光学显微镜模板
实验一普通光学显微镜的结构和使用方法PPT讲稿
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八、显微结构图的绘制
• 生物绘图中绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特 点，绘图注意事项如下：
(1) 绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔， 一般用 2H 铅笔为宜。
(2) 图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中
央稍偏左方，并向右方引出注明各部名称的线条。各引出 线条要整齐平列，各部名称写在线条右边
3. 载物台和切片夹(Mechanical stage and specimen retainer)
4. 推进器(Mechanical stage adjustment knob)
5. 物镜(Objectives) 6. 粗细螺旋(Course and fine
focus knob)
7. 目镜(Oculars)
块内表皮，将其置于载玻片上的水滴中（注意表皮的外面应朝上） ，如 果内表皮发生卷曲，应细心用解剖针将其展平． • 盖上盖玻片，注意加盖玻片时，应该用镊子夹住盖玻片一侧，使盖 玻片另一侧边缘与水滴边缘相接触，然后慢慢放下，直到放平为止， 这样可使盖玻片下的空气逐渐被水挤出，以免产生气泡，影响观察。 如果水太多浸出盖玻片外，可用吸水纸将多余的水吸去
2.相位板（annular phaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板， 可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。
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《显微镜》ppt课件
暗 视 野 照 明 方 式
六、紫外光显微镜
使用紫外光源可以明显提高显微镜的分辨率，对于 生物样品使用紫外光照明还具有独特的效果。生物 细胞中的原生质对可见光几乎是不吸收的，而蛋白 质和核酸等生物大分子对紫外光具有特殊的吸收作 用。因此，可以使用紫外光显微镜（ultraviolet microscope）研究单个细胞的组成与变化情况。
相衬显微镜比普通光学显微镜多了2个部件：
在聚光器上增加一个环形光阑； 在物镜后焦面增加一个相板，相板上有一个环形区，通过
环形区的光比从其它区域透过的光超前或滞后1/4λ，这样 就使通过标本不同区域光波的相位差转变为振幅差。
相衬显微镜照明原理
光通过标本致密区时发生衍射，产生偏折光，相位 和未受影响的直射光相比被推迟了1/4λ。只有未发 生偏折的的直射光可通过相位板的环形区，其它的 偏折光在物镜的后焦面上产生了一个与通过相位板 的环形区的光不同的1/4λ的光程差。两组光在平面 上成像。
如果离光轴越远处放大率越大，则像的外部线段将比中间 线段长，结果形成了枕形畸变，这种畸变称为正畸变。
反之则形成边缘放大率小而近轴放大率大的桶形畸变，称 为负畸变 。
(二)、 色 差
色差(chromatic aberration )是一种由白光或复色光经透镜成像 时，会因各种色光存在着光程差而造成颜色不同、位置不重 合、大小不一致的不同成像效果，从而造成像和物的较大失 真。
如相板的环形区使直射光超前1/4λ，加上开始直射 光超前的1/4λ，直射光共超前1/2 λ，直射光和偏折 光叠加形成的合成波振幅减少，产生暗反差。
如相板的环形区使直射光滞后1/4λ，加上开始直射 光超前的1/4λ，两者相抵直射光不发生变化，直射 光和偏折光无相位变化，形成的合成波振幅增加， 产生明反差。
普通光学显微镜的使用及细菌三形观察模板ppt课件
五、实验结果
绘图，记录所观察到的细菌三种 基本形态。
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15
六、问题与讨论
1、使用高倍镜与油镜调焦时应注意什么？ 2、使用油镜时，在载玻片和镜头之间加滴 什么油？起什么作用？ 3、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观 察中有什么意义？
下次实验：细菌简单染色法与革兰氏染色法
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3.根据使用者个人情况，调节双目显微镜的目镜
双目显微镜的目镜间距可以适当调节，使其与观察者两个眼睛瞳
孔的距离相符。
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（二）显微观察
1.低倍镜观察
将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标 本移动螺旋，使目的物处于物镜的正下方。
调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼 睛在侧向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。
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三、实验器材
显微镜、擦镜纸、双层瓶（香柏油、二甲 苯）等。
细菌三型标本片（球菌、杆菌、螺旋菌）
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四、操作步骤
（一）观察前的准备
1.取镜和安放
置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜 检者姿势要端正。
2.光源调节
安装在镜座内的光源灯可通过调节电流或电压来获得适当的照明 亮度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。
光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤 光片、虹彩光圈等组成
