大大提高工作效率,提高灵敏度和准确度.黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的快速分析方法.它克服了tlc和hplc法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂,毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带,自动化程度高 ,操作简单,直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 (b1b2g1g2) 的测定,检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg.黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的hplc法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高.分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量.也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入hplc中,对黄曲霉毒素b1,b2,g1,b2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg.(2) 酶联免疫吸附法:1996年,nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便,敏感,特异,可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期,该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素b1.原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.(3) 微柱筛选法可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2的总量.原理样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后,在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量.(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5-10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.检测方法分析薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法,由于其检测周期长,程序复杂,所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求.随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学,生物化学,分子生物学的不断发展,人们已创建了不少快速,简便,特异,敏感,低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法.而且以金标试纸为代表的这些方法已经被先进国家所广泛使用,引进和消化这些先进的方法是我们检测领域的当务之急.免疫亲和柱法优点很多,但由于检测费用过高,而无法普及.而一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法似乎更适用于我国,值得推广.。
桃仁中黄曲霉毒素总量的检测方法(文档)
黄曲霉毒素的测定方法本法用免疫亲和层析柱吸附并净化样品液中的黄曲霉毒素，采用高效液相色谱法测定药材中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量计算）。
方法如下：色谱条件：色谱柱：150*4.6 mm 5um检测器：荧光检测器，激发波长365nm,发射波长455nm.，光化学柱后衍生法流动相：甲醇：水（45：55）流速： 0.8ml/min进样量：20ul混合对照品溶液的配制:取黄曲霉毒素（B1、B2、G1、G2）=2: 0.5: 2: 0.5（μg/ml）混合标准品储备液，配制一系列标准工作液，黄曲霉毒素标准品工作液的浓度为黄曲霉毒素（B1：B2：G1：G2）=0.5: 0.5: 0.125: 0.125(ng/ml)、黄曲霉毒素（B1：B2：G1：G2）=1: 0.25: 1: 0. 25(ng/ml)、黄曲霉毒素（B1：B2：G1：G2）=5: 2.5: 5: 2.5(ng/ml)、黄曲霉毒素（B1：B2：G1：G2）=10: 2.5: 10: 2.5(ng/ml)、黄曲霉毒素（B1：B2：G1：G2）=20: 5: 20: 5(ng/ml)供试品溶液的制备：精密称取粉碎的样品20.0g,精密加入70%甲醇100ml，加入氯化钠4g,振荡1个小时或高速搅拌2分钟，过滤：精密量取滤液5ml,加入PBS缓冲液（8.0g氯化钠、0.2g氯化钾、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾溶解于约990ml水中，用浓盐酸调节PH至7.0，用水稀释至1L）45ml,用玻璃纤维滤纸过滤，滤液待测。
供试品溶液的净化：1.取出免疫亲和柱，恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上，连接储样管和收集管；2.上样：准确量取过玻璃纤维滤纸的滤液10ml过柱，去掉免疫亲和柱下方堵头，调节开关，流速为1ml/min左右；3.清洗：液体排净后，加入10mlPBS溶液，清洗柱子，流速为3ml/min；4.洗脱：用1.0ml甲醇洗脱，建议将甲醇的量分2次加入（比如0.5ml×2），每次加入后，要让甲醇充分浸泡柱子里的凝胶2分钟，收集全部甲醇洗脱液，过滤膜，待检。
饲料黄曲霉毒素标准
饲料黄曲霉毒素标准
1.范围
本标准规定了配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的限量标准。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料。
2.规范性引用文件
本标准引用了GB 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中关于黄曲霉毒素限量标准的内容。
3.术语和定义
3.1 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2：见GB 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》。
3.2 黄曲霉毒素 M1、M2：见GB 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》。
4.限量标准
4.1 黄曲霉毒素B1的限量不得超过：50μg/kg（配合饲料），浓缩饲料不得超过100μg/kg，添加剂预混合饲料不得超过100μg/kg。
4.2 黄曲霉毒素B2的限量不得超过：50μg/kg（配合饲料），浓缩饲料不得超过100μg/kg，添加剂预混合饲料不得超过100μg/kg。
4.3 黄曲霉毒素G1的限量不得超过：50μg/kg（配合饲料），浓缩饲料不得超过100μg/kg，添加剂预混合饲料不得超过100μg/kg。
4.4 黄曲霉毒素G2的限量不得超过：50μg/kg（配合饲料），浓缩饲料不得超过100μg/kg，添加剂预混合饲料不得超过100μg/kg。
4.5 黄曲霉毒素M1的限量不得超过：5μg/kg（配合饲料），浓缩饲料不得超过10μg/kg，添加剂预混合饲料不得超过10μg/kg。
本标准自发布之日起实施。
黄曲霉毒素标准检测规程.
