植物组培快繁程序
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（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。
注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，
且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。
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一、供体植株的培养与取材
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
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1、外植体的来源
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。
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植自 株然
环 境 生 长
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温室控制条件下生长植株
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已离体培养植株
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在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
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⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。
植物组织培养快速繁殖技术应用
（4）移栽：在苗床（按照5 cm株距、8 cm行距）或钵中 用竹签打孔，将洗好的小苗插于孔中并将孔覆严，移栽完 毕用喷壶浇一遍水，以保证根系与基质充分接触。
5.苗期管理
（1）保持小苗的水分供需平衡：
在移植后5～7 d内，应给予较高的空气湿度条件，使叶面的 水分蒸发减少，尽量接近培养瓶的条件，让小苗始终保持挺拔的状 态。保持小苗水分供需平衡首先培养基质要浇透水，然后搭设小拱 棚，以减少水分的蒸发，并且初期要常喷雾处理，保持拱棚薄膜上 有水珠出现。
2.试管苗的特点
(1)生长细弱，角质层不发达； (2)叶片气孔数少，活性差； (3)叶绿体光合性能差； (4)根系不发达，吸收功能弱； (5)对逆境的适应性和抵抗能力差。
3.试管苗的驯化
驯化目的：提高试管苗对自然条件的适应性，促其健壮， 最终提高移栽成活率。 驯化原则：从温度、光照、湿度及有无杂菌等环境因素考 虑。驯化开始的数天内，创造与培养环境条件相似的条件； 后期则创造与预计栽培条件相似的条件，逐步适应。 驯化方法：即炼苗，将试管苗从培养间转移至驯化温室， 不开口自然光下放置7～10d，然后打开封口材料继续放置 1～2d。
（２）培养基中去掉细胞分裂素，加入适量的生长素。 （CTK/IAA比值低时有利于生根）
（３）生根培养基的蔗糖用量可适当减少，用1.5%～ 2%的浓度，以减少试管苗对异养条件的依赖。
(4）提高光照强度，促进光合作用。
（七）试管苗驯化与移栽
1.试管苗生存环境与自然环境的差异 2.试管苗的特点 3.试管苗的驯化 4.试管苗的移栽 5床准备：草本植物移栽于苗床（宽度1m，长度根 据温室跨度而定）中，直接在苗床中铺上栽培基质（如蛭 石、珍珠岩、草炭等），浇透水即可。木本植物移栽于塑 料营养钵中，将营养钵排于苗床中，钵中装填基质至距钵 上缘1 cm处，最后也浇透水。
组培苗的快速繁殖注意事项
组培苗的快速繁殖注意事项组培苗是利用植物组织培养技术进行快速繁殖的一种方法，可以快速繁殖植物并保持其遗传纯度。
在进行组培苗快速繁殖时，需要注意一些技术细节和操作注意事项，以保证组培苗的快速繁殖效果和质量。
下面将从材料准备、操作技术和环境控制等方面介绍组培苗快速繁殖的注意事项。
首先，材料准备是组培苗快速繁殖过程中非常重要的一步。
首先要准备好无菌操作所需的培养基、器皿和其他实验室用具。
培养基的配制需要严格按照配方比例，并在无菌条件下进行。
同时，培养基的pH值、营养物质和植物生长调节物质的选择和添加量也需要进行精确控制。
器皿（如培养皿、试管等）要严格进行高压蒸汽灭菌，以确保无菌操作环境的净化。
另外，在进行组培苗快速繁殖时，还需要准备良好的植物母株组织和植物激素等材料。
其次，在进行组培苗快速繁殖的过程中，需要严格掌握操作技术。
无菌操作是组培苗快速繁殖中最基本的操作技术之一，要求操作人员具有良好的无菌操作技能，并在无菌工作台或无菌室中进行操作。