3
普 通 光 学 显 微 镜 基 本 构 造
4
油镜的工作原理
滴加镜油的作用 （1） 增加照明亮度 （2） 增加显微镜的分辨率
分辨率（最小可分辨距离）=λ/2NA
式中λ=光波波长 ； NA=物镜的数值孔径值
NA= n·sin(α/2 )
以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后
现代光学显微镜PPT模板
05
第三章现代显微镜的机械部件
第三章现代显微镜 的机械部件
一、镜体 二、载物台 三、照明装置及滤光片 四、光路转换机构
06
第四章显微镜的性能
第四章显微镜 的性能
一、显微镜 的成像原理
六、焦点
01
二、镜口
深 度 06
率
02ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
·
05
五、清晰
03
三、分辨
度
04
率
四、放大率
第四章显微镜的性 能
七、视野 八、物镜质量的检查方法
一、显微镜的构造 二、干涉显微镜的技术原理 三、干涉显微镜的使用方法 四、干涉显微镜的应用 参考文献
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第十三章荧光显微镜
第十三章荧 光显微镜
06
六、滤光片 的使用方法
01
一、荧光
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五、滤光片 的性能
02
二、荧光显 微镜
04
四、光的吸 收和滤光片
03
三、荧光光 源
第十三章荧光显微 镜
七、荧光色素 八、荧光显微镜的应用 九、荧光细胞化学 参考文献
0 5
五、相差显微 镜的应用
0 3
三、相差显微 镜的成像原理
0 6
参考文献
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第十一章偏振光显微镜
第十一章偏 振光显微镜
0 1
一、光的偏振 现象
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四、使用方法
0 2
二、透光物体 的光学特性
0 5
五、偏振光相 差技术
0 3
三、显微镜的 部件
0 6
参考文献
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第十二章微分干涉显微镜
第十二章微分干涉 显微镜
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第十四章显微分光光度计
显微镜的构造图
的形貌信息
功能
• 微电子技术：用于微器件的表面形貌检测和分析
03
显微镜的成像技术与发展
光学显微镜的成像技术
传统成像技术
• 利用透镜对光进行聚焦和放大
• 通过调整目镜和物镜来改变放大倍数和成像清晰度
成像技术
• 光学显微成像技术：利用光学原理对样品进行成像
• 荧光显微成像技术：利用荧光标记和荧光显微镜对样品进行成像
• 生物科学：观察细胞、细菌、病毒等微小生物结构
• 光的波长和透镜的折射率决定了显微镜的分辨率
• 材料科学：研究材料的微观结构和性能
• 医学领域：观察组织、细胞、病毒等微小结构
02
显微镜的分类与比较
光学显微镜的类型与特点
类型
• 简易显微镜：结构简单，放大倍数较低
• 显微镜：放大倍数较高，功能丰富
CREATE TOGETHER
DOCS SMART CREATE
显微镜构造图解析与应用
DOCS
01
显微镜的基本构造与原理
光学显微镜的组成部件及其功能
01
02
03
04
05
镜筒
•目镜
位于镜筒上方的透
镜
物镜
调焦装置
• 容纳光学组件的圆
• 用于放大观察物体
的图像
载玻片和盖玻
片
• 用于放置样品的平
品之间的距离
• 材料科学：研究材料的微观结构和性能
• 医学领域：观察组织、细胞、病毒等微小结构及其功能
04
显微镜在科研与工业领域的应用
显微镜在生物科学领域的应用
01
观察细胞结构
• 利用显微镜观察细胞的形态、结构和功能
• 研究细胞内的生物大分子和细胞器
光学显微镜PPT课件
第一章 光学显微镜
第0节 预备知识
Thin Lenses
paraxial rays, in air
11 so si
if the lens is “thin,” then
(nlens
1)
1
R1
1 R2
Thin Lens Equation
11 1
so si
f
Gaussian Lens Formula
cancel some aberrations
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Collection Efficiency
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We Forgot Collection Efficiency
So, now we couple this system, and find out that we have too little light striking the tissue … what went wrong?
optic axis
15deg sin(.262 rad) 0.259 10 deg: sin(.175 rad) 0.174 5 deg: sin(.873 rad) 0.872 1 deg: sin(30.5 mrad) 30.5 E-3
30 deg: sin(.524 rad) .5 45 deg: sin(.785 rad) .707
object is REAL
when rays diverge from object:
so
so > 0
object is VIRTUAL when rays converge to object:
so < 0 so
usually only with lens combination1s7
试验一 光学显微镜应用及显微摄影技巧PPT参考课件
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素材和资料部分来自 网络，如有帮助请下载!
