HCV核心抗原检测(ELISA法)

1. 检验目的与原理
1.1 检验目的
规范丙型肝炎病毒核心抗原检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

可用于临床辅助诊断是否感染丙型肝炎病毒。

1.2 检验原理
应用ELISA法原理检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原，用2株丙型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体包被酶标板，另2株丙型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体标记辣根过氧化物酶，加入TMB显色液后显色，用来检测血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原。

1.3 分析参数
样品量100μL
试剂量100μL
方法ELISA
反应时间90分钟
反应温度37℃
2. 样本收集和贮存
2.1 原始样本系统
血清（包括SST管）和血浆（EDTA-K2、肝素锂、肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1、CP2D、CPD、草酸钾），尿液（晨尿、随时尿、24小时尿等）或其它体液（羊水等）使用玻璃管或塑料管分离样本，无黄疸、无溶血、无脂血，已分离出的样本应立即分析。

2.2 试管及填充物类型
血清样本需用标准试管或有分离胶的真空管，收集3ml血液。

待血液凝固后3500rpm 离心5分钟，分离血清。

2.3 保存条件及时间
2.3.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。

离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。

2.3.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定5d，在-20℃最多可保存4周。

避免反复冻融。

不可使用热灭活的标本。

2.3.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。

3. 试剂
3.1 试剂成分
丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（酶联免疫法），湖南康润药业有限公司，国药准字
3401179。

试剂盒组分：1. 抗HCV-cAg单克隆抗体包被酶标板；
2.抗HCV-cAg酶标记抗体工作液；
3. HCV-cAg阳性对照；
4. HCV-cAg阴性对照；
5.浓缩洗涤液；
6.TMB显色液A；
7.TMB显色液B；
8.终止液；
9.附件：自封袋、封板模和产品说明书。

3.2 试剂准备
试验前提前将所需的试剂盒从贮藏冰箱领出，室温平衡30分钟。

3.3 试剂贮藏要求（Storage Instruction）
未打开的试剂盒保存于2-8℃，效期12个月。

不可冻存。

4. 仪器
TECAN酶免工作站。

5. 校准
见TECAN酶免工作站SOP。

6. 操作步骤
6.1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

6.2加样：将微孔条固定于支架，按序编号。

每次检测均需设置阴性对照、阳
性对照和空白对照各2孔。

空白对照孔直接加入样品稀释液200微升，其余每孔加样品稀释液100微升，分别在相应孔加入待测样品、阴性对照和阳性对照各100ul。

6.3温育：充分混匀，封板，置37°C孵育60分钟。

6.4洗板：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

6.5加酶：每孔加入酶结合物200ul。

6.7 温育：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。

6.8 洗涤：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

6.9 显色：每孔加入显色剂A、B各50μl，轻轻振荡混匀，37℃避光显色10分钟。

6.10 测定：每孔加终止液50μl，轻轻振荡混匀，用酶标仪读值，在双波长
450nm/630nm（单波长检测以空白对照调零）下读取各孔A值。

7. 质量控制
无
8. 检验结果报告
8.1 结果计算
CUT OFF值=阴性对照孔A值+0.06。

（阴性对照A值大于0.1和阳性对照A值小于0.6时应重新试验，阴性对照A值≤0.06时以0.06计算。

）
待测样品A值＜CUT OFF值时，判为阴性。

待测样品A值≥CUT OFF值时，判为阳性。

8.2 结果审核
由资深专业人员负责检验结果的审核。

确认反应板结果的有效性及室内质控在控。

确认反应板反应外观与判读的结果一致，核对判断的阴阳性结果个数。

审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签字。

审核与其他标志物等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。

对弱阳性标本再重复试验确定它的结果。

如果重复检测都是弱阳性结果的标本建议对其进行跟踪检测。

8.3 报告传输及打印
结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

报告单上标明结果的参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的信息。

如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

8.4 测量不确定度的评定方法见《免疫激素测量不确定度的评估报告》。

9．参考范围
阴性，提示没有检测到丙型肝炎病毒核心抗原。

10. 可报告区间
阴性～阳性。

11. 危急值报告
不适用。

12. 方法的局限性
12.1 本试剂仅用于定性检测人血清或血浆样品中的HCV游离核心抗原。

12.2 由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测结果阴性并不排除HCV感染的可能，检测结果阳性必须结合确诊试剂或其他指标和临床信息进行分析。

13．临床意义
HCV-cAg为HCV的早期感染的标志，几乎与HCV-RNA同时出现，感染后的14-70d 为HCV-cAg的检测时段
14. 安全防范措施
本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

14.1在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。

14.2使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。

使用后请彻底洗手清洁。

14.3用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；患者样本及其他潜在感染材料试验后应放
入医用垃圾桶内。

14.4试剂含有叠氮钠作为防腐剂，叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物。

为防止金属叠氮化合物的形成，应用大量的水冲洗以免其堆积。

14.5使用过的器具、废液、废物等除用次氯酸钠（有效氯浓度1,000ppm，浸泡1小时以上），戊二醛（2%，浸泡1小时以上）进行消毒以外，还要进行高压蒸汽灭菌（121℃ 1小时以上）及焚烧等处理。

14.6为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；
14.7样本溢出，用吸水纸将溢出的标本吸干，并喷洒1000mg/L消毒液于表面保持
30-60分钟后再用抹布擦拭，最后用清水擦净。

将用过的抹布放入1000mg/L的消
毒液中浸泡2小时。

15. 性能参数
15.1 精密度
15.2 分析灵敏度及分析特异性
试剂盒内带有的阳性对照血清按规定进行试验时，抗体效价相对于标准值在±1管以内。

15.3 准确度
15.4 特异性和灵敏度
15.5 分析测量范围
15.6 临床可报告范围
15.7 携带污染率
不适用。

15.8 干扰物质
15.8.1 样品中如果存在红细胞等其他有型成分，会给反应带来不便，所以应在离心出去之后
在进行检查。

15.8.2 血清样品即使钝化也不会影响检查结果。

16. 参考文献
试剂使用说明书。