血细胞形态学分解

2.缓冲夜配制（PH6.4-6.8，弱酸性）： 配方1 （贮存液） 配方2 1%KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 1%Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 H2O(新鲜) 加至1000ml 置处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。
73.5ml 26.5ml
血细胞形态学采样、制片与检查程序： 血细胞形态学是十分细致、艰苦的工作，来不得半点虚假，wk.baidu.com只有认真观察与思维，才能发现问题与解决问题。因此，人的 主观能动性显得十分重要。另一方面，要具有全面的临床与血 液学知识，较丰富的细胞形态学水平，才能发挥人的高素质， 才算得上德才兼备的优秀血液学人才。
血细胞形态学基本概念及临床应用： 血细胞形态学：观察血细胞形态和数量及其比例的变化来 研究造血器官的结构和功能是血液学的重要组成部分，是很早 就开展的一门学科，是诊断造血系统疾病最基本、最简便实用 的检查方法之一，被临床普遍应用。 正常人的血液及造血器官中，各种血细胞的数量有一定的 正常范围，不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构 特点。在造血系统疾病中，如果造血功能发生紊乱，就会从血 细胞形态学的量变和质变中反映出来，因此，可将形态学变化 作为血液病的诊断依据。
3.相差镜检查： 用于观察未染色细胞的内部结构及活细胞的活动及形态， 并结合细胞培养，观察细胞的生长、成熟、衰亡过程及对各种 刺激的反应，可采用显微镜摄影术或显微电影将活细胞活动拍 摄和记录下来。
4.电镜检查： 有透射和扫描电镜两种，它的出现和应用对细胞学的进展 是一个重大的突破。透射电镜的分解力可达到2-3埃左右，把 细胞放大到几十万倍，能观察到一般电镜中无法观察到的细胞 内超微结构。
5.骨髓涂片：骨穿抽取骨髓 液至关重要，否则，骨髓细胞学检查则无法 进行或不能真实反应骨髓造血状态。穿刺针定位后抽骨髓液量＜0.2mm， 拔出穿刺针时应保持注射器连接穿刺针的真空状态，再拔针，反复地打出 骨髓，抽回血液部分，使玻片面留下较脓的骨髓液及骨髓小粒，进行推片。 应推十张以上，顺序编号，以备常规形态学及细胞化学染色检查之用。骨 髓液涂片与外周血涂片有所不同，骨髓液有核细胞多，脂肪成分较多，粘 稠度高，未抗凝，易凝固，操作应敏捷。涂片时，应根据骨髓上述特点及 病人情况，调整推片技巧，推片速度较血片慢，使细胞充分在玻片上摊展 开来，迅速扇（摇）干。
3.油镜观察：要求观察具有代表性区域的细胞形态比例，分类计数－镜头 移动走向，按图进行。骨髓有核细胞分类计数200个，外周血细胞分类计数 100个。
1.常规染色法 （1）姬姆萨（Giema’s）染色： Giema’s粉末为eosin-azureⅡ3.0g及天青 azureⅡ0.8g混合而成。对胞浆和颗粒显色较好。 （2）瑞氏（Wright’s）染色：Wright粉末是亚甲兰与伊红合成，染色对胞 核结构显色好。 （3）瑞氏-姬姆萨混合染色（W-GS）：以瑞氏（核）染色为主，取其两者 优点。 （4）May-Giemas氏染色：先用May-Giemas氏染液染色（ May-Giemas 氏液是含0.5伊红酸亚甲兰的甲醇溶液），再用姬姆萨氏染色的方法，主要 用于染色体染色。
3.缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察PH的 改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保 持一定的PH使染色稳定，PBS的PH一般在6.4-6.8，偏碱性染 料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料可与缓冲液中的 碱基起中和作用，使PH恒定。
（三）瑞氏染液配制： 1.瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830mg或1g 甲醇（AR） 500ml或600ml 瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，加少许甘油或甲 醇溶解研磨，在加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体 倒入一清洁储存瓶内，再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇 用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解 愈好，一般储存3个月以上。