AFB10.08 0.2 0.6 1.97
AFB20.04 0.12 0.2 0.63 4、职责
部门名称部门职责
质量管理部1、负责本制度的实施。
2、负责本制度的监督Leabharlann 行。5、程序5.1原理
测定的基础是抗原、抗体反应,抗体连接在柱体内,样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释,然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱,在免疫亲和柱内毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1,然后注入到分析仪器中用于检测。
----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.3适用于中药(2015版药典规定的19味中药等
----15g±0.01g样品(固体样品需粉碎,并过2mm分样筛加入75mL 80%乙腈-水溶液混匀;
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
变更类型:A –新起草M -修订
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
----取10mL滤液加入20mL蒸馏水稀释,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
----取15mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.2适用于辣椒、花椒、黄豆酱等调料,面粉、麦芯粉、芝麻油及其它植物油、谷草
5.2溶液配制
5.2.1 70%甲醇-水溶液:取700mL甲醇,加入300ml去离子水混匀即可。
5.2.2 80%乙腈-水溶液:取800m乙腈,加入200ml去离子混匀即可。
黄曲霉毒素限量标准
黄曲霉毒素限量标准黄曲霉毒素限量标准是指对于食品中的黄曲霉毒素的含量所规定的限制，是通过国家相关机构制定并实施的，旨在保障食品安全和保健原则，有效控制人们摄入黄曲霉毒素对身体健康所造成的影响。
随着人们对于食品安全的关注和食品生产技术的不断进步，对于黄曲霉毒素的监管和控制也变得越来越重要。
因为黄曲霉毒素这种毒素是由一些产生在食品中的真菌所产生的，并且具有较强的致癌性，可导致多种恶性疾病，严重威胁人类的健康。
为了解决这个问题，下面分步骤阐述黄曲霉毒素限量标准。
一、制定黄曲霉毒素限量标准的必要性。
随着人口的增加和食品对于人类社会的重要性，对于食品中毒素的监管和控制也变得愈加重要。
因为黄曲霉毒素是一种具有强烈毒性和致癌性的化学物质，对于人体的健康造成了巨大的威胁。
所以，制定黄曲霉毒素限量标准就显得非常的必要。
二、制定黄曲霉毒素限量标准的标准化流程。
在制定黄曲霉毒素限量标准时，需要遵循规范化的流程，保证限量标准的制定过程、方法和结果都是科学合理的。
下面是标准化的流程：1.建立标准制定小组，确定工作任务和目标；2.收集资料，整理归纳黄曲霉毒素的研究成果和相关文献；3.制定黄曲霉毒素限量标准的方法和步骤；4.截取食品样本，进行实验室检测；5.分析检测结果，确定黄曲霉毒素限量标准的数值；6.编制黄曲霉毒素限量标准的技术文件；7.公开征求意见，征求专家意见；8.维护黄曲霉毒素限量标准的质量体系。
三、黄曲霉毒素限量标准的应用和意义。
制定黄曲霉毒素限量标准，是为了规范食品产业中的黄曲霉毒素含量，保障广大消费者的健康安全。
而制定黄曲霉毒素限量标准的实践也具有重要的意义：1.对于食品生产企业提出严格的要求，从而规范生产过程，提高食品质量和安全性；2.对于监管部门提供科学的指导，支持政策制定，推进食品安全工作的进展；3.对于广大消费者保障了饮食安全，提高了消费者对于产品质量和安全的信心。
综述，黄曲霉毒素限量标准的制定和实施是为了保证食品安全和保障人类健康的重要举措。
黄曲霉毒素测定标准操作规程
1. 目的：建立黄曲霉毒素测定标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2.依据：2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。
3.范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定法(一部)测定的供试品。
4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5.内容：5.1. 本法系用高效液相色谱法（附录ⅥD）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。
5.1.1. 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；以荧光检测器检测，激发波长γex=360nm（或365nm），发射波长γem=450nm。
两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
5.1.2. 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。
精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
5.1.3. 供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲和柱（AflaT-est@P），流速每分钟3ml，用水20ml 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
黄曲霉毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法
黄曲霉毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法黄曲霉毒素（Aflatoxins，简写 AF）主要为黄曲霉和寄生曲霉的次生代谢产物。
