微生物学实验指导MICROBIOLOGYEXPERIMENT微生物学实验指导微生物学实验
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2．升温
接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至 100℃时，关闭排气孔。调节温度控制器旋钮，直至箱内温度达到所需要温度（ 160～170℃）位置会自动控制调节温度，保持此温度 2h。注意不可再拨动调节旋钮和通气孔 。
4．降温
切断电源、自然降温。
干热灭菌的原理
• 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固 变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与 其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细 胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水 量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热 灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～ 2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器 皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭 消毒液中浸泡24小时然后洗 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗
培养皿的包扎： 牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5～8套培养皿包成1包
吸管的包扎： 1 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用
三、实 验 器 材
玻璃仪器： Ａ每人: 培养皿 4套； 大试管 4只。 Ｂ每组：三角瓶 5只； 烧杯（500ml）1只； 烧杯（1000ml）1只； 中试管 7只； 吸管（ 0.5ml 3支，5ml 2支）共5支
洗涤用品： 去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。
包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。
四、实验步骤
• 掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干 热灭菌的操作过程。
二、实验原理
• 微生物学实验要求较高的无菌状态，因此， 实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭 菌从而用以培养微生物，所以对其质量、 规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。清 洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决 条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。 空的玻璃器皿一般用干热灭菌.
微生物学实验
• 实验目的 • 实验要求 • 实验内容和安排 • 考核方案
实验内容和安排：
1 微生物实验常用玻璃仪器洗涤及干热灭菌（3学时） 2 培养基的制备和灭菌（4） 3 环境和人体微生物的检验及无菌操作技术（3） 4 微生物菌落的观察（3） 5 显微镜的使用和细菌的运动性观察（3） 6 细菌的单染色和革兰氏染色（3） 7微生物的显微镜计数与酵母菌的死活鉴别染色（3） 8微生物细胞大小的测定（3） 9水中大肠菌群数量的测定 （3） 10 牛奶酸败与乳酸饮料发酵（4）
带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再 洗涤 （2洗）净玻后璃的吸试管管：倒吸置管于尖试端管对筐着内水，流三，角反瓶复倒冲置洗于洗涤架上，培养 入皿盛的有皿吸自 底过来 和血水 皿液的 盖、容 分血器开清中，、浸依糖泡次溶，压液实着或验皿染后边料集排溶中列液冲倒等洗扣的。在玻桌璃上吸,管晾：干立. 即投
玻璃器皿的洗涤方法:
1、新玻璃器皿的洗涤 在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。
2、旧玻璃器皿的洗涤 （1）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
洗涤装后有，固若体内培壁养的基水：均刮匀掉分，布洗成涤一薄层，表示完全洗净，若还 挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。
脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎 将菌液吸出管外。
2 4～5 cm宽的长纸条.
试管和三角瓶等的包扎
程序Ⅱ（干热灭菌）
1．装入待灭菌物品
将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。注意 物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装 纸烤焦起火。
（一） 仪器的认识、清洗与包扎
1、学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围：
①培养皿； ②试管； ③三角瓶； ④烧杯； ⑤吸管； ⑥量筒。
2、学习玻璃器皿的洗涤方法： 3、学习各种器皿的包扎：
• 由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿 底直径90 mm，高15 mm，皿底皿盖 均为玻璃制成。
• 制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌 种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体 的效价等。
根据其大小和用途不同，有下列三种型号：
• (1)大试管(约18mm×180mm) : 可装倒平板用的培养基; 可作制备斜面用（需要大量菌体时用）
装液体培养基用于微生物的振荡培养。 • (2)中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]:
装液体培养基培养细菌或做斜面用, 用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 • (3)小试管[(10～12)mm×100mm]:
一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料 的试验。
• 三角瓶:
100mL、250mL、500mL和1000 mL 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等.
