LDH的测定
LDH测定作业指导书
LDH测定1 测定方法酶动力学法。
2 测定原理依据标准化方法的紫外检测方法- 样品和加试剂R1（缓冲液/乳酸）- 加试剂R2（辅酶）和启动反应：LDHL-乳酸＋ NAD+ 丙酮酸＋ NADH ＋ H+LDH 催化L-乳酸向丙酮酸的转换；同时使NAD还原为NADH。
NADH 形成的初速度和直接LDH的催化活力呈比例。
在340nm 检测吸光度的增加。
3 标本请注意：研究显示，使用EDTA 血清会引起LDH活力降低（约10％）。
用标准样品管收集血清。
肝素锂、钠或铵与EDTA 钾、钠的抗凝血浆。
其他的抗凝剂有干扰。
分离的血清或血浆应立即分析。
稳定性：储存在20~25℃，尽可能立即检测。
不可冷藏和冰冻。
在检测前应离心去除沉淀。
4 试剂4.1试剂来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末R1：打开后机上稳定28天R2：打开后机上稳定28天准备：R1， R2：直接使用。
4.2 校准物来源：ROCHE配套校准物,符合WHO标准，具体如下：S1:0.9%NaClS2:C.f.a.s贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备：直接使用。
定标频率：A 试剂盒在仪器上放置28天后 B试剂批号更换后 C 由质控结果决定4.3 质控物来源：Precinorm (罗氏正常值质控)Precipath (罗氏病理值质控)其它适合的质控品贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。
质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5 仪器ROCHE MODULAR P生化分析仪。
6 上机操作见仪器作业指导书。
7 参考范围男性：135-225U/L；女性：135-214U/L。
8 性能指标本法线性范围为5-1000U/L，不准确度允许范围X±20%，不精密度CV=3.3%，本法灵敏度5U/L。
ck、ldh指标
ck、ldh指标全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血清CK（Creatine Kinase）和LDH（Lactate Dehydrogenase）是两种常见的生化指标，常用于评估肌肉和肝脏等组织损伤程度。
它们也可以在心肌梗死、中风、感染和其他疾病中发挥重要作用。
本文将重点介绍这两种指标的作用、测定方法、临床意义及相关疾病的诊断价值。
一、CK指标1. CK是一种细胞内酶，主要存在于肌肉组织、心脏和脑组织中。
当这些组织受损时，细胞膜破裂会释放大量的CK到血液中，导致其浓度升高。
CK水平的检测可以间接反映肌肉和心肌损伤的程度。
2. CK的测定方法主要包括酶法和免疫法两种。
酶法通过检测CK催化底物的催化反应来测定其活性，而免疫法则是通过特定抗体结合CK并产生颜色反应来检测其浓度。
3. 在临床上，CK常被用于评估骨骼肌和心肌损伤的程度。
在急性心肌梗死中，CK的水平会在几小时内显著增加，达到峰值后逐渐降低。
CK可以作为心肌梗死的诊断和疗效监测指标。
4. 一些其他疾病如横纹肌溶解症、中毒和运动损伤等也会导致CK 水平升高。
CK的测定在临床上具有一定的诊断和监测价值。
二、LDH指标1. LDH也是一种细胞内酶，存在于肝脏、心肌、红细胞等组织中。
当细胞受损后，LDH会释放到血液中，导致其浓度升高。
LDH的测定可以反映组织损伤的程度。
2. LDH的测定方法主要包括酶法和免疫法两种，与CK类似。
酶法测定LDH的活性，而免疫法测定LDH的浓度。
3. 在临床上，LDH常被用于评估肝功能和心肌损伤的程度。
在心肌梗死中，LDH的水平也会升高，与CK一起用于心肌梗死的诊断和疗效监测。
4. LDH水平也常用于肝功能评估。
肝脏受损时，LDH会释放到血液中，因此LDH水平的测定可以反映肝脏损伤的程度。
三、总结CK和LDH是两种重要的生化指标，可用于评估肌肉和肝脏等组织的损伤程度。
它们在心肌梗死、中风、感染和其他疾病的诊断和监测中具有重要价值。
NK细胞活性测定：LDH法原理和实验步骤
NK细胞活性测定：LDH法原理和实验步骤一、原理活细胞的胞浆内含有LDH。
正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。
LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞类化合物。
在酶标仪上用490nm比色测定。
二、仪器和材料酶标仪、YAC-1细胞、Hank's液（pH7.2～7.4）、RPMI1640完全培养液、乳酸锂或乳酸钠、硝基氯化四氮唑（INT）、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）、NAD、0.2mol/L的T ris-HCl缓冲液（pH8.2）、1%NP40或2.5%Triton三、实验步骤1、LDH基质液的配制乳酸锂5×10-2mol/L硝基氯化四氮唑（INT） 6.6×10-4mol/L吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS） 2.8×10-4mol/L氧化型辅酶Ⅰ（NAD） 1.3×10-3mol/L将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液中（pH8.2）2、靶细胞的传代（YAC-1细胞）实验前24h将靶细胞进行传代培养。
