生姜离体脱毒快繁培养研究
脱毒生姜种植技术脱毒生姜是什么
脱毒生姜种植技术脱毒生姜是什么 脱毒生姜是利用生物技术，即热处理与茎尖培养相结合获得脱毒姜试管苗，在防虫网室内栽植，加强土肥水管理，秋后收获得到原原种，来年种植获得原种，再种一年即为生产种，生产种进行高产栽培。生姜脱毒后，恢复其优良性状，实现脱毒化栽培，可改善生姜品质，降低发病率，提高生姜的商品性和经济效益。在此，小编就给大家讲一讲脱毒生姜种植技术。 一、营养生长健壮。地上茎较普通姜高且粗，分枝数增多，单株平均增加地上分枝3―5个，叶面积系数增加0.3―1.2。 二、单位面积产量提高，增殖系数增大。生姜脱毒后其经济产量、生物产量均提高30％-50％，高产示范田块平均亩产鲜姜达5720公斤。脱毒姜的增殖系数(产量与用种量之比)为10―12，普通姜增殖系数为8―10。 三、品质改善，抗逆性增强。生姜脱毒后，单株重增加，姜块增大，皮色光亮，营养充实，商品性好，市场占有率高，竞争力强，抗逆性增强，田间发病率降低。 四、精细整地，配方施肥。选择土质肥沃，水浇条件好，无姜瘟病的地块，结合整地，每亩撒施优质腐熟鸡粪3～4立方米，或优质栏肥4000公斤做基肥。在高肥水地块按60～65厘米行距开沟备播，每亩沟施豆饼lOO公斤，复合肥150公斤，锌肥2公斤，硼肥l公斤做种肥。 五、精心选种，适期早播。播种前30天左右(地膜生姜在“惊蛰”前后)，从井窖内取出脱毒种姜，冲去泥土，晾晒1～2天，选择块大、皮色好的姜块做种催芽，每亩用种300公斤左右。以火炕催芽法为主。姜种堆放高度不超过80厘米，催芽温度要控制在21～25℃。地膜覆盖生姜的最佳播种期在4月初(“清明”前后)。盖膜前应用除草剂兑水喷施，防膜下杂草。适当稀植可提高单株产量，促使姜块大而整齐。高产地块行距60―65厘米，株距20厘米，亩栽5500株左右；中肥水地块行距60厘米，株距18厘米，亩栽5500―6000株。 六、科学管理，促进生长。播种后20天快出姜苗时采用遮阳网遮荫，宜于田问管理，且姜苗长势旺，亩增产15％以上。6月下旬至7月上旬幼苗期适当追肥，亩施尿素25公斤。“立秋”前后姜苗生长速度加快，为了满足其迅速生长的需要，期间撤去遮阳网，揭掉地膜进行追肥。此期需肥量大且养分要全面，一般亩施复合肥lOO公斤，钾肥50公斤。追肥于距植株基部约15厘米左右的沟中，后覆土封沟培垄，最后浇透水。9月上旬以后，植株地上部生长基本稳定，主要是地下根茎的膨大，为了保证养分供应，此时可根据苗情，亩追施尿素10―15公斤，钾肥15―20公斤。可在垄下开小沟，施入后进行二次培土，也可将肥料溶解在水中顺水冲入。 在播种前浇透底水的情况下，出苗前一般不浇水，幼苗前期以浇小水为主，供水要均匀合理，夏季浇水以早晚为好，不要在中午浇水。“立秋”后，进入旺盛生长期，需水量大，每7天左右浇1次，始终保持土壤湿润，为保证生姜收获后少粘泥土，便于贮藏，可在收获前3～4天浇最后1次水。 七、延时收获，提高产量。气温在8～18℃时正是生姜生长的适宜温度，据试验，亩每日可增产25～75公斤。大田收获生姜最佳时期在初霜后。初霜前在姜田架起拱棚，使生姜延长生长20―30天后收获，亩可增产生姜1000公斤以上。 八、综合防治病虫害。姜瘟病是一种毁灭性病害，应以综合防治为主，即轮作换茬；土、肥、水、种无病菌侵染；挖好排水沟，排水防涝；药剂防治可用药肥素、
草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究
1 草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究 项 目 总 结 报
告 主持完成单位：商丘市农林科学研究所 二0一0年十二月 2 目录 一、项目来 源……………………………………………………………………1 二、项 目实施的意义和依据 (1) （一）品种来源 (1) 1、丰香—草 莓 (1) 2、特征特性 (1) 3、脱毒丰香草莓 (2) （二）项目实施的目 的..................................................................3 1、总体目标 (3) 2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展 (3)
（三）项目实施的意 义 (3) 1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 (4) 2、生产无公害果品，促农民致富................................................4 3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 (4) （四）项目实施依据 (4) 1、研究与实施的理论依据.........................................................4 2、“丰香草莓”组织培养技术路线................................................5 3、草莓组织培养的优点............................................................5 三、丰香-草莓的组织培养技术研究 (6) （一）草莓-“丰香”脱毒技术研究…………………………………………… 6 1、研究目的…………………………………………………………………6 2、供试材料…………………………………………………………………6 3、 组织培养环境条件……………………………………………………6 4、 材料的选择与处理……………………………………………………6 5、 生长点的剥取……………………………………………………………7 6、 诱导方法…………………………………………………………………7 7、 病毒的检测……………………………………………………………8 8、 无病毒原种的保存和繁殖………………………………………………8 （二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究………………………………8 1、