• 烧杯:
50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用来配制培养基与各种溶液等。
• 玻璃吸管: 0.2mL、0.5mL、 1mL、 5mL、10mL
考核方案
1、评定成绩坚持公正、真实、科学的原则。 2、实验成绩：实验报告成绩占70% 。
实验考勤占30％。
3、旷课达1/3的或故意损环仪器者判为不及格。
实验一 微生物学实验常用仪器洗涤及 干热灭菌
• 目的要求 • 实验原理 • 实验材料 • 实验程序 • 结果与思考题
一、目 的 要 求
• 认识微生物实验所需要的各种器皿，了 解常用工具和仪器的名称、用途。
5．开箱取物
待电烘箱内温度降到60℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。同时，将温 度调节旋钮调到零点，并打开通气孔。
结果与思考题
1、简述玻璃器皿洗涤的基本要求。 2、简述干热灭菌的操作步骤。
接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至 100℃时，关闭排气孔。调节温度控制器旋钮，直至箱内温度达到所需要温度（ 160～170℃）位置会自动控制调节温度，保持此温度 2h。注意不可再拨动调节旋钮和通气孔 。
4．降温
切断电源、自然降温。
干热灭菌的原理
• 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固 变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与 其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细 胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水 量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热 灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～ 2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器 皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭 消毒液中浸泡24小时然后洗 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗
培养皿的包扎： 牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5～8套培养皿包成1包
吸管的包扎： 1 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用
三、实 验 器 材
玻璃仪器： Ａ每人: 培养皿 4套； 大试管 4只。 Ｂ每组：三角瓶 5只； 烧杯（500ml）1只； 烧杯（1000ml）1只； 中试管 7只； 吸管（ 0.5ml 3支，5ml 2支）共5支
洗涤用品： 去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。
包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。
四、实验步骤
• 掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干 热灭菌的操作过程。
二、实验原理
• 微生物学实验要求较高的无菌状态，因此， 实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭 菌从而用以培养微生物，所以对其质量、 规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。清 洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决 条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。 空的玻璃器皿一般用干热灭菌.
微生物学实验
• 实验目的 • 实验要求 • 实验内容和安排 • 考核方案
实验内容和安排：
1 微生物实验常用玻璃仪器洗涤及干热灭菌（3学时） 2 培养基的制备和灭菌（4） 3 环境和人体微生物的检验及无菌操作技术（3） 4 微生物菌落的观察（3） 5 显微镜的使用和细菌的运动性观察（3） 6 细菌的单染色和革兰氏染色（3） 7微生物的显微镜计数与酵母菌的死活鉴别染色（3） 8微生物细胞大小的测定（3） 9水中大肠菌群数量的测定 （3） 10 牛奶酸败与乳酸饮料发酵（4）
带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再 洗涤 （2洗）净玻后璃的吸试管管：倒吸置管于尖试端管对筐着内水，流三，角反瓶复倒冲置洗于洗涤架上，培养 入皿盛的有皿吸自 底过来 和血水 皿液的 盖、容 分血器开清中，、浸依糖泡次溶，压液实着或验皿染后边料集排溶中列液冲倒等洗扣的。在玻桌璃上吸,管晾：干立. 即投
玻璃器皿的洗涤方法:
1、新玻璃器皿的洗涤 在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。
2、旧玻璃器皿的洗涤 （1）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
洗涤装后有，固若体内培壁养的基水：均刮匀掉分，布洗成涤一薄层，表示完全洗净，若还 挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。
脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎 将菌液吸出管外。
2 4～5 cm宽的长纸条.
试管和三角瓶等的包扎
程序Ⅱ（干热灭菌）
1．装入待灭菌物品
将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。注意 物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装 纸烤焦起火。
（一） 仪器的认识、清洗与包扎
1、学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围：
①培养皿； ②试管； ③三角瓶； ④烧杯； ⑤吸管； ⑥量筒。
2、学习玻璃器皿的洗涤方法： 3、学习各种器皿的包扎：
• 由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿 底直径90 mm，高15 mm，皿底皿盖 均为玻璃制成。
• 制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌 种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体 的效价等。
根据其大小和用途不同，有下列三种型号：
• (1)大试管(约18mm×180mm) : 可装倒平板用的培养基; 可作制备斜面用（需要大量菌体时用）
装液体培养基用于微生物的振荡培养。 • (2)中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]:
装液体培养基培养细菌或做斜面用, 用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 • (3)小试管[(10～12)mm×100mm]:
一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料 的试验。
• 三角瓶:
100mL、250mL、500mL和1000 mL 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等.
• 烧杯:
50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用来配制培养基与各种溶液等。
• 玻璃吸管: 0.2mL、0.5mL、 1mL、 5mL、10mL
考核方案
1、评定成绩坚持公正、真实、科学的原则。 2、实验成绩：实验报告成绩占70% 。
实验考勤占30％。
3、旷课达1/3的或故意损环仪器者判为不及格。
实验一 微生物学实验常用仪器洗涤及 干热灭菌
• 目的要求 • 实验原理 • 实验材料 • 实验程序 • 结果与思考题
一、目 的 要 求
• 认识微生物实验所需要的各种器皿，了 解常用工具和仪器的名称、用途。
5．开箱取物
待电烘箱内温度降到60℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。同时，将温 度调节旋钮调到零点，并打开通气孔。
结果与思考题
1、简述玻璃器皿洗涤的基本要求。 2、简述干热灭菌的操作步骤。