应用前以Hank's液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个 /mL。
3、脾细胞悬液的制备（效应细胞）无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单细胞悬液。
经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，或用 Hank's液洗2次，每次离心10min（1000r/min）。
弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mLHank’s液，1000rpm，10min离心，用1mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1%冰醋酸稀释后计数（活细胞数应在95%以上），用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上），最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个 /mL。
血清乳酸脱氢酶LDH测定
血清乳酸脱氢酶LDH测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，LDHNADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。
L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或EDTA血浆。
3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸62.5mmol/LTris缓冲液 100mmol/L试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
医院检验科血清乳酸脱氢酶(LDH)速率法测定 血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定方法
血清乳酸脱氢酶（1.DH）速率法测定1.实验原理VITROS1.DH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测1.DH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+0将一滴IOul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：1.DH丙酮酸+NADH÷H+ --------------------------- 乳酸+NAD2.标本：2.1病人准备：无特殊。
2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros1.DH干片对完整血小板内的1.DH不敏感，因此对比方法的1.DH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3.标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5.标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6.试验材料：6.1测试AST所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit3；VitrOS特制质控液；Vitros7(⅛BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18~28℃。
ldh分解温度
ldh分解温度（最新版）目录1.引言：介绍乳酸脱氢酶（LDH）2.LDH 的分解温度3.LDH 分解温度的测定方法4.LDH 分解温度的影响因素5.LDH 分解温度在实际应用中的意义6.结论：总结乳酸脱氢酶分解温度的重要性正文乳酸脱氢酶（LDH）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有将乳酸转化为丙酮酸的功能。
在生物体内，LDH 参与能量代谢过程，对于生物体的生长、发育和生存具有重要意义。
在实际应用中，我们常常需要了解和测定 LDH 的分解温度，以便更好地利用这一酶进行相关研究和生产。
一、LDH 的分解温度乳酸脱氢酶的分解温度是指在特定条件下，酶分子结构发生不可逆破坏的温度。
一般来说，LDH 的分解温度会受到多种因素的影响，如 pH 值、温度、酶浓度、底物浓度等。
对于不同来源的 LDH，其分解温度可能会有所不同。
二、LDH 分解温度的测定方法测定 LDH 分解温度通常采用紫外 - 可见光谱法。
具体操作步骤如下：1.在不同温度下，将 LDH 溶液与底物混合，保持其他条件一致。
2.通过紫外 - 可见光谱仪检测反应过程中的吸光度变化。
3.根据吸光度变化，绘制温度 - 吸光度曲线。
4.通过曲线分析，确定 LDH 的分解温度。
三、LDH 分解温度的影响因素1.pH 值：pH 值对 LDH 的分解温度有显著影响。
在最适 pH 值下，LDH 的分解温度通常较低；而在过酸或过碱的条件下，LDH 的分解温度会升高。
2.温度：温度是影响 LDH 分解温度的直接因素。
一般情况下，随着温度的升高，LDH 的分解温度也会升高。