植物离体快繁技术的综述
植物离体快繁技术的综述 黄新 （生物科学技术学院2009级生物技术一班） 摘要：植物快繁技术是一种全新的育苗技术，是现代计算机智能控制技术与生物技术有机结合的高新农业技术。运用植物生长模拟计算机为植物创造最为适宜的温、光、气、热、营养、激素环境，使植物的生理潜能得到最大的发挥，植物的生根基因尽快表达，从而实现植物的快速生根。它的推广应用将会带来一次全新的育苗革命。本文简要介绍植物快繁技术程序、相关培养技术以及植物快繁相关问题的讨论。同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。 关键词：植物离体快繁、愈伤组织、不定芽增殖、腋芽增殖、愈伤组织增殖、体细胞胚增殖、玻璃化问题、褐化问题、应用前景 1植物离体快繁概况 1.1研究简史 离体微繁殖技术的应用，首先应归功于Morel，他在1960年首先建立了兰花离体繁殖的方法（原球茎繁殖）。目前已有近400种植物的离体繁殖已获得成功，其中许多具有重要经济价值的花卉(如兰花、菊花、石竹)、果树(草莓、无籽西瓜、葡萄)、经济作物(马铃薯、甘蔗)、林木(桉树、杨树)均已在种苗生产上广泛应用，取得了巨大的经济和社会效益。 我国快速繁殖植物的种类达443种之多荷兰是试管苗的生产王国 1.2植物离体快繁的定义 快速繁殖（rapid clone propagation）：也叫离体繁殖（in vitro
propagation）、微体繁殖（Micropropagation），是指在无菌条件下，将植物体的器官、组织或细胞培养于人工培养基中，并辅以人工控制环境，使其生长出完整植株的繁殖技术。 追究植物组织培养脱毒快繁技术的发展简史，在11世纪就出现的热处理脱毒法，最早解决一些作物的病毒病害问题[1]。本世纪50年代发展的植物组织培养技术为脱毒提供了一条有效途径。现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。它们的脱毒原理各不相同。 2植物离体快繁的技术程序 无菌材料的建立芽苗的增殖生根及移苗 2.1无菌材料的建立 （1）初代培养：取材消毒接种培养 （2）外植体的选择主要应考虑以下问题： a)繁殖对象的品种典型性。 b)植物在自然条件下的繁殖特点。尽可能取自然繁殖器官的适当 部位作外植体， c)外植体的取材部位和大小、生理状态。 2.2芽苗的增殖 增值方式：不定芽增殖、腋芽增殖、愈伤组织增殖、体细胞胚增殖 2.2.1不定芽增殖 a)不定芽：从现存的芽以外的任何器官、组织上通过器官发生重新形 成的芽称之为不定芽。 b)特点：繁殖系数高、遗传稳定性较好、继代次数有限 c)注意事项：激素浓度不能过高；避免使用2，4-D等活性强的生长素， 以减少变异发生。 2.2.2腋芽增殖 腋芽进行离体培养时可不断生长，逐渐形成芽丛，反复切割和转移可不
生姜脱毒和组培快繁及栽培技术的研究
生姜脱毒和组培快繁及栽培技术的研究生姜属姜科姜属多年生宿根植物，营养丰富是药、食、加工等多用途经济作物，是我国重要的外贸产品。生产上生姜只能靠少数品种长期无性繁殖，易感染多种病毒，使姜体内积累多种病毒，从而导致生姜产量下降、品质降低，种性退化，—般减30% ~ 50%，严重制约了生姜的生产发展。国内外目前尚无高抗病毒的生姜品种和高效杀病毒药剂，因此采用茎尖组织培养脱毒生姜苗，成为防治病毒，高生姜产量和品质的首选方法。 本研究旨在通过热处理和茎尖培养相结合的方法，以优质姜种为材料，通过热处理法催芽、表面消毒、茎尖分生组织剥取、无菌苗诱导培养、增殖诱导培养、生根诱导等一系列实验操作及培养基配方优化，并在每个不同的培养阶段进行检测，建立脱毒良种繁育体系的工艺流程，有效去除引起生姜种性退化的烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)两种主要病毒。该项研究为脱毒姜种的快速繁殖提供了技术保障，为生产应用提供了技术支撑。 1 生姜的脱毒处理 精选块大、肉厚、皮色黄亮和无病虫害的健壮姜块，在自来水下洗掉泥巴，再用少量洗衣粉浸泡10min，用毛笔轻轻刷洗种姜表面,用自来水冲洗2h，沥干水分。在38℃恒温培养箱进行热处理4周，使病毒饨化失活，同时可诱导出不定芽，待长出2 ~ 5cm左右的芽后再进行茎尖脱毒。将长出新芽切下，用流水冲洗干净，置超净工作台上，用75%酒精处理30秒，再用0.1%升汞消毒数分钟，无菌水冲洗
6 ~ 8次后，在40倍体式显微镜下剥取0.2 ~ 0.3毫米茎尖分生组织，接种于诱导培养基上。待成苗后应用血清学鉴定, 获得脱毒苗。 2 脱毒苗的培养 以MS为基础培养基，以MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L为茎尖诱导分化培养基；以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L为生姜最适继代培养基；以MS+NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L为生根培养基。所配制的培养基中，糖浓度为3%，脂为0.7%，pH值为5.8。 诱导培养时，，先进行7天暗培养，再进行光培养。温度与光照条件要求与生姜生长期的光温条件相符，可控制在（25±2）℃，光照强度为3000 ~ 4000Lux，光照时间为14 ~ 16个小时。 3 组培苗的驯化及移栽 待培养瓶里的生姜苗具有3 ~ 4片叶，5 ~ 6条根，根长至2 ~ 4cm 时即可移栽。第1 d 在培养室里打开瓶盖(即半开半盖)，第2d把瓶盖揭掉，并在培养瓶中放人少许水，以防止组培苗的失水及培养基的污染，第3d移出培养室，放在室温中，以逐渐适应室外温度。移栽前应洗净附着在组培苗根部的培养基, 以免招致细菌繁殖, 导致组培苗感染腐烂死亡, 冲洗时谨防伤根,以确保移植成活。以蛭石+泥炭为移栽基质, 移栽后每天喷雾保湿, 栽后3d棚内相对湿度保持在85% ~ 90%, 1个月后就可考查移栽成活率。田间肥水管理与普通生姜相同，11月可收获姜种。
植物组织培养脱毒方法综述