在温暖与潮湿的气候地区粮食和饲料凡是被黄曲霉和寄生曲霉污染的都可能存在黄曲霉毒素。
黄曲霉毒素最易污染的有花生、玉米、棉籽、禽蛋、肉、奶及奶制品，其次是小麦、高粱和甘薯，大豆粕被黄曲霉毒素污染的程度轻些。
在我国，粮食和饲料被黄曲毒素污染的概率很高， 给饲料企业以及养殖业主带来了很大的损失，人们食用含有黄曲霉毒素的食物危害到人体健康。
一、黄曲霉毒素的理化特性目前已经确定的黄曲霉毒素的结构有AFB1、AFB2、AFM1等 18 种， 它们的基本结构中都含有二呋喃环和氧杂萘邻酮（又名香豆素）， 前者为其具有毒性的结构，后者可能与其的致癌性有关。
黄曲霉毒素很难溶解于水、己烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿以及二甲基甲酰胺（DMF）等有机溶剂中。
分子量为 312-346，熔点为 200-300℃，黄曲霉毒素耐高温，通常加热处理方式对其的破坏很小， 只有在熔点的温度下才能发生分解。
黄曲霉毒素遇碱情况下能迅速分解， 但此应可逆， 即在酸性的条件下又能复原。
一般来说，温度30℃、相对湿度80%、谷物水份在14%以上（花生的水份在9%以上）最适合黄曲霉繁殖和生长。
在 24-34℃之间， 黄曲霉菌产毒量最高。
几乎所有谷物、饲草和各种食品（包括畜产品）都可作为黄曲霉基质。
二、黄曲霉毒素对动物和人的危害2.1 黄曲霉毒素对动物的危害黄曲霉毒素的毒性非常高，是目前已发现霉菌中毒性最大的一种。
目前发现的18种黄曲霉菌毒素家族中， AFB1的毒性最为最为强烈，AFM1、AFG1 次之，AFB2、AFG2、AFM2 毒性较弱。
AFB1的毒性是砒霜的68倍，其诱发肝癌的能力甚至比二甲基亚硝胺大75倍之多。
其毒性的大小因动物的种类、年龄、性别、体况及营养状况的不同而有所差异，年幼动物、雄性动物较敏感。
薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定
实验三薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定(本法参照GB/T 5009·22-2003)一、原理样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。
二、试剂三氯甲烷（AR）正己烷（AR 沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）甲醇（AR）苯（AR）乙腈（AR）无水乙醚（AR）丙酮（AR）（以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰）苯-乙腈(98:2)混合溶液甲醇-水（55:45）混合溶液三氟乙酸（AR）氯化钠（AR）无水硫酸钠（AR）硅胶G （薄层色谱用）5%次氯酸钠溶液：称取100g漂白精，加入500mL水，搅匀。
另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。
黄曲霉毒素B1标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平精密称取1-1.2mgAFT B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。
使用前用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯-乙腈混合溶液调整其浓度为10ug/mL。
（在350nm测定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩尔消光系数为19800，可根据朗伯-比尔定律求出其浓度）。
黄曲霉毒素B标准应用液I（1ug/mL）：吸取1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素1标准贮备液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。
B1标准应用液II（0.2ug/mL）：吸取1.0mL 1ug/mL的黄曲霉毒黄曲霉毒素B1标准应用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。
素B1标准应用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL 0.2ug/mL的黄曲霉黄曲霉毒素B1标准应用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。
黄曲霉毒素B1检测的操作规程
1 适用范围本方法适用于测定全价饲料及脂肪含量小的固体原料（如玉米、玉米副产物等）。
2 操作方法1 样品处理：称取5.0g粉碎后的样品于具塞三角瓶中，准确加入25.0毫升甲醇水（1+1）溶液，（现配现用）。
振摇15分钟过滤，收集试样滤液，此液为样品提取液。
根据样品的国家标准允许量标准，用A试剂（样品稀释液）将样品提取液进行适当稀释，玉米一般将提取液稀释10倍（取滤液50uL+450uLA试剂），全价料滤液一般稀释4倍（取滤液50uL+150uLA试剂）稀释后放在混匀器上混匀，即为待测样液。
2、试剂的配制：每瓶C试剂准确加入1.5毫升D试剂（用移液枪移两个750uL）。
配成实验用酶标抗原溶液；取一瓶E试剂（浓缩洗涤液）加入300毫升蒸馏水中，配成洗涤液待用，均在2—8℃保存。
3、试剂平衡：将测试盒于室温中放置15分钟以上，平衡至室温。
4、小孔编号：根据实验需要截取相当孔数放置反应板框架上，设定一号孔为仪器调零孔（空白孔），2号孔为阴性对照孔，3号孔为阳性对照孔，其余孔为样品孔。
5、洗板（激活抗原）：每孔加入250uL洗涤液，洗涤液不得溢出，放置1分钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干（注意：不能在同一张纸上重复多次拍打），重复洗板一次，放置、甩掉、拍干。
6、加样：第1步：第一个孔加50uLA稀释剂，第二个加50uLB试剂（0.1AFB1标准溶液），第三个孔加50 uLB试剂（1 AFB1标准溶液），其余孔加入相应待测样液。