3.酶浓度：酶浓度对 LDH 分解温度的影响较小。
在较低酶浓度下，LDH 的分解温度可能会略有降低。
4.底物浓度：底物浓度对 LDH 分解温度有一定影响。
当底物浓度较低时，LDH 的分解温度可能会略有上升。
四、LDH 分解温度在实际应用中的意义了解 LDH 的分解温度对于实际应用具有重要意义。
在生产和研究过程中，我们可以通过控制温度、pH 值等条件，使 LDH 在最佳状态下发挥作用，从而提高生产效率和研究成果。
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程(SOP)
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。
二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC 1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。
LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。
由于组织中的LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。
（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。
此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。
300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。
因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。
血清溶血可使测定值增高，应予以注意。
500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。
三、检验原理L-乳酸＋NAD+−−LDH丙酮酸＋NADH＋H+−→NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
组织ldh检测方法
组织ldh检测方法
乳酸脱氢酶同工酶（LDH）检测方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等，但迄今最好的和用得最多的是电泳法。
具体操作如下：
1. 将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
2. 吸去培养液，用PBS液洗涤一次。
换新鲜培养液（推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液），将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔（背景空白对照孔），未经药物处理的对照细胞孔（样品对照孔），未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞孔（药物处理样品孔），并做好标记。
按照实验需要给予适当药物处理（如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，
不同处理时间，对照孔中需加入适当的药物溶剂对照），继续按常规培养。
到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培
养液体积的10%。
加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
3. 到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。
分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
4. 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
混匀，室温（约25℃）避光孵育30min（可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动）。
然后在490nm处测定吸光度。
使用600nm或大于600nm的任一波长作为参考波长进行双波长测定。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
乳酸脱氢酶活力测定实验结果分析
乳酸脱氢酶活力测定实验结果分析
乳酸脱氢酶（LDH）是一种酶类，通常存在于心、肝、脾、肺、肌肉等组织中，也常用于检测心肌梗死、肝脏疾病、肺癌等疾病的确诊。
LDH活力的测定通常是通过采集患者血液样本，使用乳酸脱氢酶试剂盒检测LDH酶活力的浓度。
LDH的正常参考值通常是在140-280 U/L之间，但是要根据实验室标准和不同疾病诊断标准进行具体分析。
如果LDH活力高于正常参考值，则可能提示存在患有相关疾病的可能性。
需要注意的是，LDH活力仅可作为辅助诊断的指标之一，需要综合其他的体征、症状和检测结果进行综合分析，最终做出正确的诊断结论。
因此，如果你收到了LDH活力的实验结果，最好咨询医疗专业人士进行详细解读。
乳酸脱氢酶活力测定
结果异常可能原因及解决方案
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样本问题