植物组织培养脱毒方法综述 摘要：植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素，通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词：组织培养；脱毒；茎尖培养 正文： 植物病毒分布广、危害大，对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来。随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此，本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述，以期从中得到启示，进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等，其中由于茎尖培养脱毒效果好，是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径。研究表明，如果将不同的方法结合起来应用效果会更好，通常将茎尖结合热处理来脱毒。 1、茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理：在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播，在分生区内无维管束，病毒扩散慢，加之植物细胞不断分裂增生，所以病毒含量少，在茎尖生长点几乎检测不出病毒，因此切取茎尖愈小愈好，但实际操作中茎尖取太小不易培养成活，过大又不能去毒。 1．1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20～40倍解剖显微镜下，用解剖刀剥取0．1～1 mm 的茎尖，迅速放入培养基中，如果在空气中暴露时间过长，就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明，带有一个叶原基的茎尖，脱毒效果最好，成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中，在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除，在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1～2片叶原基的生长点，生长点大小约在0.3～0.5 mm左右。大于以上尺寸脱毒率将会下降，反之成活率将会下降，迅速将摘出的生长点置于培养基中。就香石竹而言，切掉叶柄后，生长点是在几重叶原基的包围下，要从外到内逐一切掉外层叶原基，当生长点露出时把包括1—2片叶原基在内的生长点切下，迅速移入事先预备好的培养基内，注意生长点的方向及不要把生长点埋在培养基内。在康乃馨的茎尖培养中取带有1—2个叶原基、长0.2-0.3 mm的茎尖接种到培养基上，接种时只须沾取茎尖置于轻轻划破的培养基表面即可。洋葱可用0.5—0.7 mm茎尖培养，能有效地脱除洋葱中的O YDV和GI v病毒。在对白葱的茎尖脱毒研究表明，以带有1片叶原基大小为0.2-0.6 mm的茎尖外植体较为适宜。 1．2 茎尖培养可能出现的问题及防治方法 茎尖培养可能出现褐化、玻璃化等现象，这会严重影响植物的成活率，所以
浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方教学内容
浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方马铃薯：(Solanumtuberosum)为茄科茄属作物．是全球重要的粮菜兼用作物。马铃薯具有生长期短、产量高、适应性强、营养丰富、耐储运的特点，因此深受生产和消费者的喜爱。但在马铃薯生产中普遍存在种性退化的问题，而病毒侵染是马铃薯退化的根源。由于马铃薯是无性繁殖作物，所以病毒侵染后会世代相传，危害逐年加重。目前，世界上公认的解决马铃薯病毒危害，防止品种退化的有效途径是茎尖离体培养。通过茎尖离体培养培育脱毒基础苗，再通过建立合理的良种繁育体系生产优良种薯是马铃薯高产、稳产、优质的可靠保证。 一脱毒种薯繁育工艺流程 马铃薯脱毒种薯繁育工艺流程如图所示。 二脱毒技术
2.1 脱毒方法 2.1.1 外植体选择及处理 外植体的选择途径一般有3条：①在生长季节从田间挖取植株种植在无菌的盆土中，温室内栽培，取其新长成枝条的芽；②从田间切取枝条，插入营养液中生长，取新抽生枝条上的芽；③块茎在室内发芽，芽经热处理(38℃)2周后再取芽。另外，定期给植株喷施内吸杀菌剂，如0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液，可以有效提高灭菌效果。经过上述处理之后，要比直接取自田间枝条污染少得多。再加上茎尖分生组织又被彼此重叠的叶原基保护．只要仔细剥取，无须再进行消毒，就能得到无菌的外植体。但为保险起见，在切取外植体之前，可以先进行简单的表面消毒，一般在5％次氯酸钠中处理8～10min即可。虽然顶芽和腋芽都能作为外植体，但顶芽的茎尖生长要比腋芽的快，成活率也高，所以一般取顶芽作为外植体。 2.1.2 剥离茎尖和接种 在超净台上的解剖镜(8～40倍)下进行茎尖剥离。解剖时必须注意使茎尖暴露的时间越短越好．以免超净台的气流风干茎尖。在材料下垫上一块湿润的无菌滤纸也可达到保持茎尖新鲜的目的。在解剖镜下用解剖针将叶片和叶原基剥掉，直到露出圆亮的茎尖生长点。将带有l～2个叶原基的茎尖切下．接种到培养基上。要注意防止交叉污染，尤其是当芽未曾进行过表面灭菌时更要谨慎。 2.1.3 培养 对马铃薯茎尖培养来说，MS和white基本培养基都是较好的培养基，而且附加少量(0.1～0.5 mg／L)的NAA或BA或二者都加，培养效果更好。只有生长点的
软枣猕猴桃离体快繁技术的研究