在组培苗快速繁殖的过程中，还需要掌握植物组织的选择和切割技术、培养基的添加和更换技术、植物激素的使用和调节技术等。
在操作过程中，需要严格控制操作条件和操作步骤，避免外界微生物的侵入和污染。
另外，环境控制也是组培苗快速繁殖过程中需要注意的重要方面。
在进行组培苗快速繁殖时，要求在恒温、恒湿和良好的光照条件下进行，以促进植物组织的生长和分化。
在无菌室中，需要保持空气流通，并对操作区域进行紫外线消毒，确保操作环境的清洁和无菌。
在培养箱中，需要定期对空气进行消毒，控制温湿度和光照条件，以保证组培苗的正常生长和繁殖。
总的来说，组培苗的快速繁殖需要在材料准备、操作技术和环境控制等方面严格把关，确保操作过程的无菌和操作技术的精准。
只有做到这些，才能获得高质量的组培苗，并为植物生产和繁殖提供优良的材料基础。
希望通过以上介绍，能够帮助读者们更好地掌握组培苗快速繁殖的注意事项，并在实际操作中取得更好的繁殖效果。
组培快繁的主要流程及其技术要点
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植物快繁最常用的一种方法
植物快繁最常用的一种方法植物快繁是指通过一定的技术手段，使植物迅速繁殖和繁衍后代的过程。
这种方法在园艺、农业以及科学研究中得到了广泛应用，能够在较短的时间内大量繁殖植物，提高生产效率和遗传资源的保存。
下面将介绍植物快繁最常用的一种方法——组织培养技术。
组织培养技术是植物快繁中的一种常见方法，它通过利用植物组织的不同性质和特点，将组织、细胞、细胞器等在无菌条件下进行培养和繁殖，从而实现快速繁衍。
主要包括组织培养、愈伤组织培养和悬浮细胞培养等。
首先是组织培养。
这种方法是指以植物的组织培养为基础，通过无菌条件下的培养和营养物质的供给，将植物的种子、茎、根等组织转化为一个完整的植株。
这种方法不仅能够繁殖大量的植株，还能保持原植株的遗传特征。
常用的组织培养技术包括离体培养、激素处理、代谢工程等。
其次是愈伤组织培养。
这种方法是在组织培养的基础上，通过外界刺激使植物的细胞产生异常增殖和分化的现象，形成大量的愈伤组织。
愈伤组织具有分化、分裂和形成新的器官的潜能，可以大量繁殖植物，并且对生物技术研究有着重要的应用价值。
常用的愈伤组织培养方法包括切口愈伤组织培养、化学诱导愈伤组织培养、激素诱导愈伤组织培养等。
最后是悬浮细胞培养。
这种方法是在液体培养基中，将植物的细胞转化为悬浮细胞，通过转液培养来繁殖植物。
悬浮细胞培养的优点在于可以快速繁殖大量植物细胞，容器利用率高，也能避免污染的产生。
悬浮细胞培养主要应用于药物、抗体和生物多样性保护等领域。
总结一下，植物快繁最常用的一种方法是组织培养技术。
通过组织培养、愈伤组织培养和悬浮细胞培养等多种技术手段，可以在无菌条件下快速繁殖植物，提高生产效率和遗传资源的保存。
这些方法在园艺、农业以及科学研究中具有重要的应用价值，促进了植物的繁殖和研究。
植物组培快繁技术流程
植物组培快繁技术流程
1.组织选择
选择健康、无病虫害的植物材料作为组织培养的起始材料。
根据不同的植物种类和培养目标，选择适当的组织或器官，如叶片、茎段、花蕾、愈伤组织等。
2.消毒处理
将选取的组织或器官进行清洗，去除表面的尘土和污物。
然后将组织放入含有消毒剂的容器中进行表面消毒，消毒剂可以使用70%酒精或0.1%升汞等。
消毒完成后，用无菌水冲洗干净。
3.培养基制备
根据不同的植物种类和培养阶段，选择适当的培养基配方。
培养基是组织培养中提供营养和生长调节物质的介质。
制备好的培养基应进行灭菌处理，以保证无菌条件。
4.组织接种
将消毒处理后的组织放入已准备好的培养基中，确保组织与培养基充分接触。
接种过程中要保持无菌操作，防止污染。
5.培养条件控制
控制好组织培养的条件，包括温度、光照、湿度等。
不同植物和不同的培养阶段对光照、温度等条件的要求不同，需根据实际情况进行调整。
6.继代培养
在适宜的培养条件下，组织开始生长，经过一段时间的培养后，需要进行继代培养，即将已经生长的组织进行分离、切割或分株，重新接种到新的培养基上，以维持组织的生长。
7.壮苗培养
为了提高移栽成活率，在移栽前需要进行壮苗培养。
根据需要调整培养条件，
促进幼苗的生长和发育。
8.移栽
当幼苗长到一定大小时，可以进行移栽。
移栽前需要对幼苗进行适当的炼苗处理，以提高其适应能力。
然后将幼苗从培养基中取出，移植到适宜的栽培环境中。
一种红杉组培快繁体系的建立方法
一种红杉组培快繁体系的建立方法红杉是一种常见的针叶树种，其珍贵的木材在建筑、家具和造船等领域有着广泛的应用。
为了满足市场需求，红杉的快速繁殖成为了一项重要的研究课题。
在这篇文章中，我们将介绍一种建立红杉组培快繁体系的方法，为相关研究人员提供指导意义。
一、材料准备：1. 红杉种子：选取健康的红杉种子作为起始材料，确保种子的品种纯度和活力。
2. 植物生长调节剂：选用适合红杉生长的植物生长调节剂，以促进材料的生长和发育。