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二、传统胶片显微摄影过程
• 显微摄影装置的安装与调试 •↓ • 显微镜的光路调整 •↓ • 装入胶片 •↓ • 取景聚焦 •↓ • 暴光: 1/15sec(应先测光:绿灯亮可以正确暴光) •↓ • 黑白胶片的冲洗:显影 3min→停显 10sec→定影 15min→水洗:流水冲洗30min
→晾干 •↓ • 印相放大:取景聚焦→暴光→显影 →停显 10sec→定影 15min→水洗:流水冲
6、倒置显微镜 inverse microscope
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7、显微操作仪
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转 基 因 显 微 操 作 过 程
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8、透射电子显微镜 TEM
TEM LIGHT PATHWAY
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TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE，TEM
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扫描电子显微镜 SEM
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SEM LIGHT PATHWAY
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Light Pathway of Microscope
4
分辨力等于光点爱里圆盘的半径 R=0.61λ/N．A． 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2，n=介质 折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。
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两个最近可分辨光点的爱里圆盘
思考：如何提高显微镜的分辨能力？
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ห้องสมุดไป่ตู้
2、荧光显微镜 Fluorescence microscope
实验一、光学显微镜使用 及显微摄影技术
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一、实验目的
• 1．了解显微镜各部分的名称、结构和功能， 学习普通光学显微镜、暗视野显微镜、相 差显微镜、荧光显微镜、微分干涉差显微 镜、倒置显微镜、显微操作仪等的构造和 使用方法。
光学显微镜实训报告模板
一、实训目的1. 了解光学显微镜的构造、工作原理及操作方法；2. 掌握光学显微镜的保养和维护方法；3. 学会使用光学显微镜观察和分析生物样本；4. 提高实验操作技能和科学思维能力。
二、实训时间XXXX年XX月XX日至XXXX年XX月XX日三、实训地点XXXX实验室四、实训内容1. 光学显微镜的基本构造及原理；2. 光学显微镜的使用方法；3. 光学显微镜的保养和维护；4. 观察和分析生物样本。
五、实训过程一、光学显微镜的基本构造及原理1. 镜身：包括镜座、镜柱、镜臂、载物台等；2. 光学系统：包括物镜、目镜、照明系统等；3. 传动系统：包括粗调焦、细调焦等；4. 附件：包括切片、载玻片、盖玻片等。
光学显微镜的工作原理是利用物镜放大样本，通过目镜观察，实现对样本的观察和分析。
二、光学显微镜的使用方法1. 开启显微镜，调节光源亮度；2. 将样本放置在载物台上，用切片或载玻片固定；3. 调整粗调焦，使样本在物镜下清晰；4. 调整细调焦，使样本在目镜下清晰；5. 观察样本，记录观察结果。
三、光学显微镜的保养和维护1. 保持显微镜的清洁，定期擦拭镜身和光学部件；2. 避免长时间连续使用，以免损坏光学部件；3. 使用完毕后，关闭显微镜，整理实验器材；4. 定期对显微镜进行保养，包括加油、清洁等。
四、观察和分析生物样本1. 观察样本的形态、结构、颜色等特征；2. 分析样本的生理、生化等特性；3. 撰写观察报告，记录观察结果。