软枣猕猴桃离体快繁技术的研究 以野生软枣猕猴桃(Actinidia arguta(Sieb.et Zucc.)Planeh.)枝条萌发的腋芽、顶芽和茎段为外植体,建立了软枣猕猴桃的启动培养、继代增殖培养、生根培养及炼苗移栽培养的离体快繁技术体系。探讨了外植体的灭菌时间,生长调节剂的种类及浓度,继代周期及次数,移栽基质等对软枣猕猴桃离体快繁的影响,为工厂化育苗提供技术支撑。 试验结果表明:1.以枝条萌发的腋芽、顶芽、茎段作为外植体,用0.05%的升汞对外植体进行不同时间的灭菌,腋芽和顶芽的最佳灭菌时间为4min,茎段的最 佳灭菌时间为6min。2.在启动培养过程中,茎段腋芽萌发的最佳培养基为 MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L IBA,萌芽率最高为92.37%,萌芽数量3.43,芽较粗壮,叶色浓绿。 顶芽最佳的启动培养基为MS+1.5mg/L 6-BA+0.25mg/L IBA,启动率为96.19%。 3.采用丛生芽增殖途径和茎段扦插增殖途径对组培苗进行继代增殖培养。 在丛生芽增殖途径中,最佳的增殖培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA,增殖系数最高为4.69,生长健壮,叶色浓绿有光泽。在茎段扦插增殖途径中,最佳培养基配方为MS+2.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IBA。 茎粗壮,株高6.0-7.0cm。增殖系数可达到7.28。 继代增殖培养过程中,最佳的继代周期为40d,增殖系数为4.72,继代次数不宜超过6次。定植株数为每瓶9株,增殖系数最高为4.67。 组培苗生长健壮,长势一致,茎坚韧,粗壮。4.在MS基本培养基中加入生长调节剂2.0mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA和30g/L蔗糖为最佳的壮苗培养基。 丛生芽长势一致且健壮,叶色浓绿,叶片大且平展。利于下一步的生根培养试
浅析植物离体快繁中常见的问1
目录 绪论 (1) 1. 离体快繁过程中的问题、原因及防治措施 (1) 1.1 污染问题 (2) 1.1.1 污染的来源 (2) 2.1.2 污染的防治措施 (2) 1.2 褐变问题 (3) 1.2.1 褐变的原因 (4) 1.2.2 克服外植体褐变的措施 (4) 1.3 玻璃化问题 (4) 1.3.1 玻璃化发生的原因 (4) 1.3.2控制组培苗玻璃化的措施 (5) 1.4 遗传稳定性 (5) 1.4.1 影响遗传稳定性的因素 (6) 1.4.2 提高遗传稳定性，减少变异的措施 (5) 1.5 黄化问题 (5) 1.5.1 黄化原因 (6) 2. 离体快繁的前景与探讨 (6) 2.2适应现状的需求 (6) 2.3存在问题 (6) 参考文献 (6) 致谢 (6)
浅析植物离体快繁中常见的问题 摘要 植物组织培养是20世纪初发展起来的一项新技术，是现代农业生物技术的一个重要组成部分，已经日益广泛地应用于园艺植物的脱毒和快繁等方面。本文针对植物组织培养中常出现的问题进行了分析，探讨了污染、褐变、玻璃化、遗传稳定性、黄化等发生的可能原因，并提出了相应的防治措施。 关键词 离体快繁；污染；褐变；玻璃化；遗传稳定性；黄化 Analysis of the Common Problems in Plant Vitro Propagation Pick to Plant tissue culture is developed in the early 20th century, a new technology of modern agricultural biotechnology, is one of the important constituent, has increasingly widely applied in the enviroment of horticultural plants and rapid propagation, etc. Aiming at the plant tissue culture often appears the question were analyzed, pollution, Browning, vitrification, genetic stability, such as possible reasons Browning, and puts forward the corresponding prevention cuo Key words Propagation in vitro; contamination; browning; vitrification; genetic stability; etiolation
《植物组织培养技术》植物脱毒与快繁
《植物组织培养技术》植物脱毒与快繁 模块介绍 本模块针对组培研发岗位的工作职责与任职要求，编排了试验方案设计和数据调查与分析二个实训项目，主要内容包括组培的基本理论、提高组培苗遗传稳定性的措施、组培试验方案的制订等，重点阐述了组培快繁的程序与类型、组培研究的技术路线与试验设计方法、组培快繁的常见问题、组培数据调查与分析方法等。在理论学习的同时，开展项目实践活动，培养学生会设计组培试验、撰写试验方案、编制组培试验观察表和技术指标统计分析，具备组培研发工所要求的理论知识、技能水平和相应的职业素质。模块结构设计见表1。 表1 模块结构设计 项目1 蔬菜组培与快繁/马铃薯脱毒与快繁 一、学习目标
（一）终极目标 掌握植物脱毒与鉴定技术，培育马铃薯等蔬菜脱毒、快繁与脱毒苗的鉴定技术。（二）促成目标 1.熟悉植物脱毒的意义、原理与方法，能够运用脱毒技术培育马铃薯等蔬菜脱毒苗； 2.掌握脱毒苗鉴定技术，清楚马铃薯等蔬菜脱毒苗鉴定方法； 3.清楚马铃薯等蔬菜脱毒苗的保存与无病毒苗繁育体系、方法； 4.提高操作水平和分析解决问题能力，培养团队精神、敬业精神、责任意识。 二、学习内容 1．蔬菜组织培养概况； 2.马铃薯组培概况； 3.马铃薯脱毒种薯繁育流程； 4.脱毒苗的优势(含病毒的种类、传染途径、表现症状与危害)； 5.植物脱毒技术； 6.脱毒苗鉴定技术； 7.马铃薯脱毒苗培育与鉴定； 8.马铃薯脱毒苗快繁与微型薯诱导； 9.马铃薯等蔬菜脱毒苗的保存与繁殖； 10.甘薯脱毒与快繁技术要点（拓展）； 11.大蒜脱毒与快繁技术要点（拓展）； 12.紫背天葵组培与快繁技术（拓展）； 13.结球甘蓝组培与快繁技术（拓展）。 三、知识点 1.蔬菜组织培养概况； 2.马铃薯组培概况； 3.马铃薯脱毒种薯繁育流程； 4.脱毒苗的含义、实质与培育优势(含病毒的种类、传染途径、表现症状与危害)； 5.植物脱毒技术（热处理、微茎尖培养、其它脱毒方法）； 6.脱毒苗鉴定技术（指示植物法、嫁接法等）； 7.马铃薯脱毒苗培育与鉴定； 8.马铃薯脱毒苗快繁与微型薯诱导（实验室诱导、温室生产）。 四、技能点