几种血细胞形态学的检查方法：
1.光镜（瑞氏-姬姆萨染色）是血细胞形态学最基本和最常用的 检查方法，被看成是血细胞形态学的基本内容，最广泛应用于 临床实验室。
2.细胞化学染色： 是细胞学和化学两者结合的形态学方法，其目的和特点是 细胞保持完整组织结构。在细胞个体组织的单位上，显示化学 结构成分的定性或半定量。在血液学中应用的意义： （1）研究血细胞化学成分及代谢功能； （2）协助血液病的诊断与鉴别诊断，尤其是急性白血病 分型及鉴别诊断； （3）观察血液病的疗效及判断预后； （4）探索血液病的发病机制。
瑞氏染色法（Wrights Stain）： 细胞染色机制：染色是将细胞经染色剂的物理和化学作用， 使其清楚显示细胞各个组成成分，有利辨识细胞形态。 染色可分两个步骤： 1.染料受相应物质吸附而附着于物质表面； 2.固着作用，即染色粒子进入细胞内起化学反应（染色透 过细胞膜的学说很多，尚无定论），与相应的物质形成溶解度 很低的盐固着于细胞内而显色。染色剂皆有选择作用，其染色 不是将细胞全部一齐着色，而只是将其中一部分染色，多余的 被冲洗掉。目前多以吸附学说（电力吸附、机械吸附、化学吸 附）来解释。
血细胞形态学检查，要注意与临床资料的密切相关性， 即微观与宏观疾病的关系，但也需要注意血细胞形态学本身相 对的独立性。在检查前应先研究患者的病例资料，即实验室检 查结果，临床诊断与送检目的及要求，进行初步分析，提出可 能存在问题，在检查与观察骨髓及血片细胞形态学过程中，再 一一思索这些问题。对于临床上提出申请检查目的、要求及临 床诊断，是否可以帮助证实与排除的可能性，同时也应注意临 床未提出的问题和临床资料不周全时应追究病史，充实资料、 占有资料，并将形态学的发现和临床资料反复联系思考，最后 做出较正确的结论。
基本概念 1.瑞氏染料是碱性染料美蓝和酸性染料伊红合称伊红美蓝 染料即瑞氏染料。 伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有 色部分为酸色，故称伊红为酸性染料。美蓝的中间产物结晶为 三氯化镁复盐，有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与 伊红钠盐相反。
2.用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染 料良好溶剂，有两种作用 （1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中 离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。 甲醇 ME（瑞氏染料）──→M+ + E在配置的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天 青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆 染成蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学 作用，是离子彼此结合的反应。 （2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及 增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料的吸收作用，同时由 于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
（二）染色：是识别细胞形态的重要标记工序： 有核细胞是无色的，经细胞染色后，用光镜见到细胞显色的成分，并 非是细胞原来的面貌。而是细胞经染色后在镜下反映细胞内不同的结构成 分，在一定酸碱溶液中对染料的特殊的亲和性，如胞核的核酸及蛋白质以 及原始细胞的胞浆为酸性物质，与碱性染料美兰作用后，染成蓝色，而碱 性物质如Hb，则被伊红染成红色。血细胞瑞氏-姬姆萨染色的 光镜形态被 看成是血细胞形态学最广泛的基本方法。
2.常规瑞氏-姬姆萨染色要点： （1）要得到满意、漂亮的血细胞染色标本，新鲜涂片迅速染色是很重要的。 （2）染色液配制要合格； （3）涂片切勿用甲醛固定,否则不着色; （4）染色的好坏与染色液、缓冲液的质量及比例、加液间隔时间、保持玻 片染色液面的张力等染色技巧均有重大关系。染液要覆盖涂膜面，再加缓 冲液(1:2)，其量要充足、混匀，染色时间要20分钟以上。
