【核医学】体外放射分析技术
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logistic拟合法
3、两类分析系统的比较
标记对象 抗体 方法学 反应动力学 标准曲线 NSB影响 误差 批间比较
RIA
IRMA
抗原
抗体
多克隆，量少 单克隆，量大
竞争
非竞争
复杂，不稳定 简单，稳定性好
负相关，量程窄 正相关，量程较宽
高剂量段
低剂量端
较大
较小
可比性强
可比性差
3、两类分析系统的比较
• 相同点： • 1、免疫反应 • 2、检测抗原浓度 • 3、反映的是抗原抗体的活性 • 4、放射测量
二、质量控制体系
• （一）、数据处理 • 1、标准样品：标准曲线制备 • 2、质量控制样品结果获得 • 3、生物样品结果获得
（二）质量指标
• 1、精密度（precision,reproducibility): 分析过程中对某一特定浓度的物质在多 次重复检测中所得结果的一致程度。
四参数logistic拟合
加样品、标记物、抗体操作
温育（37 ℃ 、4 ℃ 、25 ℃)
2、免疫放射分析
• 在耦合上单抗1的试管里加入待测抗原或标准品 • 加入过量的标记抗体2 • 洗涤，去除未结合部分。 • 测量，得一组数据。 • 数据处理：logit-log转换及线性回归法、五参数
度。
3、生物样品不是试剂！
• 抽血时间影响 • 是否加入酶抑制剂 • 储存条件
4、质量控制样品 （quality control sample)
• 指已确知待测成分浓度的同质生物样品。 • 用于监测与评价标准样品及待测样品在检
测过程中引入误差的性质及程度。
5、分离试剂 (separation agent)
• （1）Βιβλιοθήκη Baidu疫分离试剂 • （2）固相分离试剂 • （3）生物素-亲和素
分离试剂
• （4）吸附分离试剂
• （5）离子交换、层析 分离及电泳分离
• (6):沉淀分离
（二）两类分析系统的设计特 点及性能比较
1、放射免疫分析
• 竞争结合 • 过量的抗原+限量的抗体 温度、时间 复合物 • 动态平衡后分离（离心及去上清） • 测量沉淀的放射性，得一组剂量效应数据 • 数据处理：logit-log转换及线性回归法、
(一)基本试剂及质量要求
• 1、抗原： • 免疫用：制备抗体 • 标准用（标准品，校
正品）：制作标准曲 线，要“质同量准”
• 标记用：
2、抗体：关键试剂,有单克隆 抗体、多克隆抗体。
评价指标：
• 特异性：指抗体不受交叉反应物质影响的 程度。
• 亲和力：抗体与抗原间的结合强度 • 滴度：能结合50%抗原所对应的抗体稀释
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 竞争结合： • 节约结合剂用量 • 非竞争结合： • 灵敏度高，试验周期更短，误差更小。
第五章 体外放射分析技术
(in vitro radioassay)
Copyright 1996-98 © Dale Carnegie & Associates, Inc.
概 念：
• 体外实验条件下， • 生物学基础：特异性结合反应， • 方法学基础：结合反应动力学规律， • 定量手段：放射测量技术。 • 超微量定量分析
特 点：
• 灵敏度高 • 特异性强 • 精密度好 • 应用面广
• 方法简便！？
• 超微量分析：
• 10-9—10-12水 平（常规生化： 10-3）
第一节 不同类型体外放射分析 系统的共性基础
• 一、特异性结合反应 • 二、结合反应动力学规律 • 三、放射测量
一、特异性结合反应
• 1、抗原—抗体 • 2、配体—受体 • 3、底物—酶
三、放射测量
• 直接检测技术灵敏度通常较低 • 采用示踪技术进行间接测量 • 37Bq/10-15g，提高比活度可提高灵敏度 • 放射性原子标记到配体或结合剂分子 • 何种核素？何种射线？
非放射定量技术
• 化学发光技术 • 时间分辨荧光分析技术 • 电化学发光技术 • 酶定量技术：灵敏度差。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• 受体放射分析 (receptor radioassay) ：检 测受体本身数量及其他参数。
• 放射受体分析(radioreceptor assay）：测 受体抗体：如TRAb。
• 四、酶活性放射分析、放射酶促分析 • 五、蛋白结合分析
第三节 临床应用
• 一、内分泌系统疾病 • 甲状腺、肾上腺、性腺、垂体、下丘脑 • 二、肿瘤标志物 • 三、神经系统、循环系统、消化系统、泌
•男人、女 人是不是特 异性结合？
• 4、激素—结合蛋白
通用术语
• 配体（ligand,L) • 结合剂（binder,B) • 彼此之间具有极强的识别及结合能力，能
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
微粒子酶免疫分析仪
大型化学发光分析系统
时间分辨荧光免疫分析仪
第二节 不同类型体外放射分析 系统各自特点及其技术方法
一、抗原(antigen)-抗体 (antibody)系统
• 放射免疫分析（RIA)：竞争结合 • （Radioimmunoassay) • 免疫放射分析(IRMA)：非竞争结合 • (immunoradiometric assay)
3、两类分析系统的比较
标记对象 抗体 方法学 反应动力学 标准曲线 NSB影响 误差 批间比较
RIA
IRMA
抗原
抗体
多克隆，量少 单克隆，量大
竞争
非竞争
复杂，不稳定 简单，稳定性好
负相关，量程窄 正相关，量程较宽
高剂量段
低剂量端
较大
较小
可比性强
可比性差
3、两类分析系统的比较
• 相同点： • 1、免疫反应 • 2、检测抗原浓度 • 3、反映的是抗原抗体的活性 • 4、放射测量
二、质量控制体系
• （一）、数据处理 • 1、标准样品：标准曲线制备 • 2、质量控制样品结果获得 • 3、生物样品结果获得
（二）质量指标
• 1、精密度（precision,reproducibility): 分析过程中对某一特定浓度的物质在多 次重复检测中所得结果的一致程度。
四参数logistic拟合
加样品、标记物、抗体操作
温育（37 ℃ 、4 ℃ 、25 ℃)
2、免疫放射分析
• 在耦合上单抗1的试管里加入待测抗原或标准品 • 加入过量的标记抗体2 • 洗涤，去除未结合部分。 • 测量，得一组数据。 • 数据处理：logit-log转换及线性回归法、五参数
度。
3、生物样品不是试剂！
• 抽血时间影响 • 是否加入酶抑制剂 • 储存条件
4、质量控制样品 （quality control sample)
• 指已确知待测成分浓度的同质生物样品。 • 用于监测与评价标准样品及待测样品在检
测过程中引入误差的性质及程度。
5、分离试剂 (separation agent)
• （1）Βιβλιοθήκη Baidu疫分离试剂 • （2）固相分离试剂 • （3）生物素-亲和素
分离试剂
• （4）吸附分离试剂
• （5）离子交换、层析 分离及电泳分离
• (6):沉淀分离
（二）两类分析系统的设计特 点及性能比较
1、放射免疫分析
• 竞争结合 • 过量的抗原+限量的抗体 温度、时间 复合物 • 动态平衡后分离（离心及去上清） • 测量沉淀的放射性，得一组剂量效应数据 • 数据处理：logit-log转换及线性回归法、
(一)基本试剂及质量要求
• 1、抗原： • 免疫用：制备抗体 • 标准用（标准品，校
正品）：制作标准曲 线，要“质同量准”
• 标记用：
2、抗体：关键试剂,有单克隆 抗体、多克隆抗体。
评价指标：
• 特异性：指抗体不受交叉反应物质影响的 程度。
• 亲和力：抗体与抗原间的结合强度 • 滴度：能结合50%抗原所对应的抗体稀释
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 竞争结合： • 节约结合剂用量 • 非竞争结合： • 灵敏度高，试验周期更短，误差更小。
第五章 体外放射分析技术
(in vitro radioassay)
Copyright 1996-98 © Dale Carnegie & Associates, Inc.
概 念：
• 体外实验条件下， • 生物学基础：特异性结合反应， • 方法学基础：结合反应动力学规律， • 定量手段：放射测量技术。 • 超微量定量分析
特 点：
• 灵敏度高 • 特异性强 • 精密度好 • 应用面广
• 方法简便！？
• 超微量分析：
• 10-9—10-12水 平（常规生化： 10-3）
第一节 不同类型体外放射分析 系统的共性基础
• 一、特异性结合反应 • 二、结合反应动力学规律 • 三、放射测量
一、特异性结合反应
• 1、抗原—抗体 • 2、配体—受体 • 3、底物—酶
三、放射测量
• 直接检测技术灵敏度通常较低 • 采用示踪技术进行间接测量 • 37Bq/10-15g，提高比活度可提高灵敏度 • 放射性原子标记到配体或结合剂分子 • 何种核素？何种射线？
非放射定量技术
• 化学发光技术 • 时间分辨荧光分析技术 • 电化学发光技术 • 酶定量技术：灵敏度差。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• 受体放射分析 (receptor radioassay) ：检 测受体本身数量及其他参数。
• 放射受体分析(radioreceptor assay）：测 受体抗体：如TRAb。
• 四、酶活性放射分析、放射酶促分析 • 五、蛋白结合分析
第三节 临床应用
• 一、内分泌系统疾病 • 甲状腺、肾上腺、性腺、垂体、下丘脑 • 二、肿瘤标志物 • 三、神经系统、循环系统、消化系统、泌
•男人、女 人是不是特 异性结合？
• 4、激素—结合蛋白
通用术语
• 配体（ligand,L) • 结合剂（binder,B) • 彼此之间具有极强的识别及结合能力，能
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
微粒子酶免疫分析仪
大型化学发光分析系统
时间分辨荧光免疫分析仪
第二节 不同类型体外放射分析 系统各自特点及其技术方法
一、抗原(antigen)-抗体 (antibody)系统
• 放射免疫分析（RIA)：竞争结合 • （Radioimmunoassay) • 免疫放射分析(IRMA)：非竞争结合 • (immunoradiometric assay)