3. 培养基和添加物：配制出适合红杉组培的培养基和添加物，提供适当的养分和生长环境。
二、种子消毒与萌发：1. 种子表面消毒：将红杉种子浸泡在含有消毒剂的溶液中，去除种子表面的细菌和真菌。
2. 种子萌发：将消毒后的种子分别放置在含有生长调节剂的培养基上，利用良好的生长条件促使种子萌发。
三、愈伤组织的诱导与分化：1. 愈伤组织诱导：将种子萌发后的幼苗分离，用植物生长调节剂处理后，诱导愈伤组织的生长。
2. 愈伤组织分化：将诱导得到的愈伤组织转移到含有适当濃度植物生长调节剂的培养基上，促进愈伤组织的分化。
四、再生植株的生长和繁殖：1. 再生植株的培养：调整培养基中植物生长调节剂的浓度，促使愈伤组织分化产生正常的植株。
2. 再生植株的繁殖：通过分化得到的再生植株，进行体细胞胚胎发生、离体芽发生和愈伤组织分化等繁殖方式，实现红杉的快速繁殖。
五、扩大培养与实际应用：1. 扩大培养：在实验室条件下，将再生植株进行扩大培养，提高红杉的生产规模。
2. 实际应用：将培养得到的再生植株进行适当的土壤适应性试验，验证其在实际生产中的适应能力和生长发育情况。
这种红杉组培快繁体系的建立方法，提供了一种有效的方式来快速繁殖红杉。
通过科学地进行种子消毒与萌发、愈伤组织诱导与分化以及再生植株的生长和繁殖，可以大幅度提高红杉的繁殖效率和质量。
同时，通过扩大培养和实际应用，可以将其推广应用于红杉的商业化生产中。
总之，这种红杉组培快繁体系的建立方法对于满足市场需求、实现红杉的快速繁殖具有重要的指导意义。
植物快繁技术
植物快繁技术绪论1、植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
又称为植物离体培养。
2、无菌：是指使培养皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养器皿中正常生长发育。
3、外植体：植物组织培养中，使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。
4、愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。
5、组织培养的特点（1）整个过程无菌（2）多数利用成分完全确定的人工培养基，植物材料处于异养（3）培养材料可以是器官、组织、细胞，处于离体状态，在不同水平表现细胞全能性（4）可形成克隆，或达到其他目的（5）在封闭容器中进行（6）环境温度、光照都是人为设定6、组织培养的研究类型（1）组织培养（2）器官培养（3）胚胎培养（4）细胞培养（5）原生质体培养7、植物组织培养的应用n 植物离体繁殖n 无病毒苗木培育n 培育新品种或创制新物种n 次生代谢物生产n 植物种质资源的离体保存n 人工种子8、植物组织培养的形成与发展▪1902年，Haberlandt发表了植物组织培养的第一篇论文，提出了植物细胞全能性的观点。
▪1934年，White首次建立了第一个活跃生长并能继代增殖的无性繁殖系。
▪1952年，Morel获得第一株植物脱毒苗▪1978年，Melchers获得了第一个属间体细胞杂种—“Pomato”。
第一章实验室及基本操作1、常用的灭菌方法n 高压蒸汽灭菌n 干热灭菌n 化学药剂灭菌n 紫外灯灭菌n 过滤除菌2、高压蒸汽灭菌法▪使用高压锅前添加足够水▪锅内气压太高会引起部分有机物的分解▪灭菌后气压表归零之前不要打开锅盖▪橡胶等有机物会因高温高压而变性▪不要堵塞排气孔，否则会引起危险3、无菌操作▪实验之前30min将超净工作台的紫外灯打开，进行灭菌。
chapter3 植物组培快繁和脱毒技术
根形成
根的起源有两种： • 一种是起源于苗基部切口处形成的愈伤
组织上，由愈伤组织内部形成； • 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织
的上部，直接起源于中柱鞘细胞，由于 发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源
于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
细胞分裂素可打破顶端优势对腋芽 的抑制作用，组培中常添加细胞分裂素 促进腋芽的不断分化和生长，逐渐形成 芽丛；
不定芽（除现有的芽之外，在任何 器官上的通过器官发生重新形成的芽） 形成，一般使用细胞分裂素高于生长素 的配比，两者配比接近1的也用得很多；
• 一般在含丰富还原氮的培养基上 诱导胚状体形成，加生长素，特 别是2，4——D能诱导胚状体发 生，然后转移到降低浓度或没有 生长素的培养基上使其成熟 。
增殖方式
腋芽增殖 不定芽增殖 体细胞胚增殖 愈伤组织增殖
腋芽增殖
• 培养方法简单，能高度保持遗传 稳定性，能长期继代增殖。
• 一般不需要添加外源激素，即使 加也要严格控制浓度，防治产生 愈伤组织。
不定芽增殖
• 从现存的芽以外 的任何器官、组 织上通过器官发 生重新形成芽。