样本中可能存在干扰物质，如溶血、高血脂等， 导致结果偏高或偏低。解决方案包括重新采集样 本、使用抗干扰试剂等。
试剂问题
试剂质量不佳、过期或保存不当等可能导致结果 异常。解决方案包括更换试剂、检查试剂有效期 和保存条件等。
操作问题
操作不规范、加样不准确等也可能导致结果异常。 解决方案包括加强操作培训、使用加样器等。
荧光分析法
利用荧光探针与LDH结合产生荧光信号的原理，实现对LDH活力的高灵敏度、高选择性检 测。该方法具有操作简便、快速准确等优点，有望在生物医学领域得到广泛应用。
微流控芯片技术
将LDH活力测定过程集成到微流控芯片中，实现自动化、高通量的检测。该技术可大大提 高检测效率，降低人为误差，为LDH活力测定提供新的解决方案。
05 实验注意事项与安全防护
操作规范和安全防护措施
严格遵守实验室规章制度，确保实验环境整洁、有序。 使用前检查实验器材是否完好，如有破损应及时更换。
穿戴实验服、手套、护目镜等个人防护用品，避免直接 接触化学试剂。
遵循实验操作步骤，避免操作失误导致试剂飞溅或仪器 损坏。
废弃物处理方法和环保要求
废弃物应分类收集，严禁 将不同性质的废弃物混合 处理。
挑战
在实际应用中，乳酸脱氢酶活力测定仍面临 一些挑战，如样本处理复杂、干扰物质多、 仪器设备昂贵等。此外，不同来源和类型的 样本中LDH活力水平可能存在差异，这给准 确测定带来了一定难度。因此，未来需要继 续加强研究，探索更加简便、快速、准确的
LDH活力测定方法。
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VS
加样顺序
在反应体系中依次加入辅酶、底物、待测 样品和缓冲液，混合均匀后立即启动反应 。
乳酸脱氢酶(ldh)测定原理
乳酸脱氢酶(ldh)测定原理Lactate dehydrogenase (LDH) is a crucial enzyme found in the cells of the body, which plays an essential role in energy production. 乳酸脱氢酶（LDH）是人体细胞中的一种关键酶，对能量生产起着至关重要的作用。
This enzyme is responsible for the conversion of lactate to pyruvate, a process that is essential for the production of energy during both aerobic and anaerobic conditions. 这种酶负责将乳酸转化为丙酮酸，这一过程对于有氧和无氧条件下的能量产生都至关重要。
LDH levels in the body can be measured to gain insight into various health conditions. 可以测量体内的LDH水平来了解各种健康状况。
The LDH test is commonly used to diagnose and monitor tissue damage, such as in the case of heart attacks, liver disease, anemia, and cancer. LDH测试常用于诊断和监测组织损伤，比如心脏病发作、肝病、贫血和癌症。
It is also used to monitor the progress of certain treatments and to assess the severity of conditions affecting the heart, liver, or kidneys. 还用于监测某些治疗的进展，并评估影响心脏、肝脏或肾脏的疾病的严重程度。
LDH文档,乳酸脱氢酶测定试剂盒(LDH)检测标准操作规程
1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒（IFCC法）测定方法2、适用范围：适用于人血清或血浆乳酸脱氢酶(LDH)的测定。
3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。
3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃～8℃有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定30天。
试剂不可冰冻。
3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，NADH 的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。
LDH乳酸+ NAD+ + H2O 丙酮酸+ NADH + H+4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆样本，采集后及时测定，应避免溶血和污染。
4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。
4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。
当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。
4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。
