实验八 血球计数板的使用

四、实验内容与操作步骤
(一)血球计数板的使用 一
1. 计数样品制备：按无菌操作要求，用1mL无菌吸管自稀释 倍的酵母菌 计数样品制备：按无菌操作要求， 无菌吸管自稀释10倍的酵母菌 无菌吸管自稀释 培养液试管中吸取菌液1mL移人 移人9mL无菌水中，充分混匀，即得稀释 无菌水中， 培养液试管中吸取菌液 移人 无菌水中 充分混匀， 100倍的计数样品。原则以每个小格菌数为 倍的计数样品。 个为宜来记数进行稀释。 倍的计数样品 原则以每个小格菌数为5-10个为宜来记数进行稀释。 个为宜来记数进行稀释 2. 清洗计数板：将血球计数板及专用的厚盖玻片用药棉沾取 ％酒精轻轻 清洗计数板：将血球计数板及专用的厚盖玻片用药棉沾取95％ 擦洗，然后用自来水冲洗，再让其自然晾干或吸水纸吸干。 擦洗，然后用自来水冲洗，再让其自然晾干或吸水纸吸干。 3. 滴加菌液：将盖玻片盖在计数板的方格网上，用无菌吸管 或无菌玻棒 滴加菌液：将盖玻片盖在计数板的方格网上，用无菌吸管(或无菌玻棒 或无菌玻棒) 吸取少许稀释100倍的酵母菌液，从盖玻片的一端注入，使菌液沿二玻 倍的酵母菌液， 吸取少许稀释 倍的酵母菌液 从盖玻片的一端注入， 片间渗入，勿使菌液流到盖玻片或两边平台上， 片间渗入，勿使菌液流到盖玻片或两边平台上，多余的菌液则用吸水纸 吸去。 吸去。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
五、思考题
1．计算每毫升(每克 所测样品的含菌数 ．计算每毫升 每克 所测样品的含菌数? 每克)所测样品的含菌数 2．用血球计数板测定微生物细胞数量有何 ． 优缺点?
中格
25X16规格 规格
一个中格的小格
在进行观察计数 时，由于菌体在血球 计数板上处于不同的 空间位置， 空间位置，要在不同 的焦距下才能看到。 的焦距下才能看到。 所以观察时必须不断 调节微调螺旋方能数 到全部菌体， 到全部菌体，防止遗 漏。如菌体位于小格 的线上， 的线上，计数时则数 上线不数下线， 上线不数下线，数左 线不数右线，这样做， 线不数右线，这样做， 即可减少误差。 即可减少误差。酵母 菌的芽体细胞达到母 细胞大小一半时， 细胞大小一半时，即 可作为两个菌体计算， 可作为两个菌体计算， 每个样品应重复计数2每个样品应重复计数 3次(每次数值差数不应 次 每次数值差数不应 过大，否则应重测)再 过大，否则应重测 再 取其平均值。 取其平均值。
4. 测定菌数：静置几分钟后，先置低倍镜下观察，找到中央平台上 测定菌数：静置几分钟后，先置低倍镜下观察， 的小方格网后，转换高倍镜进行计数。计数时，如用16× 规格 的小方格网后，转换高倍镜进行计数。计数时，如用 ×25规格 的计数板，则取左上，右上，左下，右下四种格(共 个小格)的 的计数板，则取左上，右上，左下，右下四种格 共100个小格 的 个小格 酵母菌数；如用25× 规格的计数板 则除了取左上，右上， 规格的计数板， 酵母菌数；如用 ×16规格的计数板，则除了取左上，右上，左 右下四个中格外，还需加数中央的一个中格(共 个小格 个小格)的 下，右下四个中格外，还需加数中央的一个中格 共80个小格 的 酵母菌。在分别求出100个小格或 个小格的酵母菌平均菌数后， 个小格或80个小格的酵母菌平均菌数后 酵母菌。在分别求出 个小格或 个小格的酵母菌平均菌数后， 按下式计算： 按下式计算： 每毫升菌液的菌数=每小格平均菌数× 每毫升菌液的菌数 每小格平均菌数×4000×1000×稀释倍数 每小格平均菌数 × ×
实验八 实验八 血球计数板的使用及运用
一、目的与要求
了解血球计数板的构造， 了解血球计数板的构造，学习使用血球 计数板进行微生物计数的方法。 计数板进行微生物计数的方法。
放大后方格网计数室
二、实验原理
平台 正面图 XB-k-25 XB-k-16
， 面积1mm2，400个小方格， 个小方格， 面积 个小方格
5 .清洗：计数完毕后，血球计数 清洗： 清洗 计数完毕后， 板直接用水冲洗， 板直接用水冲洗，然后吸干或晾 最后用擦镜纸包好收藏， 干，最后用擦镜纸包好收藏，注 意不得用粗糙物品擦抹中央平板， 意不得用粗糙物品擦抹中央平板， 以免损坏小格刻度。 以免损坏小格刻度。
(二) 配制下次用培养基 二
1.明胶液化培养基（试管柱体） : 28支/班 明胶液化培养基（试管柱体） 明胶液化培养基 支班 2.糖发酵培养基 每种糖28支/班 ,乳糖 2.糖发酵培养基: 每种糖28支/班 ,乳糖/葡 糖发酵培养基: 乳糖/葡 萄糖发酵液, 萄糖发酵液 9mL/支 支 3.淀粉培养基 三角瓶装 500mL /班 淀粉培养基(三角瓶装 淀粉培养基 三角瓶装): 班
放大后的图形为
正切面图
中格
小格
16X25规格， 规格， 规格 XB-k-16
25X16规格， 规格， 规格 XB-k-25
三、需用的仪器或试剂
器材：血球计数板 含特制的盖玻片 显微镜、 含特制的盖玻片)、 器材：血球计数板(含特制的盖玻片 、显微镜、 玻棒、吸水纸、擦镜纸、 无菌吸管。 玻棒、吸水纸、擦镜纸、1mL无菌吸管。 无菌吸管 菌种：稀释10倍的酵母菌培养液 倍的酵母菌培养液， 菌种：稀释 倍的酵母菌培养液，果酒发酵 醪液。 醪液。