第2步：1号孔加入50uLD试剂，从第2个孔开始加50uLC试剂，加完轻轻摇下，在37℃培养箱中培养半个小时，最好用书包着避光。
半个小时后，洗板，甩掉反应液，拍干。
每孔加入250洗涤液后，放置两分钟，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，再重复洗涤4次。
第3步：显色：每孔分别加入50uL F试剂（显色液）和50uL G试剂（显色液），摇匀，将反应板放入37℃恒温培养箱中显色15分钟（可以F和G混合加100uL，现用现配）。
黄曲霉毒素测定
同单向展开法。
3.2.4 说明及注意事项
用过后受污染的玻璃器皿，应经次氯酸溶液(25g ／L)，浸泡消毒后再清洗之。
20%不等。硅胶有时含有铁盐及氯离子等杂质，它们可被展开剂提取出来， 对层析的结果产生一定影响。 • 硅胶H――不含粘合剂和其他添加剂（不会被展开剂提出杂质）。 • 硅胶HF254 ――掺有荧光指示剂，可在短波254纳米的紫外光下观察到荧光。 • 硅胶GF254――含石膏及荧光物质。
黄曲霉毒素B1标准溶液
展开与观察
•
在展开槽内加10mL无水乙醚，预展12cm，取出挥干。
再于另一展开槽内加10mL丙酮一三氯甲烷(8+92)，展开
10～12cm，取出，在紫外光下观察结果，方法如下：
•
a．由于样液上加滴了AFTB1标准，可使AFTB1标
准点与样液中AFTB1荧光点重叠。若样液为阴性，薄板上
第三点AFTB1为0．000 4μg，可用作检查样液中AFTB1
• 黄曲霉毒素属剧毒物质，其毒性比氰化钾还高，也是目前最强的化学致癌物 质。其中AFT B1的毒性和致癌性最强，帮其在食品中允许量各国都有严格 规定。
• AFT主要污染粮油及其制品，如花生、花生油、玉米、大米、棉籽等被污染 严重。
黄曲霉毒素允许量标准
• 食品品种 允许量标准（ppb或10-6）
• 玉米、花生、花生油 ≤20
次氯酸钠溶液
• 配制：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均 匀。另将80g工业用碳酸钠(Na2CO3·H2O)溶于 500mL温水中。将两液合并、搅拌、澄清、过滤。 此液含次氯酸25g／L。
• 思考题： • 1、次氯酸钠溶液的作用是什么？ • 消毒用，污染的玻璃器皿用次氯酸钠溶液浸泡可
食品中黄曲霉毒素M族的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定1 范围本标准规定了食品中黄曲霉毒素M1和M2（以下简称AFT M1和AFT M2）的测定方法。
本标准第一法为液相色谱-质谱联用法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。
本标准第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。
本标准第三法为试纸条法，适用于生鲜乳中AFT M1的测定。
第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2 原理试样中的AFT M1和AFT M2用水和乙腈的混合溶液提取，上清液的浓缩液用磷酸盐缓冲液稀释后，经免疫亲和柱净化，去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质。
净化液经液相色谱分离，串联质谱检测，同位素内标法定量。
3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.3 醋酸铵（CH3COONH4）。
3.1.4 氯化钠（NaCl）。
3.1.5 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
3.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.7 氯化钾（KCl）。
3.1.8 浓盐酸（HCl）。
3.1.9 氮气（N2）：纯度≥ 99.9 %。
3.1.10 石油醚（C2H2n+2）：沸程为30-60℃3.2 试剂配制3.2.1 5 mmol/L醋酸铵水溶液：称取0.39 g醋酸铵，溶于1000 mL水中。
3.2.2 乙腈-水溶液（25+75）：取250 mL乙腈加入750 mL水。
3.2.3 乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500 mL乙腈加入500 mL甲醇。
3.2.4 磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.00 g氯化钠，1.20 g磷酸氢二钠（或2.92 g十二水磷酸氢二钠），0.20 g磷酸二氢钾，0.20 g氯化钾，用900 mL水溶解，用盐酸调节pH值至7.4，再加水至1000 mL。
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----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:2
5.4净化
----取出免疫亲和柱,将上方塞子取出斜剪断,再插回亲和柱上;(3mL的免疫亲和柱去掉上方塞子,安装上转接头,将转接头另一端与注射器固定后使用
----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定,取适量处理后的溶液上样;
黄曲霉毒素标准操作规程
1、目的
为了规范亲和柱净化样本中黄曲霉毒素的操作流程,特制订本操作规程。
2、范围
本标准适用于粮食、饲料、中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测。
3、检出限和定量限
项目
岛津安捷伦
样本检出限
(µg/kg
样本定量限
(µg/kg
样本检出限
(µg/kg
样本定量限
(µg/kg
AFG10.12 0.4 0.9 3.0
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
