抗酸染色

抗酸染色的原理：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。

但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。

齐- 尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。

当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。

实验材料：
细菌：结核杆菌
染液：1.石炭酸复红液、2.3%盐酸酒精、3.碱性美兰溶液
其它：接种环、酒精灯、载玻片等
1）石炭酸复红液
碱性复红乙醇染色储存液:碱性复红液:8g碱性复红溶于95%乙醇100ml中。

5%石碳酸水溶液:5g石碳酸溶于100ml蒸馏水中。

2）3%盐酸酒精：3ml浓盐酸与97ml乙醇混合
3）碱性美兰溶液配方：
A液：美兰0.6g
95%乙醇30ml
B液：KOH
蒸馏水100ml
分别配制A液和B液，配好后混合即可。

实验方法：
1、细菌涂片标本的制备
涂片干燥固定
2、染色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

2）脱色：3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。

3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸水纸吸干。

3、油镜观察
注意事项：
1、无菌操作
2、涂片厚度要适中
3、固定
4、冲洗
5、染色时间
6、初染加热的温度，勿沸腾
试剂萋尔尼染色法
（1）碱性复红乙醇染色储存液:碱性复红液:8g碱性复红溶于95%乙醇100ml中。

5%石碳酸水溶液:5g石碳酸溶于100ml蒸馏水中。

（2）碱性复红乙醇染色液:10ml碱性复红储存液与90ml5%石碳酸水溶液混合。

（3）5%盐酸乙醇脱色液:5ml浓盐酸与95ml乙醇混合。

（4）0.3%亚甲兰复染储存液:0.3g亚甲兰溶于50ml95%乙醇中，完全溶解后加蒸馏水至体温100ml。

（5）亚甲兰复染液:以蒸馏水10倍稀释0.3%亚甲兰复染储存液即得亚甲兰复染液。