离体快繁
第三章植物离体快速无性繁殖技术和脱毒培养技术 第一节、植物离体快速繁殖技术 一、植物离体快速无性繁殖的概念及其意义 1 概念 离体无性繁殖：指利用组织培养的方法进行植物离体培养，在短时间内获得大量遗传性一致的个体的方法，又称“离体繁殖，快速无性繁殖、微型繁殖”。 试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。 无性系：指有同一个体通过无性繁殖产生的一个群体，它们的遗传背景基本一致。 2 应用 （1）用来加速难繁殖和繁殖速度慢的植物的繁殖。 （2）无病毒苗木的繁殖。 （3）用于某些杂合园艺植物的繁殖。 （4）用于需要加速繁殖的特殊基因型。 二、植物离体快速无性繁殖的特点 1 优点 （1）首先体现在一个“快”字上。 （2）可人为控制条件，不受大自然的干扰 （3）快速培养脱毒苗。 2局限性 （1）一些植物快速无性繁殖技术的某些环节还没有突破。 （2）要对其成本、技术等进行估算。 （3）随继代次数增多，培养材料的分化能力下降。 三、离体无性繁殖中器官的发生形式 1 不定芽型 ２器官型 ３器官发生型 ４类胚体发生型 ５原球茎型 四、离体无性繁殖的程序 ?无菌母株的制备 ?茎芽的增殖 ?诱导生根 ?炼苗 ?再生植株的鉴定 五、植物组织培养中应注意的问题 １褐变 （１）褐变
褐变：指在组织培养过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。 （２）克服褐变的方法 选择适宜的外植体（幼嫩材料、春季取材） 改善营养条件（连续培养） 在培养基中加入一些附加物 ２污染 （１）特点： 细菌污染的特点 在培养材料附近出现黏液状菌斑，一般接种1-2天一5可发现。特别应注意一种呈乳白色的细菌污染，这种细菌为芽孢杆菌，外被荚膜，耐高温，一般灭菌剂难以杀死，可随培养材料、用具传播，可出现在培养基表面，也可呈滴形云雾状存在于培养基内，发现及时淘汰，并对用过的器具严格高温灭菌。 真菌污染的特点 培养基上长霉，一般接种3-5天就可先，霉的颜色有黑、白、黄等，真菌污染的特点是污染部分有不同颜色的霉菌，接种3天，有时多达10天才能表现。 （２）克服方法： ?外植体灭菌不彻底 ?培养基及各种器具清洁灭菌不彻底 ?人为因素 ?超净工作区被污染 ?环境不清洁 ３玻璃化 （１）玻璃化 玻璃化：是试管苗的一种生理失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的茎、叶往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。 （２）克服方法 ?增加固体琼脂浓度，使细胞吸水受到阻碍。 ?提高培养基中的Ｃ、Ｎ比。 ?控制温度，增加自然光照。 ?附加一些物质 第二节、植物的脱毒技术 一、病毒的特性及其侵染 １病毒的特性 ２植物病毒的侵染途径 ３病毒在植物体内分布不均匀的原因 （１）分生组织中无微管系统，病毒不易移动。 （２）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很强，有竞争状态，抑制了病毒的复制。（３）在分生组织中存在高水平的内源激素，可以抑制病毒的增殖。 二、脱毒的方法 １物理方法
[生姜脱毒与种姜繁殖技术]脱毒生姜
[生姜脱毒与种姜繁殖技术]脱毒生姜 生姜为姜科姜属多年生宿根草本植物,又名黄姜,在我国栽培历史悠久,分布广,是集调味品、加工食品原料、药用蔬菜为一体的多用途蔬菜,具有栽培容易、产量高、价格高等特点。由于生姜在生产上长期采用无性繁殖,所以容易感染多种病毒病。感染了病毒的生姜种性逐渐退化,品质变劣,产量下降。利用茎尖分生组织培养脱毒生姜苗,已成为防治病毒和提高生姜产量及品质的主要方法。脱病毒生姜生长快、长势旺、抗病、耐高温、抗逆境能力显著增强,姜块色泽鲜亮、均匀整齐、辣味浓、品质明显改善,同时能大幅度提高产量,在生产上脱毒姜种比原品种增产50%以上,一般每亩产量可达5 000kg,增产效益十分显著。 一、生姜脱病毒 植物脱毒一般采用热处理培养:即在35～38℃条件下持续对种苗处理5～6周,使病毒钝化失活。但由于热处理要求条件高,处理时间长、苗数少,成本高,而且只能去掉部分病毒,在生产上难以应用。采用热处理结合分生组织培养的方法,脱毒效果很好。具体做法:是把
切取的生姜芽洗净,在50℃高温下热处理5分钟,杀死部分病毒,然后在超净工作台上对材料进行消毒、解剖剥离,切取含分生组织的茎尖 生长点0.2～0.3mm,接种到(MS+BA2.0+IAA0.2)培养基上,放在25±2℃下暗培养,10天后有愈伤组织长出转入光培养,光照强度为1 500～2 000勒克斯,光照时间12小时/天。3周后生长点周围开始分化出芽从,当芽丛长到2～3cm时,将丛生芽切成单芽转入到(MS+BA5.0+IAA0.1) 继代培养基中培养,每瓶5～6株,以后每25～30天继代1次,可繁殖 出大量的脱毒试管苗,移栽前进行壮苗生根培养。 二、脱毒苗鉴定 引起生姜种性退化的主要病毒为黄花叶病毒(CMV)和烟草花叶 病毒(TMC),病毒检测是生姜茎尖脱毒不可缺少的环节。检测生姜脱毒苗的方法主要有目测法和指示植物法:①目测法。是利用脱毒苗和带 毒苗在形态、生长势等生物学特征上的差异来鉴别。脱毒苗生长快、健壮、叶片平展,叶色浓厚,不带皱纹。而带毒苗生长势弱,叶片卷曲,叶色淡且出现花叶斑纹,褪绿斑点等;②指示植物检测法。常用曼陀罗、心叶烟、苋色藜等作指示植物,具体作法是剪取待测生姜叶片加入缓
植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖
一、草莓简介 草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。 草莓具有极其丰富的营养价值。 1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用; 2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用; 3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效; 4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用; （回主页） 草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。 下面就简单介绍几种草莓易得的病： 二、草莓易得的病 1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。 2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。叶片上卷呈汤匙状。花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。近熟期草莓受到为害会失去商品价值。 3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。 4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。 5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。 6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如： 线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。 蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。 （回主页） 根据报道，侵染草莓的病毒多达二十多种。长期大田分株繁殖容易使草莓植株中病毒积累，导致草莓品种退化,，严重影响经济收益。所以利用先进的技术使草莓脱毒，以及后期的快速繁殖已成为草莓业发展的必要环节。 下面就来详细介绍草莓的脱毒与快繁。
第五章 茎尖培养与快速繁殖
第五章茎尖培养与快速繁殖 第一节茎尖培养脱毒技术 一、培育无病毒苗的意义 植物病毒病：由病毒和类病毒、支原体等引起，已发现此类病害700多种，无性繁殖植物严重；无特效药，培育无毒种苗是主要防治措施。 获得无病毒种苗的途径： 1）从现有种质中筛选无毒单株； 2）已感染植株脱毒。 二、植物脱毒的方法 1. 热处理：病原物与植物耐热性不同，将植物在较高温度下处理一段时间，病原物钝化、失活或不能繁殖，而植物所受影响较小、生长较快，使病毒减少甚至消灭。 方法： 1) 温汤浸渍：50℃温水中浸10分钟~数小时，简便易行，适用于休眠器官、接穗或种子。 2) 热空气处理：在温热治疗室/箱内，35~40℃，几十分钟~数月。对茎尖效果较好，热处理后取较大茎尖培养，可提高成活率与脱毒率。 注意：易受伤，掌握温度与时间。 2. 茎尖培养脱毒 3. 其他途径脱毒 3.1 愈伤组织培养脱毒：花器官、珠心胚等愈伤中存在无病毒细胞群，从再生植株可得到无病毒苗。 3.2 茎尖微体嫁接脱毒：在无菌条件下，将切取的茎尖嫁接到培养的砧(zhen)木苗上。 3.3 抗病毒剂的应用： 抗病毒醚: 可抑制病毒复制和扩散， 嘌呤和嘧啶类似物; 抗菌素
三、茎尖培养脱毒技术 1、原理 病毒在植物体内分布不均匀，茎尖等生长点因为无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以茎尖几乎不含病毒。 茎尖培养脱毒效果好，后代稳定，目前广泛应用。 2、脱毒技术 2.1 操作 取无菌顶稍1~2 cm→解剖镜(8—40倍)下→剥去幼叶→切取茎尖0.2～0.5 mm、带1~2个叶原基→接种。 注意：随切随接，防止变干；茎尖小较好，但太小不易成活，过大又不能保证完全脱毒。 草莓：茎尖0.2~0.3mm，脱毒率100%；1mm，脱毒率50%。 2.2 培养基 基本培养基: MS、White、B5等。 碳源: 蔗糖效果好，可用白砂糖 激素：2,4-D、IAA、NAA等，通常低浓度。 2.3 继代培养 初代培养长成的新梢→切成小段→增殖培养基→1个月左右→新梢又可扩繁→→建立和维持茎尖无性系。 继代培养常用MS培养基。 2.4 生根与移栽 常用生根方法： 用1/2、1/3、1/4MS或White培养基，附加NAA、IAA、IBA等，最好加活性炭(0.3％)。 或者： 将新梢基部浸入50~100mg/L的IBA中4-8h，然后转入无激素培养基中生根。移栽：同前。 3、脱毒苗的鉴定 3.1 酶联免疫法（ELISA）
植物组织培养脱毒方法综述
植物组织培养脱毒方法综述 符国芳,李 青 (北京林业大学,北京100083) 摘要:植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素,通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料,综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词:组织培养;脱毒;茎尖培养 中图分类号:S432 4+1 文献标识码:A 文章编号:1002-7351(2007)03-0255-04 Summarization on the methods of virus elimination by plant tissue culture FU Guo fang,LI Qing (Beijing Forestry U niversity ,Beij ing 100083,China) Abstract:Plant virus is the factor that inhibits flow er industr y development Plant v irus can be eliminated by shoot tip treatment,shoot t ip and heat treatment,cold treatment,chemical treatment and callus treatment,so o n By searching the research bibliog ra phies home and abr oad,this paper describes the methods to eliminate v irus by shoot t ip culture,heat treatment,chemical treat ment,callus treatment and cold treatment,so on Key words:tissue culture;vir us elimination;shoot tip culture 植物病毒分布广、危害大,对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来,随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术,病毒病开始流行,严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此,本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述,以期从中得到启示,进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等,其中由于茎尖培养脱毒效果好,是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径 [1]。研究表明,如果将不同的方法结合起来应用效果会更好, 通常将茎尖结合热处理来脱毒。1 茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理:在染病毒植株体内,病毒分布并不均匀,在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播,在分生区内无维管束,病毒扩散慢,加之植物细胞不断分裂增生,所以病毒含量少,在茎尖生长点几乎检测不出病毒,因此切取茎尖愈小愈好,但实际操作中茎尖取太小不易培养成活,过大又不能去毒[2]。 1 1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20~40倍解剖显微镜下,用解剖刀剥取0 1~1mm 的茎尖,迅速放入培养基中,如果在空气中暴露时间过长,就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明,带有一个叶原基的茎尖,脱毒效果最好,成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中,在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除,在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1~2片叶原基的生长点,生长点大小约在0 3~0 5mm 左右,大于以上尺寸脱毒率将会下降,反之成活率将会下降,迅速将摘出的生长点置于培养基中 [4]。就香石竹而言,切掉叶柄后, 收稿日期:2007-01-08;修回日期:2007-03-15 作者简介:符国芳(1982-),女(土家族),湖南张家界人,北京林业大学硕士研究生,从事园林植物组织培养研究。第34卷第3期 2007年9月福建林业科技Jour of F ujian Forestry Sci and T ech V ol 34 N o 3Sep ,2007
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用 摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。本文简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理和技术方法，介绍了几种常用的病毒检测方法。本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。 关键词：茎尖培养，脱毒快繁技术，病毒检测，应用前景. 1．脱毒技术及其原理 植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物，脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。脱毒及离体快繁，是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。 1.1 热处理法 1.1.1 概述 热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的生长速度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含病毒的植物分生组织，然后进行无毒个体培育。 热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。热水浸泡对休眠芽效果较好，湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。热空气处理比较容易进行，把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中，在35~40℃下处理一段时间即可，处理时间的长短，可由几分钟到数月不等[3] 。热处理的方法有恒温处理和变温处理，处理的材料可以是植株，也可以是接穗。 1.12原理 热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同，选择适当的温度和处理时间，植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动，但很少伤害甚至不伤害寄主组织，从而让植物细胞加快生长，使生长点附近不带病毒，从而达到脱毒的目的。 