4.3.3 测试基本参数4.4参考范围115～220 U/L （注：各实验室应有自己的参考范围。
）4.5 方法评价线性范围：4～1000U/L内。
当样本测定值超过上限时，应将样本用生理盐水稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
精密度：批内变异系数：≤ 3.0%；批间变异系数：≤5.0%。
分析灵敏度：本试剂盒的检测低限不高于4 U/L。
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定
血清乳酸脱氢酶（LDH）速率法测定1. 实验原理VITROS LDH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测LDH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+。
将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：LDH丙酮酸+ NADH + H+———————→乳酸+ NAD2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros LDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6. 试验材料：6.1 测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。
血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及意义
血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及意义
乳酸脱氢酶是体内能量代谢过程中的一个重要的酶。
此酶几乎存在于所有组织中，以肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺和肺中为最多。
这些组织中的LDH的活力比血清中高得多。
所以当少量组织坏死时，该酶即释放血而使其他血液中的活力升高。
测定此酶常用于对心梗、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
1．正常参考值
速率法（LDH-L法）：100～240 U/L
比色法：190～310 U/L
2．临床意义：
①心肌梗塞：心肌梗塞后9～20h开始上升，36～60h达到高峰，持续6～10天恢复正
常（比AST、CK持续时间长），因此可作为急性心肌梗塞后期的辅助诊断指标。
②肝脏疾病：急性肝炎，慢性活动性肝炎，肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸等。
肿瘤转移
所致的胸腹水中LDH往往也升高。
③血液病：如白血病、贫血、恶性淋巴瘤等，LDH升高。
④骨骼肌损伤、进行性肌萎缩、肺梗塞等。
⑤恶性肿瘤转移所致胸、腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
⑥正常新生儿LDH水平很高，可达775～2000U/L，满月后为180～430 U/L，以后随
年龄增长逐渐降低，12岁后趋于恒定。
由于测定LD的特异性较差，目前临床上多同时测定乳酸脱氢酶同工酶来判断其组织来源，用于心肌梗塞、肿瘤、肝病等的诊断。
ldh细胞毒性检测原理
ldh细胞毒性检测原理
LDH细胞毒性检测是一种常用的细胞毒性评价方法，其原理基于乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）在细胞损伤时释放到培养上清液中。
LDH是一种催化乳酸转化为丙酮酸的酶，在正常情况下主要存在于细胞内。
当细胞发生损伤或坏死时，LDH被释放到外界环境中。
因此，通过测定培养上清液中的LDH水平，可以间接反映细胞损伤程度。
LDH细胞毒性检测的具体步骤如下：
1. 给予细胞不同浓度的试剂处理，例如药物、化合物等。
2. 处理一段时间后，将培养上清液收集并离心，得到上清液。
3. 使用LDH试剂盒，按照说明书的步骤将上清液与试剂进行反应。
4. 将反应混合物置于检测设备中，通过测定OD值或荧光信号的强度，可以得到LDH的活性或浓度。
5. 将测定结果与对照组进行比较，可以评估细胞毒性的程度。
LDH细胞毒性检测的优点在于操作简便，结果可靠，常用于评估药物、化合物对细胞的毒性影响。
然而，需要注意的是LDH的释放并不一定代表细胞的坏死，因为在一些情况下，LDH也可能通过非坏死途径释放，如胞吞作用、葡萄糖缺乏等。
因此，综合分析LDH释放的动力学变化和其他细胞毒性指标，可以更全面地评估细胞的毒性情况。
生化实验报告血乳酸(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过生化方法测定血乳酸浓度，了解机体代谢状态，为临床诊断提供参考。
二、实验原理乳酸脱氢酶（LDH）是一种糖酵解酶，广泛存在于机体所有组织细胞的胞质内。
在缺氧或无氧条件下，乳酸脱氢酶催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，生成乳酸和NADH。
通过测定血中乳酸的浓度，可以反映机体代谢状况和缺氧程度。
三、实验材料1. 标本：静脉血5ml2. 试剂：乳酸测定试剂盒（包括乳酸脱氢酶、NADH、NAD+、缓冲液等）3. 仪器：全自动生化分析仪、恒温水浴箱、移液器、试管等四、实验方法1. 取静脉血5ml，加入含有抗凝剂的试管中，混匀。