• 繁殖系数高 • 遗传稳定性较好 • 继代次数有限
离体快繁的一般技术
•培养材料选择及消毒 •材料的初代培养(无菌母株制备) • 试管苗的增殖与继代培养（不定芽增殖） • 试管苗的生根与移栽（完整植株形成）
• 再生植株鉴定
芦荟的植物组织培养过程
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1、培养材料选择及消毒 1）、培养材料的选择 • 种和品种选择
组培快繁的主要操作流程和技术要点
组培快繁的主要操作流程和技术要点1. 供体材料的选择和消毒
- 选择健康、无病的植株作为供体材料
- 对供体材料进行充分消毒,去除污染源
2. 无菌操作和接种
- 在无菌条件下操作,避免污染
- 将消毒后的外植体接种到培养基上
3. 培养条件的控制
- 严格控制光照、温度、湿度等环境条件
- 保持培养基的pH值和营养成分适中
4. 脱分化和诱导
- 通过添加不同植物生长调节剂,诱导外植体脱分化
- 形成不定芽或胚状体
5. 增殖和生根
- 对脱分化后的组织进行增殖培养
- 添加适当auxin诱导生根
6. 移植和驯化
- 将体细胞系移植到无菌基质中
- 逐步驯化,使幼植株适应自然环境
7. 扩繁和种苗生产
- 将驯化的植株扩繁,大量繁殖种苗
- 严格检疫,确保种苗质量
组培快繁技术需要严格无菌操作,合理控制培养条件,精心调节植物生长素水平,从而实现植物组织的脱分化、增殖和再生,快速获得大量优质种苗。
第二章 植物组织培养快速繁殖
第二章：植物组培培养快速繁殖目的要求：1.掌握组织培养实验室的设计；掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法；2.掌握培养基的种类、特点；掌握基本培养基的配方；一般掌握培养基的组成成分和适宜的剂量；掌握培养基母液和常用培养基的配制方法和步骤；熟练掌握培养基的灭菌方法；一般掌握培养基的筛选办法。
3.了解组培快繁的类型，重点掌握无菌培养物的建立。
4.掌握植物组培快繁中常见问题的解决措施。
教学重点、难点：基本培养基的配方；培养基母液和常用培养基的配制方法和步骤；培养基的灭菌方法；培养基的筛选办法。
第一节植物组培快繁的工厂化生产设施在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。
实验室的大小取决于工作的目的和规模。
以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。
要做到无菌的条件，首先需要一定的设备、器材和用具。
一个标准的组织培养实验室应当包括：普通实验室（洗涤室、培养基配制室）、无菌接种室、恒温培养室、观察培养情况并作记录的细胞学实验室等。
在实际中可结合可行条件，合并一部分。
实验室的大小和设置可根据自己的工作性质和规模自行设计，其中最主要的是无菌操作室和恒温培养室。
一、植物组培快繁场地设计（一）组培快繁场地的选择无菌环境，周围安静、无污染，阳光充足，无高大建筑物遮挡，交通便利。
（二）组织快繁厂房的设计1.药品贮藏间面积10~15m2，需终年保持相对较低的温度和较好的通风干燥条件，同时需要遮光。
2.药品配制间面积15m2左右，需抗盐酸、牢固、平稳，具有较好抗震性的试验台。
3.玻璃器皿洗涤间（cleaning room）面积20m2左右，本室主要用于组织培养所需玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。
白芨组培快繁技术实例附配方
白芨组培快繁技术实例附配方白芨（学名：Habenaria davidii Franch.）是中国特有的兰科植物，被广泛用于中药材的提取和制备。
然而，由于其生长缓慢和繁殖困难，其野生种群数量逐渐减少，遭受到了较大的威胁。
为了保护和利用白芨资源，科学家们开展了相关的组培快繁技术研究。
本文将介绍白芨组培快繁技术的实例，并附上配方。
1.材料准备：选择无病虫害、生长良好的白芨植株作为组培材料。
将供试植株分为茎段和苗叶两种材料。
2.消毒处理：将茎段和苗叶分别放入含有3%次氯酸钠的消毒液中浸泡10-15分钟，然后用蒸馏水洗涤数次，以去除残留消毒剂。
3.激素配方：选择适当的激素配方以促进白芨组织的快速增殖和分化。
一般常用的激素有3-6-芳基-1,2,4-三嗪（KT）和α-萘乙酸（NAA）。
具体的激素配方需要根据具体实验目的和试验条件进行调整。
4. 培养条件控制：将消毒处理后的茎段或苗叶放入含有适当培养基和激素的培养瓶中，并放置在光照适宜的培养箱中。
一般培养基的配方为MS基本培养基加糖和琼脂，pH调节为5.8-6.0，培养温度为25-28℃，光照强度为3000-5000lx，光照周期为12小时光照/12小时黑暗。
通过以上操作，可实现白芨组培快繁技术，实验结果表明，白芨茎段和苗叶在培养基中均能迅速产生小芽和新根，并继而分化为新的植株。
组培快繁技术不仅可以大幅度提高白芨的繁殖速度和繁殖效率，而且可以保持良好的遗传性状。