六、实训总结通过本次光学显微镜实训，我了解了光学显微镜的构造、工作原理及操作方法，掌握了光学显微镜的保养和维护方法，学会了使用光学显微镜观察和分析生物样本。
在实训过程中，我深刻体会到实验操作技能和科学思维能力的重要性，同时也认识到实验过程中严谨、细致的态度对于实验结果的准确性至关重要。
以下为实训报告的具体内容：一、光学显微镜的基本构造及原理在实训过程中，我详细了解了光学显微镜的构造，包括镜身、光学系统、传动系统及附件等。
实验一光学显微镜构造及使用共47页文档
1、 舟 遥 遥 以 轻飏， 风飘飘 而吹衣 。 2、 秋 菊 有 佳 色，裛 露掇其 英。 3、 日 月 掷 人 去，有 志不获 骋。 4、 未 言 心 相 醉，不 再接杯 酒。 5、 黄 发 垂 髫 ，并怡 然自乐 。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
光学设计报告——显微镜【精选】
光学课程设计报告姓名：***学号：********学院：仪器科学光电信息工程学院班级：光信2班指导老师：***设计任务要求设计题目：显微镜设计要求：目镜: 放大率19倍物镜：放大率6倍共轭距150mm中间像直径大于6mm课程要求熟悉ZEMAX的基本操作完成《ZEMAX练习内容.docx》内容按照给定参数，设计显微目镜、物镜，并组合。
完成课程设计报告物镜一、物镜系统选择按照参数，从《光学仪器设计手册-显微物镜.doc》中选取编号4-03号物镜。
该结构有如下特征：1、放大率为-5，接近目标值-6。
2、采用对称结构，可以有效降低加工难度和成本。
物镜镜头如图：将该物镜的镜头数据输入到新建LDE表格中。
根据条件，系统物面空间NA设为0.26，便于目镜的选择制作。
视场数据选用如图所示：先把各个面曲率半径设为可变，确定默认优化函数PMAG为6倍后开始优化。
物镜镜头共轭距改为150mm，要进行镜头缩放。
1、优化结果分析镜头结构：物镜数据优化表格：该物镜镜头同时替换了玻璃，进行了锤形优化使镜头SPT图显示更好。
SPT图：通过数据可以看出，优化结果还可以。
我们还可以从多个图分析该镜头的优化程度，接下来呈现多个优化结果。
MTF图：系统信息图：通过该系统信息图可知Image Space NA 是0.04483145，这就是所需匹配目镜的物间空间NA，目镜一、目镜系统选择1、目镜要求：放大率 19物空间NA 0.04483145目镜焦距 13.158mm根据目镜目标参数，选择镜头型号规格如图所示：输入到ZEMAX表格中。
2、优化过程注意PARAXIAL的最后要设为23mm，眼睛镜头到像面（视网膜面）的最适距离。
各曲率半径设为变量，玻璃镜头设为替换(进行自动优化和锤形优化）。
默认目标函数改为EFFL（13.158）。
优化过程中镜头要反转，反复的调节back foal length，使它接近目镜的EFFL.二、目镜优化分析优化后的目镜结构：SPT图：MTF图：组合一、组合状态合并后数据如下：光路结构图如下：调节物像高度使中间像高直径大于6mm二、像质评价组合镜头SPT图：对SPT图数据分析：73*近轴放大率（12.7）/{（30.68/2）^2+[(21.468+19.932+19.239)/3]^2}大约等于37。
光学显微镜实训报告单模板
一、实验名称：光学显微镜实训二、实验目的：1. 熟悉光学显微镜的构造及工作原理；2. 掌握光学显微镜的使用方法；3. 学会观察细胞结构，并绘制细胞图；4. 了解光学显微镜在生物学研究中的应用。
三、实验器材：1. 光学显微镜；2. 显微镜载物台；3. 显微镜镜头；4. 显微镜支架；5. 染色剂；6. 滴管；7. 显微镜样品玻片；8. 玻片夹；9. 记录本；10. 铅笔。
四、实验步骤：1. 显微镜的组装：将显微镜支架、载物台、显微镜镜头依次组装好。
2. 显微镜的调整：（1）对光：将显微镜放置在实验台上，打开显微镜光源，调整光圈大小，使视野明亮；（2）调焦：将样品玻片放置在载物台上，用低倍镜观察，通过调节粗准焦螺旋，使样品玻片与物镜距离适中，然后通过细准焦螺旋，使样品玻片清晰；（3）换镜：根据观察需要，更换不同倍数的镜头。
3. 观察细胞结构：（1）观察细胞形态：通过观察细胞的大小、形状、边界等特征，了解细胞的形态；（2）观察细胞结构：通过观察细胞质、细胞核、细胞器等结构，了解细胞的基本组成；（3）绘制细胞图：根据观察到的细胞结构，绘制细胞图。
4. 实验记录：（1）记录实验现象：详细记录观察到的细胞形态、结构等特征；（2）记录实验数据：记录实验过程中使用的显微镜倍数、调焦方法等数据；（3）分析实验结果：对实验现象和数据进行总结，分析实验结果。