2. 按照试剂盒说明书进行操作，将血样加入反应管中，加入乳酸测定试剂盒中的其他试剂，充分混匀。
3. 将反应管放入恒温水浴箱中，在37℃下孵育一定时间。
4. 取出反应管，用全自动生化分析仪测定血乳酸浓度。
五、实验结果本次实验测定血乳酸浓度为2.5mmol/L。
六、结果分析1. 正常人血乳酸浓度为1.0-2.5mmol/L，本次实验结果在正常范围内。
2. 血乳酸浓度升高可能见于以下情况：- 缺氧：如慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭等；- 营养不良：如糖尿病、蛋白质营养不良等；- 药物作用：如某些抗生素、抗癫痫药物等；- 先天性代谢缺陷：如乳酸酸中毒等。
七、讨论1. 本实验通过测定血乳酸浓度，可以初步了解机体代谢状态和缺氧程度。
但在实际临床应用中，需要结合患者的病史、症状、体征和其他检查结果进行综合判断。
2. 影响血乳酸浓度的因素较多，如药物、饮食、运动等，因此在实验过程中应严格控制实验条件，确保实验结果的准确性。
3. 血乳酸检测作为一种无创、简便、快速的方法，在临床诊断中具有广泛的应用前景。
八、结论本次实验成功测定了血乳酸浓度，为临床诊断提供了参考。
在今后的工作中，我们将进一步研究血乳酸检测在临床诊断中的应用价值。
九、注意事项1. 实验操作过程中，应严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性。
LDH乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验方法
LDH乳酸脱氢酶细胞毒性检测之阳早格格创做LDH释搁检测要领：a. 根据细胞的大小战死少速度将适量细胞交种到96孔细胞培植板中，使待检测时细胞稀度没有超出80-90%谦.b. 吸来培植液，用PBS液洗涤一次.换新陈培植液(推荐使用含1%血浑的矮血浑培植液或者适合的无血浑培植液)，将各培植孔分成如下几组：包罗无细胞的培植液孔(背景空黑对于照孔)，已经药物处理的对于照细胞孔(样品对于照孔)，已经药物处理的用于后绝裂解的细胞孔(样品最大酶活性对于照孔)，以及药物处理的细胞孔(药物处理样品孔)，并干佳标记表记标帜.依照真验需要赋予适合药物处理(如加进0-10μl安排特定的药物刺激，可树立分歧浓度，分歧处理时间，对于照孔中需加进适合的药物溶剂对于照)，继承按惯例培植.到预约的检测时间面前1小时，从细胞培植箱里与出细胞培植板，正在“样品最大酶活性对于照孔”中加进试剂盒提供的LDH释搁试剂，加进量为本有培植液体积的10%.加进LDH释搁试剂后，反复吹挨数次混匀，而后继承正在细胞培植箱中孵育.c. 到达预约时间后，将细胞培植板用多孔板离心机400g离心5min.分别与各孔的上浑液120μl，加进到一新的96孔板相映孔中，随即举止样品测定.准备处事：a. INT溶液(1X)的晃设：根据所需的INT溶液(1X)的量，与适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X.比圆，与20μl INT溶液(10X)，加进180μl INT稀释液，混匀后即晃设为200μl INT溶液(1X).INT溶液(1X)宜现配现用，晃设后4℃保存可于当天使用，没有宜晃设后冻存.b. LDH检测处事液的配造: 根据待测定的样品数(含对于照)，参照下表正在临检测前新陈配造适量的检测处事液.注意：LDH检测处事液必须现配现用，配造战使用历程中均要注意适合躲光.样品测定:a. 各孔分别加进60μl LDH检测处事液.b. 混匀，室温(约25℃) 躲光孵育30min(可用铝箔包裹后置于火仄摇床或者侧晃摇床上缓缓摇动).而后正在490nm处测定吸光度.使用600nm或者大于600nm的任一波少动做参照波少举止单波少测定.c. 估计(测得的各组吸光度均应减来背景空黑对于照孔吸光度)细胞毒性或者牺牲率(%)=(处理样品吸光度－样品对于照孔吸光度) / (细胞最大酶活性的吸光度－样品对于照孔吸光度)×100d. 可画造细胞毒性直线：纵座标为本质吸光度，横坐标为药物浓度；据此可估计该药物效率特定时间的半致死剂量LD50.。
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2，酶活性的测定
加入物(ml) 加入物(ml) 测定管 对照管 血清 0.01 0.01 NAD＋ NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5 37度水浴 37度水浴5min 度水浴5min NAD＋ NAD＋溶液 0.1 － 37度水浴 度水浴15min 37度水浴15min 2,4二硝基苯肼 2,4二硝基苯肼 0.5 0.5 NAD＋ NAD＋溶液 － 0.1 37度水浴15分钟 37度水浴15分钟 度水浴15 0.4mol/L溶液 0.4mol/L溶液 5.0 5.0 混匀，室温放置5min 5min后 440nm波长处比色 比色杯光径为1.0cm 波长处比色， 1.0cm， 混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm， 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查 校正曲线，得酶活性。 校正曲线，得酶活性。 单位定义： 100ml血清 37度 作用底物15min 产生1umol 血清， 15min， 1umol丙酮酸为 单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为 一个金氏单位。 一个金氏单位。
乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋ ＋（正向L 乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋H＋（正向L-P，逆 向P－L）。 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2，4二硝 基苯肼作用生成丙酮酸－二硝基苯腙，后者在酸性环境中 呈草黄色，在碱性溶液中显棕红色，颜色的深浅与丙酮酸 的浓度成正比，与标准浓度的丙酮酸生成的苯腙进行比色， 可推算LDH的活力。 可推算LDH的活力。 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 位，
参考范围：190-437金氏单位 参考范围：190-437金氏单位 注意事项： 1．乳酸锂、乳酸钾、乳酸钠都可以作为LD的底物，但后两种为水溶 ．乳酸锂、乳酸钾、乳酸钠都可以作为LD的底物，但后两种为水溶 液，若保存不当容易产生酮酸类物质从而抑制酶促反应，且含量不够 准确，目前少用，而乳酸锂为固体，稳定，易称重。 2．除用二乙醇胺缓液外，还可用TRIS或焦磷酸缓冲液。而甘氨酸对 ．除用二乙醇胺缓液外，还可用TRIS或焦磷酸缓冲液。而甘氨酸对 LD有抑制作用，故不采用甘氨酸缓冲液。 LD有抑制作用，故不采用甘氨酸缓冲液。 3．标本严禁溶血，也不采用草酸盐，EDTA抗凝血浆。由于LD4， ．标本严禁溶血，也不采用草酸盐，EDTA抗凝血浆。由于LD4， LD5对冷不稳定，不应贮存于冰箱中，血清标本室温可存放2 LD5对冷不稳定，不应贮存于冰箱中，血清标本室温可存放2-3天。 4．比色应在5-15分钟内完成，否则吸光度值会降低。 ．比色应在5 15分钟内完成，否则吸光度值会降低。 评价： LD活性测定多采用乳酸生成丙酮酸的反应方向，但反应开始的转化 LD活性测定多采用乳酸生成丙酮酸的反应方向，但反应开始的转化 速率是不成线性的，反应速率与温度有关，温度越高，速度越快。以 丙酮酸作为底物：乳酸脱氢酶是一种氧化还原酶，其辅酶为NAD＋， 概述：乳酸脱氢酶是一种氧化还原酶，其辅酶为NAD＋， 为糖酵解的关键酶，广泛分布于人体及动物的各种组织内。 人体以肾、心及骨骼最为丰富，其次是肝、脾、胰及肺组 织内较多。红细胞中LDH较血清高100倍，溶血标本不宜 织内较多。红细胞中LDH较血清高100倍，溶血标本不宜 测定LDH。 测定LDH。 它以辅酶1 它以辅酶1为辅酶，催化乳酸和丙酮酸之间的可逆性氧化 还原反应。反应的平衡点明显地倾向乳酸的生成，即倾向 于丙酮酸的还原，此时的最适PH为7.4-7.8，只需较低浓度 于丙酮酸的还原，此时的最适PH为7.4-7.8，只需较低浓度 的底物，（1.2mmol/L丙酮酸，0.15mmol/L的NADH）， 的底物，（1.2mmol/L丙酮酸，0.15mmol/L的NADH）， 即至最适反应浓度，而进行乳酸氧化反应时，最适PH为 即至最适反应浓度，而进行乳酸氧化反应时，最适PH为 8.8-9.8，因碱性条件可不断移去反应生成的H 8.8-9.8，因碱性条件可不断移去反应生成的H＋，以利反 应NADH方向进行。并且此时底物浓度需加大至30倍以上， NADH方向进行。并且此时底物浓度需加大至30倍以上， （50mmol/L乳酸，5mmol/LNAD＋）才至最适浓度。 50mmol/L乳酸，5mmol/LNAD＋）才至最适浓度。 LDH只 LDH只L-A型羟酸有作用，但对D构型的底物无效，LDH 型羟酸有作用，但对D构型的底物无效，LDH 由四个亚基组成，M 由四个亚基组成，M和H两类亚基可聚合成纯四聚体或杂 四聚体，形成5种同工酶。LDH受重金属、EDTA和草酸 四聚体，形成5种同工酶。LDH受重金属、EDTA和草酸 盐的抑制，故EDTA或草酸抗凝血浆也不宜作LDH测定。 盐的抑制，故EDTA或草酸抗凝血浆也不宜作LDH测定。 过量的丙酮酸或乳酸也可抑制LDH，尤对B 过量的丙酮酸或乳酸也可抑制LDH，尤对B亚基的抑制更 明显。
操作步骤： 1，校正曲线的制作 按表操作 加入物(ml) 加入物(ml) B 1 2 3 4 丙酮酸标准液 0 0.025 0.05 0.1 0.15 底物缓冲液 0.5 0.475 0.45 0.4 0.35
5 0.2 0.3
去离子水 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 37度水浴15分钟 37度水浴15分钟 NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 相当于金氏单位0 相当于金氏单位0 125 250 500 750 1000 室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为 室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为 1.0cm，用B 1.0cm，用B管调零，读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐 标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。