丙二醛的测定

贵州大学

植物生理学综合性实验报告

题目：逆境对玉米生长的影响（丙二醛的测定）学院：生命科学学院

专业：生物科学类

班级：生物102

学号：1007040161

姓名：袁晓玲

指导老师：罗睿

2012-6-21

题目：逆境对玉米生长的影响（丙二醛的测定）

一、前期处理：

在苗期对玉米进行处理，一共有四盆玉米苗，标号为A、B、C和D。其中A为对照组，不做任何处理，只是每天浇25mL自来水；B盆：向其中喷洒草酸溶液；C盆：向其中喷洒氢氧化钾溶液；D盆：向其中喷洒氯化钠溶液；B、C和D盆中喷洒的溶液浓度均为0.1mol/L，并且每天喷洒25mL。

这样处理四天后，测量各个盆里玉米叶片的丙二醛的含量。

二、丙二醛含量的测定

1、实验目的

熟悉测定丙二醛（MDA）含量的常用的方法。

2、实验原理

植物器官在逆境条件下或衰老时，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常将其作为脂质过氧化指标，用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。

在酸碱和盐环境条件下，丙二醛可与巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的3，5,5—三甲基噁唑—2,4—二酮，在532nm处有最大吸收波长。但该反应会受到可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大的吸收波长在450处。

采用双组分分光光度计法可分别求出MDA和可溶性糖的含量。该法针对混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽有明显的差异，但吸收曲线彼此又有些重叠，可根据Lambert —Beer定律，通过代数方法，计算出一种组分由于另一种组分存在时对OD值的影响，最后分别得到两种组分的含量。

3、器材与试剂

（1）实验仪器：分光光度计、研磨器、恒温水浴、试管、量筒、烧杯。

（2）实验试剂：三氯乙酸、石英砂、硫代巴比妥酸（TBA）溶液（用10%TCA配制0.6%的TBA溶液）。

（3）实验材料：盆栽玉米。

4、实验步骤

（1）MDA的提取：取各个盆中玉米的叶片1g将其剪碎，加入10%三氯乙酸（TCA）2mL 和少量石英砂，研磨；进一步加入8mLTCA充分研磨，将匀浆液倒入试管中，静置20分钟，然后提取上清液，上清液即为样品提取液。

（2）显色反应及测定：吸取2mL提取液，加入2mL0.6%TBA液，混匀，置于沸水浴中沸煮15min，迅速冷却，静置。取上清液测定532nm和450nm处的OD值。对照管以2mL水代替提取液。

（3）计算：根据Lambert—Beer定律，（以蔗糖为例）得

C1=0.01171A450

C2=6.45×10-6×A532—0.56×10-6×A450

式中C1为蔗糖与TBA反应产物的浓度，单位是mol/L；C2为MDA与TBA反应产物的浓度，单位是mol/L。

5、实验结果

①各个组所在不同波长下测得的OD值：

编号OD值（532nm）OD值（450）A（对照组）0.249 0.292

B（加入草酸）0.246 0.363

C（加入氢氧化钾）0.433 0.484

D（加入氯化钠）0.414 0.462

②根据各个组在不同波长下测得的OD值分别算出蔗糖和MDA分别于TBA反应产物的浓度C1和C2：

编号C1（mol/L）C2（mol/L）A（对照组） 3.42×10-3 1.443×10-6

B（加入草酸） 4.25×10-3 1.383×10-6

C（加入氢氧化钾） 5.67×10-3 2.522×10-6

D（加入氯化钠） 5.41×10-3 2.412×10-6

三、结果分析

（1）处理期玉米的变化：刚喷洒各种试剂时，玉米苗并没有立即死亡，两天以后才开始有根腐烂的情况出现，并且在此期间，玉米苗很纤细，叶片逐渐变黄，萎蔫。

原因：植物在受到逆境胁迫表现出受到损伤的现象之前，植物会对逆境胁迫做出适应性的调节反应，在喷洒的浓度不是很大，量不是很多的情况下，并不会马上表现出受损现象，然而随着喷洒的时间增多，最终还是会经受不住而出现了受损的现象，根逐渐开始腐烂，叶片变黄，开始萎蔫。此外，叶片变黄可能还有另外一个原因，那就是由于“营养不良”。因为在此期间没有为其额外的添加矿物质营养，而使得土壤中的矿质营养元素缺乏而导致，例如缺乏磷，氮等元素。

（2）通过测定玉米叶片中丙二醛的含量，由上述实验结果得知：

①蔗糖与TBA反应产物的浓度（C1）：C>D>B>A

②MDA与TBA反应产物的浓度（C2）：C>D> A >B

植物在经受逆境胁迫时，可溶性糖会增加，这是由于逆境可以诱导蛋白质转变成可溶性物，可以促使合成酶的作用下降，解酶的作用增强。检测结果表明喷洒氢氧化钾溶液对玉米的伤害最大，而氯化钠溶液次之，草酸溶液最小。而在MDA与TBA反应产物的浓度中对照组却大于B组，其原因可能是对照组喷洒的是自来水，其含有一定的消毒剂。

喷洒氢氧化钾溶液对玉米生长的影响：玉米对PH的适应范围为5—8，最适应的PH值为6.5—7中性土壤，喷洒氢氧化钾碱性溶液使得土壤中的PH值增大，从而影响玉米的生长，土壤呈碱性，最终导致玉米的根部坏死腐烂死亡，由于氢氧化钾溶液使强碱，所以对玉米的生长影响也就最大。

喷洒氯化钠溶液对玉米生长的影响：盐胁迫会对植物造成如吸水困难、生物膜破坏及生理破坏絮乱等各种伤害，在0. 1mo l/L氯化钠溶液胁迫下前两天与对照相比没有太大变化, 根系较对照长但细弱, 第三天开始，叶片逐渐发黄, 生长开始受到抑制。

喷洒草酸溶液对玉米生长的影响：土壤中含有大量铝的氢氧化物，土壤酸化后，可加速土壤中含铝的原生和次生矿物风化而释放大量铝离子，形成植物可吸收的形态铝化合物。植物长期和过量的吸收铝，会中毒，甚至死亡。

过量消毒剂对植物生长的影响：因为消毒剂常常具有强氧化性，减少了土壤中的有机成分，使土壤偏碱或过酸，过量的消毒剂会对植物造成伤害甚至死亡。