干扰素释放试验 PPT资料共29页
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Y-干扰素释放试验的 临床应用
Y干扰素释放试验(interferon．1 release assays ），
IGRA是检测结核分枝杆菌(MTB)特异性抗原刺激 T细胞产生的Y干扰素，以判断是否存在MTB的感 染。IGRAs可弥补PPD试验的不足，目前多个国 家已将其用于诊断MTB潜伏感染(1atent tuberculosis infection，LTBI)，我国部分医院也 已常规开展此项检测
• 荟萃分析结果显示，在HIV感染人群中，IGRAs的敏感度并未高于PPD试验， 但IGRAs(尤其是细胞检测)受CD4+T细胞数量的影响小于PPD试验，这可能 因为IGRAs检测过程已对单个核细胞数量进行了标准化，即在检测程序上消 除了淋巴细胞数量减少对检测结果的影响
PPD阳性对以下情况无法区分
• 2019年广州结核病流行病抽样调查：非结核分枝杆菌19.3%，且其中 前5位IGRAs为阴性的
IGRAs的敏感性和特异性
• 美国FDA认证临床实验数据： • 经培养确诊的结核病患者样本183例 • 敏感性95.6%（175∕183）
• 306例入伍新兵 • 特异性97.1%（297 ∕ 306）
• 2．IGRAs在HIV感染等免疫抑制或缺陷患 者LTBI诊断中的应用
活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断
1.PPD试验和IGRAs均可用于LTBI的诊断和追踪，若考虑到 PPD试验检测结果可能受卡介苗接种或NTM影响时，可对
PPD试验阳性者进一步采用IGRAs帮助确认；
(2)不宜采用IGRAs对大范围人群进行LTBI筛查；
(3)PPD试验仍是在健康人群中动态筛查LTBI的首选。
• (1)对HIV感染人群进行LTBI筛查，单用PPD试验的敏感度 不高，应单用IGRAs或联合使用PPD试验，在方法选择上 优先考虑细胞检测技术。
• (2)自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮质激素或 TNF-拮抗剂治疗前，应单用IGRAs或联合使用PPD试验 筛查LTBI。
• 上述2种检测方法的原理类似，检测技术和操作程序略有不同，均采 用MTB的RDl区基因编码抗原多肽作为特异性抗原，主要相对分子质 量为6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相对分子质量为10 000的培 养滤液蛋白(CFP一10)抗原或抗原多肽
T-SPOT试验
γ干扰素 检测阴性
γ干扰素 检测阳性
• 目前国际上较成熟的IGRAs有2种：
• (1)全血法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测全血中致敏T细胞再次 受到MTB特异性抗原刺激后释放的1．干扰素水平，称之为全血检测 或结核感染T细胞免疫检测；
• (2)细胞法：采用酶联免疫斑点技(ellzymelinkedimmunospot assay ，ELISPOT)测定在MTB特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中能 够释放1一干扰素的效应T细数量，称之为细胞检测或结核感染T细胞 检测。
• HIV阳性者 • 肺结核病人的接触者 • 拟进行抗TNF治疗的患者 • 拟透析的患者 • 拟行器官及造血细胞移植者 • 矽肺患者
结语 (1)IGRAs可用于诊断MTB感染，但不能区分活动性结核病和
LTBI，也不能准确预测LTBI发展为活动性结核病的风险
(2)IGRAs对疑似结核病患者具有辅助诊断作用，IGRAs阴性 结果对排除MTB感染有一定帮助
• 对活动性结核病的辅助诊断：PPD试验和IGRAs均无法区 分LTBI和活动性结核病患者。国内IGRAs的研究数据显示 其敏感度和特异度差别较大，敏感度为53％一98％，特 异度为60％～90％(或以上)，但多数文献报道的敏感度和 特异度>70％，提示IGRAs的特异度优于PPD试验。