配方如下：1.基本培养基（MS培养基）：-氮源：硝酸铵0.825g/L，硝酸钾1.65g/L-磷源：磷酸二钠二水合物0.17g/L-钾源：硫酸钾0.085g/L-钙源：硝酸钙0.325g/L-镁源：硫酸镁七水合物0.186g/L-铁源：硫酸亚铁0.025g/L-锰源：硫酸锰0.0001g/L-硼源：硼酸0.01g/L-溶液pH调节为5.8-6.02.快繁培养基：-将基本培养基添加糖（蔗糖）30-40g/L，琼脂8g/L通过以上配方和培养条件的控制，可以实现白芨组培快繁的技术，有效地提高了白芨的繁殖速度和繁殖效率，为其保护和利用提供了可行的方法。
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3、材料取材
⑴材料选择 培养材料应选择有代表性的主要植 物、选择性状优良的种质或特殊的基因 型。 快速繁殖时应在植株生长的最适时 期取材，如花药培养应在花粉发育到单 核期取材。
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⑵取材 从生长健壮的无病虫害的植株上选取
发育正常的器官和组织。最好采用茎尖 ，后代性状较稳定，携带细菌较少。
即用不加固化剂的液体培养基培养 植物材料的方法。由于液体中氧气含量 较少，所以通常需要通过搅动或振动培 养液的方法以确保氧气的供给，采用往 复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速 度一般为50～100r/min，这种定期浸没 的方法，既能使培养基均一，又能保证 氧气的供给。
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3、外植体的接种
（1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或 解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成 0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。 微茎尖要剥成只含l—2片幼叶的茎尖大小等。在 接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着， 避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并 将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。
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（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。
注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，
且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。
（4）外植体放入超净工作台内，置 70-75%酒精中5-60 秒，0.1％氯化汞610分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15 分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌时 需进行搅动。
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常用灭菌药剂的使用和效果
灭菌剂
次氯酸钠 次氯酸钙 漂白粉 氯化汞 酒精 过氧化氢 溴水 硝酸银 抗菌素
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2、表面灭菌
（1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、 口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清 洗干净，操作前再用70%酒精或消毒 剂擦洗双手。
（2）操作期间双手和台面常用70% 酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用 前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启 风机。
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（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊 子）可放入70-75%酒精中，使用时需 火焰灼烧灭菌，冷却后使用。