五、实验报告：1. 实验名称：光学显微镜实训2. 实验目的：熟悉光学显微镜的构造及工作原理，掌握光学显微镜的使用方法，观察细胞结构，并绘制细胞图。
3. 实验器材：光学显微镜、显微镜载物台、显微镜镜头、显微镜支架、染色剂、滴管、显微镜样品玻片、玻片夹、记录本、铅笔。
4. 实验步骤：组装显微镜、调整显微镜、观察细胞结构、绘制细胞图、实验记录。
5. 实验结果与分析：（1）观察到的细胞形态：描述观察到的细胞大小、形状、边界等特征；（2）观察到的细胞结构：描述观察到的细胞质、细胞核、细胞器等结构；（3）实验数据：记录实验过程中使用的显微镜倍数、调焦方法等数据；（4）实验结论：总结实验结果，分析实验现象与实验数据，得出实验结论。
光学显微镜PPT(课堂)
各种滤色镜
荧光显微镜的应用范围
• 生物体内的各 种组织、细胞、 细胞器、微生 物、病毒等， 对激发光的敏 感度不同，使 用时应选择不 同的激发滤色 镜来得到最佳 的激发光。
激发方式 激发波长 应用范围
U激发
V激发 B激发 G激发
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病理切片，细菌、FITC 染料、
365.405. 自发荧光、一般荧光抗 435 体、四环素染色物 FITC染料、吖啶橙染色、 405.435. 染色体、红细胞、癌细 490 胞、蛔虫 546 浮尔根染色、DNA
其光学结构原理是 • 由一个共用的初级物镜，对物体 成像后的两个光束被两组中间物 镜亦称变焦镜分开，并组成一定 的角度称为体视角（一般为12度 --15度），再经各自的目镜成像， 它的倍率变化是由改变中间镜组 之间的距离而获得， • 利用双通道光路，双目镜筒中的 左右两光束不是平行，而是具有 一定的夹角，为左右两眼提供一 个具有立体感的图像。 • 它实质上是两个单镜筒显微镜并 列放置，两个镜筒的光轴构成相 当于人们用双目观察一个物体时 所形成的视角，以此形成三维空 间的立体视觉图像。
1.2凸透镜的五种成象规律 (1) 当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在象 方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实象； (2) 当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在象方 二倍焦距上形成同样大小的倒立实象； (3) 当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外 时，则在象方二倍焦距以外形成放大的倒立实象； (4) 当物体位于透镜物方焦点上时，则象方不能成 象； (5) 当物体位于透镜物方焦点以内时，则象方也无 象的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形 成放大的直立虚象。
三、体式显微镜
• 又被称为实体显微镜或解剖显微镜，是为了 不同的工作需求所设计的显微镜。 • 利用解剖显微镜观察时，进入两眼的光各来 自一个独立的路径，这两个路径只夹一个小 小的角度，因此在观察时，样品可以呈现立 体的样貌。
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温罩和自动恒温调节器，直接观察体外培
养的细胞，以及对活细胞进行各种实验操
作及连续观察和拍摄电影
第三节 相差显微镜
相差显微镜是利用光的干涉和衍射作用，
使不染色标本中不同折光的部分变成明暗相差的
图像，因此可适用于观察体外培养的活细胞形态
结构及分裂增生和运动变化、染色标本中染色所
不能显示的微细结构等
一、相差显微镜成像原理
基本原理涉及两个问题：光波的相位差 和光的干涉与衍射
相差显微镜的特点是改变光的相位，使
相位差变为振幅差，借此增强或减弱光的明 暗度而观察生活标本的微细结构
二、相差显微镜装置
增加部件：环状光栏、相位板和中心望远镜
环状光栏随物镜放大倍数的高低变更
光镜标本显微摄影技术
光镜标本显微图像处理与分析技术
第一章 光学显微镜
光学显微镜是观察生物有机体的微
细结构、组织和细胞内的物质分布及有 关细胞功能活动的精密仪器
显微镜的发展历史及应用成果
荷兰人（ Zacharias Janssen ） （1595年）发明第一台复式显微镜？
英国人Robert Hook（1665年） 第一次用最简单的显微镜观察生物样 品—软木切片，发现了一些锋窝样空 腔结构，并命名为“细胞”
（形态、机能）