1.2 茎尖培养脱毒法 1.2.1 概述 茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗，其方法是在解剖镜下，用解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，因为茎尖分生组织基本不带病毒，利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测，就可以获得无病毒的植株。 茎尖培养脱毒法脱毒率高，脱毒速度快，能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料，但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。为了克服这一缺点，现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果，是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大，有利于切取较大的茎尖（1mm左右），从而能够提高培养或嫁接的成活率。 1.2.2 原理 茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在，病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。 据研究，植物体内某一部分组织器官不带病毒的原因是：分生组织的细胞生长速度快，病毒在植物体内繁殖的速度相对较慢，而且病毒的传播是靠筛管组织进行转移或通过细胞间连丝传递给其他细胞，因此病毒的传递扩散也受到一定限制，这样便造成植物体的部分组织细胞没
第四章 植物的脱毒与快繁培养
第四章植物的脱毒与快繁培养 第一节概念与意义 一、概念 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的病毒，生产健康的繁殖材料。 二、植物病毒病简介及危害 （一）植物病毒病简介 定义：由植物病毒寄生引起的病害。 症状： ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶病。 ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。 ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。 （二）病毒的侵染特性 ①有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，极易受病毒病的侵染。 ②大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除外）。 ③病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢. （三）植物病毒的危害：已超过500种，随着生产栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的病毒种类也越来越多。大多数植物病毒不经种子传播，对于有性生殖退化，仅能用无性繁殖方法繁殖的植物，一旦患病则毫无办法，从而使优良品种的生产力衰退。 目前受病毒危害严重影响生产的有： 大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草 蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、萝卜 果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉 花卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等 块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年相当一部分产品要用留作种。如：大蒜：留种量占产量的五到八分之一 马铃薯：留种量占产量的十分之一 贝母：留种量占产量的三分之一。
表1 危害园艺植物的病毒数目 植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类菊花19 矮牵牛 5 葡萄26 康乃馨11 马铃薯17 樱桃44 水仙 4 大蒜24 无花果 5 唐菖蒲 5 豌豆15 桃23 风信子 3 百合 6 梨11 月季10 柑橘23 草莓24 天竺葵 5 苹果36 病毒的危害给农业生产带来重大的损失，如草莓病毒的危害，曾使日本草莓产量严重降低，品质大大退化，使生产几乎受到灭顶之灾。柑橘的衰退病曾经毁灭了巴西的大部分柑橘，花卉病毒的危害，表现在球极、宿根等花卉的严重退化，致使花小而少，甚至畸形、变色，观赏价值大大下降。 三、植物脱毒培养的意义 能够有效地保持优良品种的特性； 生产无病毒种苗，防止品种退化； 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； 节约耕地，提高农产品的商品率； 四、传统的植物脱毒技术简介 物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温热处理等 原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目的。 化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在植物体内的复制。 生物学方法：选用抗病毒品种或采用种子繁殖方法。 传统的防治病毒的方法如物理方法、化学方法及生物学方法防治病毒效果不显著。由于病毒在植物体内分布具有不均匀性，植物生长点附近的病毒浓度很低或无病毒，通过分生组织培养，采取适当的措施，就可以获得脱病毒植株。 第二节植物脱毒的原理和技术 一、基本原理 早在1934年，White发现烟草花叶病毒在烟草根中的分布是不均匀的，越靠根尖（root tip）区病毒含量越低，在根尖的顶端不含病毒。 理论假说： (1) 能量竞争病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能