选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间 。胚胎培养或脱毒在0.5cm以下。材料 太大易污染，材料太小难于成活。
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二、外植体的灭菌与接种
1、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去
掉不需要部分，将准备使用的植物材 料（外植体）在流水中冲洗20-60分 钟，备用。如特别不洁的外植体，可 先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟 ，再用流水冲洗干净。
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⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。
⑶控制湿度 给供体植株浇水时应从
根部给水，避免从上部浇水，以免上
部形成易于病原侵染的湿度环境；尽
可能降低温室湿度；取材前尽可能保
持植株干爽。
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。
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植自 株然
环 境 生 长
植物组培快繁程序
温室控制条件下生长植株
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已离体培养植株
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在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
第三章 植物组培快繁程序
植物快速繁殖就 是应用组织培养技术, 快速繁殖名优特新品 物，使其在较短时间 内繁衍较多的植株。 快繁是当前植物细胞 组织培养中应用最广 泛，又最有效的方法 之一。
植物组培快繁程序
主要内容
一、供体植株的培养与取材 二、外植体的灭菌与接种 三、培养 四、驯化移栽 五、组培快繁计划安排与实施
使用浓度（%）
9—10 2
饱和浓度 0.1—1 70—75 10—12
1—2 1
4—50mg/L
清除的难易 消毒时间 效 果
易 易 易 较难 易 最易 易 较难 中
5—30 5—30 5—30 2—10 0.2—2 5—15 2—10 5—30 30—60
很好 很好 很好 最好
好 好 很好 好 较好
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三、培养
1、培养含义
指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件) 里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
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2、培养方法
(1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材
料的方法。是现在最常用的方法。虽然 该方法设备简单，易行，但养分分布不 均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒 现象发生。 (2)液体培养法
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一、供体植株的培养与取材
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
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1、外植体的来源
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某些多年生植物或特殊材料，必须取 自自然生长的植物，就需要尽可能避免 使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中 的植物。对于培养过程中可能出现内生 菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
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2、供体植株的管理 取自室外的外植体材料，供体植株 的管理十分重要，这与外植体培养时的 污染率密切相关。植株管理中应注意： ⑴避免昆虫危害 许多昆虫如蚜虫、 螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒 介，会引起植物组织的潜在感染。