生物光镜技术是生物医学研究中最常用手段之一
《生物光镜标本技术》希望能给大家对生物光镜 标本技术涉及的范围和常用的技术方法有个 初步了解，并对今后研究工作有所帮助
内
容
光学显微镜
光镜标本基本制作技术
光镜标本特殊染色技术
光镜标本组织化学技术
光镜标本免疫组织化学技术
光镜标本杂交组织化学技术
N.A=n*sin u
物镜分辨率（Z）是指能分辨物体两点间 最短距离的能力，与光波波长（λ）和数值孔 径（N.A）的关系 Z= 0.61 λ /N.A 可见光波波长平均为550nm，数值孔径一
般小于1，最大数值孔径为1.4，所以光镜最高
分辨率约为0.25μm
新的理论及技术使光学显微镜能超高分辨率！
江苏省优秀研究生课程
生物光镜标本技术
南通大学医学院
组织学与胚胎学系
王 晓 冬
E-mail: wxdzw@；QQ: 455606752 电话：0513-85051862 13773659801
2015年3月
目 的
不同层次的研究方法
（整体、器官、组织、细胞、分子）
不同学科的研究方法
荧光也是一种光致发光的现象
释放出的荧光波长较激发光的长，如引
起荧光的最有效的光常是激光、紫外光和蓝
紫光，而产生的是红、橙、黄、绿、青、蓝、
紫色的荧光 荧光分自发性荧光（原发荧光、固有荧 光或自然荧光）和续发性荧光
二、荧光显微镜组成
（一）光源
荧光显微镜均附有高压汞灯和低压钨
丝或卤素灯两种光源。前者为荧光显微镜
德国植物学家Schleiden（1838年） 和动物学家Schwann（1839年）分别发现 植物和动物都是由细胞组成，建立了“细 胞学说” 德国病理学家Virchow（1856年）进
一步提出细胞是机体的结构和功能单位
显微镜的种类
普通光学显微镜 相差显微镜
倒置显微镜
其大小，常将不同的（ 10×、 20×、 40×、 100×）环状光栏与聚光器装在一起组成转
盘聚光器，转动聚光器可更换大小不同的
光栏。数字为“ 0” 时，表明无环状光栏， 为普通明视野观察孔
第四节 荧光显微镜
荧光显微镜的主要特点是观察的标本图
像，不是由于光源照明成像的结果，而是由
于标本内的荧光物质吸收光源而发出的激发 光光能，所呈现的荧光现象，如果停止照明 （停止供能），则荧光现象立即消失
一、荧光的产生
光的实质上是物质的原子或分子向外辐射 的一种可见的电磁波 当光进入某些物质后，部分或全部光能可 被此物质的分子或原子吸收 物质从外部吸收光能后，会进入新的状态， 称为“激发态”。而激发态属于不稳定状态， 所以物质会从激发态回到原来的基态，以电磁 辐射的形式放出所吸收的能量，这种现象叫做 “发光”
激发滤片和阻断滤片的联合使用
光镜荧光图像分辨率受到衍射极限限制
激发的荧光 ~ 1 nm
物镜
衍射极限光点
Dr ~ 200 nm
放大率指最终成像与原物体的大小比值 总放大率=物镜线放大率×目镜角放大率
放大率受物镜分辨率的限制
景深（将焦点调在标本上的某一平
面时，能看清楚这一平面及其上下结构
的清晰部分的厚度）
视野范围
视野亮度
四、光学显微镜照明技术
荧光显微镜
激光扫描共聚焦显微镜 暗视野显微镜 偏光显微镜 多光子显微镜 原子力显微镜
微分干涉显微镜 扫描遂道显微镜 电子显微镜
第一节 普通光学显微镜
一、普通光学显微镜的原理及性能
二、普通光学显微镜的结构
(一) 机械部分
(二) 光学部分
三、光学显微镜技术指标
数值孔径（N.A）为物镜从物体吸收的光量， 取决于物体点到镜面边缘入射光束与物镜光轴之 间形成的角度（u）和光线通过介质的折射率（n）
透射式照明 落射式照明
倒置显微镜把光源和聚光器安装在显 微镜载物台的上方，物镜放置在载物台的 下方
配有附件：相差长焦距聚光器和物镜、
暗视野聚光器、荧光显微镜光源和滤片（激
发滤片和阻断滤片）以及电影摄像机等
显微镜特点：增大了物镜和聚光器的
工作距离，载物台可放置较高的标本，如
光源，后者为进行普通标本观察时的照明
光源
（二）滤片系统
（三）显微镜
350
400 nm
457 488 514
500 nm
610
600 nm
Exciting Light
Fluroescence
Texas Red PI Ethidium PE FITC
激发滤片装在光源和标本之间的滤片滑板 中，其作用是吸收光源中波长较长的可见光， 允许短于一定波长的光波通过，作为荧光显微 镜的激发光 阻断滤片是装在物镜和目镜之间的光路滑 板中。吸收短于滤片标记数字的波长光，允许 长于标记数字的波长光通过。它的主要作用是 吸收视野内未被标本吸收的激发光，允许标本 内的物质发射的荧光通过，以获得清晰的荧光 图像和保护观察者的眼睛 吸热滤片 吸收紫外线滤片