概述: 血细胞及血细胞形态学是临床血液病诊断与治疗及临床医学 检验学的基础工作。血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速 简捷的要求。近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞 遗传学 、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环 境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现， 细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了 血液的临床与实验室的新知识迅猛发展，因而当前血液病不能 单凭临床与形态学作出诊断，必须以临床和血细胞形态学为基 础，把免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用 到血液学中，构成现代临床血液学与分子生物学诊断技术，弥 补形态学的经验性与主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的 诊断与治疗水平。
（一）采样、制片： 1.玻片要求：国内1.0mm×26mm×76mm±0.5，美国NCCLS规定 1.0mm×25mm×76mm±0.5，要严格清洁，接近中性。 2.推片：要选择优质推片，推片两端边缘整齐、平滑。也可选用有机玻 璃，其大小、厚度与玻片相同，两端之边缘应加工光滑，以利推片用。 3.才外周血（样），擦去第一滴血，迅速采血，量适中，如绿豆粒大小， 。 具有一定推片技术，推片倾斜45 ±，推成血膜长度25mm—35mm，宽度 18—20mm，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜 均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇（摇）干，血膜具有头体尾不同 厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液 粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。 4.如若采用静脉血推片，用K3-EDTA或肝素抗凝，推制血片应尽早进行 （最迟在1-2小时内）。
形态学也有其相对的独立性，这就是以标本的取材、涂 片的制备与染色，以及镜检一整套的规律性检查，必须遵循这 一套检查方法的要求，严格进行操作，才能得到满意合格的标 本。严格镜下操作规程，才能达到诊断工作的良好条件，取得 各种数据和参数，否则徒劳无益。 采样、制片及染色三道工序至关重要，是细胞形态学检查 的成败关键。要取得合格的涂片标本，必须做好上述工序，应 注意以下要求：
进入90年代以来，国内外采用多学科联合技术综合诊断如 AL-MIC分（类）型，FAB-CLL诊断分（类）型方案、MIC对 MDS诊断要求，已被广泛采用或正趋于完善。 近年来，血细胞形态学诊断技术正在进入显微图像、血液 病诊断与鉴别诊断、CL诊断与治疗及教学系统多媒体软件等。 还将显微镜与微机相连，应用存储、分类、检索软件、编辑、 打印诊断报告，并可附多幅细胞图像。从软件水平看，国内几 家此类产品尚属探索性，尚不成熟，各有优缺点，有待软件专 业与应用专业人员密切合作，生产出高质量产品。
（5）细胞着色观察：当染色液与缓冲液混合后，液温升高，发生剧烈 反应，直至液膜表面的“染色粒”呈均匀分布，随染色时间的推延， “染 色粒”由 “染色小粒”聚集成 “染色大粒”，逐渐由边缘推进至液面中心 （此过程需要20分钟以上），则表明细胞着色已完成，再用自来水缓流冲 洗，使染色液沉渣及染色粒浮去，使其充分起起分色作用，去除细胞染色 中浮色，显示出胞核结构及细胞清晰形态，待干，镜检．
2.低倍镜观察—观察涂片全貌： （1）涂片染色是否合格，了解全片有核细胞及各系细胞分布状况； （2）观察外周血WBC数（校对直接计数）及各类WBC分布及其比例。 （3）骨髓有核细胞增生度，粒/红及粒红两系各阶段及巨核系细胞数量， 各阶段比例及形态，血小板形成情况，特别在片尾有无异常细胞（转移瘤 细胞、恶组、高雪氏细胞、N-P细胞及海兰组织细胞等）。选择具有代表性 油镜观察区，寻找骨髓造血细胞成分多、分布比例具有代表性、无核细胞 (RBC)不重叠、均匀分布区域，有核细胞才能分布均匀、推开，细胞形态才 易辨认。
（三）光镜检查程序： 1.肉眼观察：涂片厚薄是否适宜（根据贫血程度、白细胞及有核细胞 的多少），涂膜是否合格，未染色涂片涂膜色泽，骨髓小粒及脂肪情况 （灰白粒状多为有核细胞增生明显或白血病；砖红色泽，涂膜面短、厚 （推不开）多为RBC增多症，涂膜稀释或无骨髓小粒，多为取材不佳或增 生不良；如若油珠甚多，多为AA或低增生MDS等），涂片染色好坏，色泽 是否正。