----取10mL滤液加入20mL蒸馏水稀释,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
----取15mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.2适用于辣椒、花椒、黄豆酱等调料,面粉、麦芯粉、芝麻油及其它植物油、谷草
5.2溶液配制
5.2.1 70%甲醇-水溶液:取700mL甲醇,加入300ml去离子水混匀即可。
5.2.2 80%乙腈-水溶液:取800m乙腈,加入200ml去离子混匀即可。
5.2.3 1%吐温-水溶液:取1ml吐温-20,加入去离子水并定容至100ml。
5.2.4黄曲霉毒素混合标准工作液:用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到50 ng/ml、
数据文件名:AFT-B1-10ppb.lcd
样品名:AFT-B1-10ppb
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5min
0510152025mV
检测器A Ex:360nm,Em:440nm A F G 2
A F G 1
A F
B 2
A F
B 1
5.6注意事项
----使用前,免疫亲和柱需回至室温(22~25℃。----亲和柱2~8℃储存,不得冻存。----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----取样量:根据需要可以适当增加或减少取样量,注意提取液量要相应改变。----柱容量:300ng ,当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时,需要适当降
低上样液的体积,重新检测。
----pH :亲和柱的上样溶液pH需在6~8之间,若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调
节pH。
----取10mL滤液加入40mL 1%吐温-水溶液,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.4适用茶叶样品:
----10g±0.01g加入2g氯化钠,加入纯甲醇溶液100mL,混匀;
----高速均质(≥10,000r/min均质1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速滤纸过滤,收集滤液;
----去掉亲和柱下方堵头,调节开关,使液体以1~2滴/秒的速度流出;
----待液体排干后,用10mL去离子水洗涤2次,流速2~3滴/秒;对于颜色附着比较深的样品,先用1% Tween-20水溶液洗涤10mL,再用蒸馏水或去离子水洗涤10mL流速2~3滴/秒;
----待液体排干后,上样1mL甲醇,流速1滴/秒,收集洗脱液并定容至1mL;
----洗脱液用0.22μm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。
*每次上样前都要将上次液体完全排干。
5.5液相测定
5.5.1液相色谱条件
C18柱:250mm(长×4.6mm(直径,填料粒径5μm;
流动相:55%甲醇(AFB1;53%甲醇(AFT
流速:0.8mL/min;
柱温:40℃;
进样体积:20µL
20 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、1 ng/ml、0.5 ng/ml。
5.3样品前处理
5.3 1适用于玉米、小麦等粮食作物,花生及其制品,坚果、玉米油、花生油、饲料等
样品
----25g±0.01g样品(固体样品需粉碎,并过2mm分样筛,加入5g氯化钠与125mL 70%甲醇-水溶液混匀;
AFG20.08 0.2 0.3 0.86
AFB10.08 0.2 0.6 1.97
AFB20.04 0.12 0.2 0.63 4、职责
部门名称部门职责
质量管理部1、负责本制度的实施。
2、负责本制度的监督执行。
5、程序
5.1原理
测定的基础是抗原、抗体反应,抗体连接在柱体内,样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释,然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱,在免疫亲和柱内毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1,然后注入到分析仪器中用于检测。
----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.3适用于中药(2015版药典规定的19味中药等
----15g±0.01g样品(固体样品需粉碎,并过2mm分样筛加入75mL 80%乙腈-水溶液混匀;
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
等样品
----25g±0.01g样品(固体样品需粉碎,并过2mm分样筛加入125mL 80%乙腈-水溶液混匀;
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
----取10mL滤液加入40mL蒸馏水稀释,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
荧光检测器:发波长:360nm;
发射波长:440nm;
5.5.2色谱定量
分别取相同体积样液和标准工作液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰高或峰面积,以标准品浓度为横坐标,峰面积为纵坐标做标准曲线,将未知样本中黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的峰面积带入标准曲线,得到试样中黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的浓度,标准品色谱图参考下图: