【核医学】体外放射分析技术

三、放射测量
• 直接检测技术灵敏度通常较低 • 采用示踪技术进行间接测量 • 37Bq/10-15g，提高比活度可提高灵敏度 • 放射性原子标记到配体或结合剂分子 • 何种核素？何种射线？
非放射定量技术
• 化学发光技术 • 时间分辨荧光分析技术 • 电化学发光技术 • 酶定量技术：灵敏度差。
• 受体放射分析 (receptor radioassay) ：检 测受体本身数量及其他参数。
• 放射受体分析(radioreceptor assay）：测 受体抗体：如TRAb。
• 四、酶活性放射分析、放射酶促分析 • 五、蛋白结合分析
第三节 临床应用
• 一、内分泌系统疾病 • 甲状腺、肾上腺、性腺、垂体、下丘脑 • 二、肿瘤标志物 • 三、神经系统、循环系统、消化系统、泌
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 竞争结合： • 节约结合剂用量 • 非竞争结合： • 灵敏度高，试验周期更短，误差更小。
logistic拟合法
3、两类分析系统的比较
标记对象 抗体 方法学 反应动力学 标准曲线 NSB影响 误差 批间比较
RIA
IRMA
抗原
抗体
多克隆，量少 单克隆，量大
竞争
非竞争
复杂，不稳定 简单，稳定性好
负相关，量程窄 正相关，量程较宽
高剂量段
低剂量端
较大
较小
可比性强
可比性差
3、两类分析系统的比较
•男人、女 人是不是特 异性结合？
• 4、激素—结合蛋白
通用术语
• 配体（ligand,L) • 结合剂（binder,B) • 彼此之间具有极强的识别及结合能力，能
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
• （1）免疫分离试剂 • （2）固相分离试剂 • （3）生物素-亲和素
பைடு நூலகம்分离试剂
• （4）吸附分离试剂
• （5）离子交换、层析 分离及电泳分离
• (6):沉淀分离
（二）两类分析系统的设计特 点及性能比较
1、放射免疫分析
• 竞争结合 • 过量的抗原+限量的抗体 温度、时间 复合物 • 动态平衡后分离（离心及去上清） • 测量沉淀的放射性，得一组剂量效应数据 • 数据处理：logit-log转换及线性回归法、
度。
3、生物样品不是试剂！
• 抽血时间影响 • 是否加入酶抑制剂 • 储存条件
4、质量控制样品 （quality control sample)
• 指已确知待测成分浓度的同质生物样品。 • 用于监测与评价标准样品及待测样品在检
测过程中引入误差的性质及程度。
5、分离试剂 (separation agent)
特 点：
• 灵敏度高 • 特异性强 • 精密度好 • 应用面广
• 方法简便！？
• 超微量分析：
• 10-9—10-12水 平（常规生化： 10-3）
第一节 不同类型体外放射分析 系统的共性基础
• 一、特异性结合反应 • 二、结合反应动力学规律 • 三、放射测量
一、特异性结合反应
• 1、抗原—抗体 • 2、配体—受体 • 3、底物—酶
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
• 相同点： • 1、免疫反应 • 2、检测抗原浓度 • 3、反映的是抗原抗体的活性 • 4、放射测量
二、质量控制体系
• （一）、数据处理 • 1、标准样品：标准曲线制备 • 2、质量控制样品结果获得 • 3、生物样品结果获得
（二）质量指标
• 1、精密度（precision,reproducibility): 分析过程中对某一特定浓度的物质在多 次重复检测中所得结果的一致程度。
微粒子酶免疫分析仪
大型化学发光分析系统
时间分辨荧光免疫分析仪
第二节 不同类型体外放射分析 系统各自特点及其技术方法
一、抗原(antigen)-抗体 (antibody)系统
• 放射免疫分析（RIA)：竞争结合 • （Radioimmunoassay) • 免疫放射分析(IRMA)：非竞争结合 • (immunoradiometric assay)
(一)基本试剂及质量要求
• 1、抗原： • 免疫用：制备抗体 • 标准用（标准品，校
正品）：制作标准曲 线，要“质同量准”
• 标记用：
2、抗体：关键试剂,有单克隆 抗体、多克隆抗体。
评价指标：
• 特异性：指抗体不受交叉反应物质影响的 程度。
• 亲和力：抗体与抗原间的结合强度 • 滴度：能结合50%抗原所对应的抗体稀释
第五章 体外放射分析技术
(in vitro radioassay)
Copyright 1996-98 © Dale Carnegie & Associates, Inc.
概 念：
• 体外实验条件下， • 生物学基础：特异性结合反应， • 方法学基础：结合反应动力学规律， • 定量手段：放射测量技术。 • 超微量定量分析
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
四参数logistic拟合
加样品、标记物、抗体操作
温育（37 ℃ 、4 ℃ 、25 ℃)
2、免疫放射分析
• 在耦合上单抗1的试管里加入待测抗原或标准品 • 加入过量的标记抗体2 • 洗涤，去除未结合部分。 • 测量，得一组数据。 • 数据处理：logit-log转换及线性回归法、五参数