IGRA用于诊断肺结核：深圳第三人民医院的结果
TB抗原多肽
T细胞
活化T细胞
γ 干扰素
30
IGRAs的结核特异免疫抗原
• SAT-6和CFP一10主要存在于MTB复合群，而在卡介苗和 大多数NTM中缺失，因此IGRAs的特异度较好。
• 但ESAT-6和CFP—10也存在于少数几种NTM中，如堪萨 斯分枝杆菌、海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄分枝杆 菌和胃分枝杆，故IGRAs阳性不能排除上述几种NTM感染 的可能。
IGRAs对儿童结核病的辅助诊断
• 儿童结核病的临床症状不典型，重症及肺外结核病比例较 高，且结核病患儿的细菌载量低，咳嗽反射和气管纤毛运 动能力差，病原学检查阳性率很低，PPD试验和IGRAs联 合诊断有一定的辅助作用。
IGRAs在LTBI诊断中的应用
• 1．活动性肺结核患者密切接触者和医务工 作者中LTBI的诊断
？ 中国的国情适用IGRAs吗
Y-干扰素释放试验在中国应用的建议
IGRAs可以有
• 考虑到我国肺结核患者中菌阴肺结核所占 比例较高，在诊断这类患者缺乏细菌学依 据时，IGRAs可发挥其辅助作用
• 应用于活动性结核病的辅助诊断
• 应用于LTBI诊断中
IGRAs用于体液或组织标本？
近几年来国内有IGRAs(仅限于ELISPOT方法)辅助诊断结核 性胸膜炎和结核性腹膜炎等肺外结核的报道，其中采用胸 腔积液和腹水等体液或组织标本检测的IGRAs的敏感度和 特异度高达90％以上，采用血液标本检测时IGRAs则并未 显示出优势。 此类研究报道数量不多，病例数也不足， • 且国家食品药品监督管理总局批准的IGRAs仅限于血液样 本的检测，即IGRAs对体液或组织标本的研究尚未经过充分 验证，不能得出可靠的结论。
结核患者 急性播散型肺结核 继发性肺结核 结核性胸膜炎 结核性脑膜炎 其他肺外结核
陈旧性肺结核 健康对照 新发肺结核密切接触者
例数 （n） 2446 58 1838 538 59 356 56 422 384
ELISPOT(+) n (%)
1846（75.47） 51（87.93） 1389（75.97） 428（79.55） 40（67.80） 275（77.25） 24（42.86） 65（14.20） 136（35.4）
• 卡介苗预防接种√ • 非结核分枝杆菌感染√ • LIBI √ • 活跃结核病√ • 结核病治愈、自愈后√
IGRAs阳性
• 卡介苗预防接种ⅹ • 大多数非结核分枝杆菌感染ⅹ • LIBI √ • 活跃结核病√ • 结核病治愈、自愈后√
• 2019年 全国结核病流行病抽样调查 • 结核分枝杆菌复合群 77.1%，非结核分枝杆菌22.9%
• 除HIV感染者外，类风湿关节炎等自身免疫性疾病、器官移植等免疫 功能受损患者及糖尿病等特殊患者，因其自身原因，或接受糖皮质激 素或肿瘤坏死因子 TNF拮抗剂等免疫抑制药物治疗导致免疫功能缺陷 ，这类患者是LTBI发展为结核病的高风险人群，对这类患者也有必要 进行LTBI筛查。
应行IGRAs和PPD检测的6种情况（WHO 2019）
PPD试验与IGRAs的对比
• PPD试验作为诊断MTB感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特 • 点，至今仍广泛使用，但该方法使用的PPD抗原成分复杂，易受卡介苗接种
和非结核分枝杆菌(nontuberculosismyeobacterium，NTM)的影响，特异 度较低，且对人免疫缺陷病毒(HIV)感染及重症疾病患者等免疫功能受损人群 的敏感度不足。
(3)IGRAs用于筛查LTBI时不受卡介苗接种的影响，较少受到 NHale Waihona Puke BaiduM感染的影响，但IGRAs不适用于流行病学筛查
(4)IGRAs在HIV感染人群中筛查LTBI的敏感度优于PPD试验 ，但在其他人群中的检测效率尚需进一步研究。
Thank you
谢谢！
Y干扰素释放试验(interferon．1 release assays ），
IGRA是检测结核分枝杆菌(MTB)特异性抗原刺激 T细胞产生的Y干扰素，以判断是否存在MTB的感 染。IGRAs可弥补PPD试验的不足，目前多个国 家已将其用于诊断MTB潜伏感染(1atent tuberculosis infection，LTBI)，我国部分医院也 已常规开展此项检测
• 荟萃分析结果显示，在HIV感染人群中，IGRAs的敏感度并未高于PPD试验， 但IGRAs(尤其是细胞检测)受CD4+T细胞数量的影响小于PPD试验，这可能 因为IGRAs检测过程已对单个核细胞数量进行了标准化，即在检测程序上消 除了淋巴细胞数量减少对检测结果的影响
PPD阳性对以下情况无法区分
• 2019年广州结核病流行病抽样调查：非结核分枝杆菌19.3%，且其中 前5位IGRAs为阴性的
IGRAs的敏感性和特异性
• 美国FDA认证临床实验数据： • 经培养确诊的结核病患者样本183例 • 敏感性95.6%（175∕183）
• 306例入伍新兵 • 特异性97.1%（297 ∕ 306）
• 2．IGRAs在HIV感染等免疫抑制或缺陷患 者LTBI诊断中的应用
活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断
1.PPD试验和IGRAs均可用于LTBI的诊断和追踪，若考虑到 PPD试验检测结果可能受卡介苗接种或NTM影响时，可对
PPD试验阳性者进一步采用IGRAs帮助确认；
(2)不宜采用IGRAs对大范围人群进行LTBI筛查；
(3)PPD试验仍是在健康人群中动态筛查LTBI的首选。
• (1)对HIV感染人群进行LTBI筛查，单用PPD试验的敏感度 不高，应单用IGRAs或联合使用PPD试验，在方法选择上 优先考虑细胞检测技术。
• (2)自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮质激素或 TNF-拮抗剂治疗前，应单用IGRAs或联合使用PPD试验 筛查LTBI。
• 上述2种检测方法的原理类似，检测技术和操作程序略有不同，均采 用MTB的RDl区基因编码抗原多肽作为特异性抗原，主要相对分子质 量为6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相对分子质量为10 000的培 养滤液蛋白(CFP一10)抗原或抗原多肽
T-SPOT试验
γ干扰素 检测阴性
γ干扰素 检测阳性
• 目前国际上较成熟的IGRAs有2种：
• (1)全血法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测全血中致敏T细胞再次 受到MTB特异性抗原刺激后释放的1．干扰素水平，称之为全血检测 或结核感染T细胞免疫检测；
• (2)细胞法：采用酶联免疫斑点技(ellzymelinkedimmunospot assay ，ELISPOT)测定在MTB特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中能 够释放1一干扰素的效应T细数量，称之为细胞检测或结核感染T细胞 检测。
• HIV阳性者 • 肺结核病人的接触者 • 拟进行抗TNF治疗的患者 • 拟透析的患者 • 拟行器官及造血细胞移植者 • 矽肺患者
结语 (1)IGRAs可用于诊断MTB感染，但不能区分活动性结核病和
LTBI，也不能准确预测LTBI发展为活动性结核病的风险
(2)IGRAs对疑似结核病患者具有辅助诊断作用，IGRAs阴性 结果对排除MTB感染有一定帮助
• 对活动性结核病的辅助诊断：PPD试验和IGRAs均无法区 分LTBI和活动性结核病患者。国内IGRAs的研究数据显示 其敏感度和特异度差别较大，敏感度为53％一98％，特 异度为60％～90％(或以上)，但多数文献报道的敏感度和 特异度>70％，提示IGRAs的特异度优于PPD试验。
IGRA用于诊断肺结核：深圳第三人民医院的结果
TB抗原多肽
T细胞
活化T细胞
γ 干扰素
30
IGRAs的结核特异免疫抗原
• SAT-6和CFP一10主要存在于MTB复合群，而在卡介苗和 大多数NTM中缺失，因此IGRAs的特异度较好。
• 但ESAT-6和CFP—10也存在于少数几种NTM中，如堪萨 斯分枝杆菌、海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄分枝杆 菌和胃分枝杆，故IGRAs阳性不能排除上述几种NTM感染 的可能。
IGRAs对儿童结核病的辅助诊断
• 儿童结核病的临床症状不典型，重症及肺外结核病比例较 高，且结核病患儿的细菌载量低，咳嗽反射和气管纤毛运 动能力差，病原学检查阳性率很低，PPD试验和IGRAs联 合诊断有一定的辅助作用。
IGRAs在LTBI诊断中的应用
• 1．活动性肺结核患者密切接触者和医务工 作者中LTBI的诊断
？ 中国的国情适用IGRAs吗
Y-干扰素释放试验在中国应用的建议
IGRAs可以有
• 考虑到我国肺结核患者中菌阴肺结核所占 比例较高，在诊断这类患者缺乏细菌学依 据时，IGRAs可发挥其辅助作用
• 应用于活动性结核病的辅助诊断
• 应用于LTBI诊断中
IGRAs用于体液或组织标本？
近几年来国内有IGRAs(仅限于ELISPOT方法)辅助诊断结核 性胸膜炎和结核性腹膜炎等肺外结核的报道，其中采用胸 腔积液和腹水等体液或组织标本检测的IGRAs的敏感度和 特异度高达90％以上，采用血液标本检测时IGRAs则并未 显示出优势。 此类研究报道数量不多，病例数也不足， • 且国家食品药品监督管理总局批准的IGRAs仅限于血液样 本的检测，即IGRAs对体液或组织标本的研究尚未经过充分 验证，不能得出可靠的结论。
结核患者 急性播散型肺结核 继发性肺结核 结核性胸膜炎 结核性脑膜炎 其他肺外结核
陈旧性肺结核 健康对照 新发肺结核密切接触者
例数 （n） 2446 58 1838 538 59 356 56 422 384
ELISPOT(+) n (%)
1846（75.47） 51（87.93） 1389（75.97） 428（79.55） 40（67.80） 275（77.25） 24（42.86） 65（14.20） 136（35.4）
• 卡介苗预防接种√ • 非结核分枝杆菌感染√ • LIBI √ • 活跃结核病√ • 结核病治愈、自愈后√
IGRAs阳性
• 卡介苗预防接种ⅹ • 大多数非结核分枝杆菌感染ⅹ • LIBI √ • 活跃结核病√ • 结核病治愈、自愈后√
• 2019年 全国结核病流行病抽样调查 • 结核分枝杆菌复合群 77.1%，非结核分枝杆菌22.9%
• 除HIV感染者外，类风湿关节炎等自身免疫性疾病、器官移植等免疫 功能受损患者及糖尿病等特殊患者，因其自身原因，或接受糖皮质激 素或肿瘤坏死因子 TNF拮抗剂等免疫抑制药物治疗导致免疫功能缺陷 ，这类患者是LTBI发展为结核病的高风险人群，对这类患者也有必要 进行LTBI筛查。
应行IGRAs和PPD检测的6种情况（WHO 2019）
PPD试验与IGRAs的对比
• PPD试验作为诊断MTB感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特 • 点，至今仍广泛使用，但该方法使用的PPD抗原成分复杂，易受卡介苗接种
和非结核分枝杆菌(nontuberculosismyeobacterium，NTM)的影响，特异 度较低，且对人免疫缺陷病毒(HIV)感染及重症疾病患者等免疫功能受损人群 的敏感度不足。
(3)IGRAs用于筛查LTBI时不受卡介苗接种的影响，较少受到 NHale Waihona Puke BaiduM感染的影响，但IGRAs不适用于流行病学筛查
(4)IGRAs在HIV感染人群中筛查LTBI的敏感度优于PPD试验 ，但在其他人群中的检测效率尚需进一步研究。
Thank you
谢谢！