唾液淀粉酶活性测定1

一、实验原理：

酶促反应速率受多种元素的影响，如温度、PH、激活剂和抑制剂等。在温度等其他条件相同时，唾液淀粉酶的活性在最适PH处达到最大，在最适PH的反应体系中，淀粉被消耗最多，剩余的淀粉与碘液显色最浅，在660nm波长吸光度也最小，最后以吸光度值为纵坐标，PH值为横坐标作图，从而得到唾液淀粉酶的最适PH值。

二、实验仪器：

吸量管，试管，试管架，小烧杯，722型分光光度计，恒温箱，洗耳球

三、实验试剂：

0.01mol/L碘液，0.2mol/L Na2HPO4，0.2mol/L NaH2PO4，2.5g/L淀粉溶

液，唾液，蒸馏水

四、实验思路：

相同时间内，在温度，酶浓度相同，PH不同的条件下，唾液淀粉酶的活性不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量的碘液作用所显示的颜色

也不同，并通过测定吸光度，得出唾液淀粉酶的最适PH范围。

五、操作步骤：

1、唾液的获取及稀释以备取者蒸馏水漱口2～3次，然后含大口蒸馏水于口腔内并反复做咀嚼动作，一段时间后以烧杯承接唾液；而后分别进行4、8、1

2、16、20倍数稀释；

2、唾液稀释液稀释倍数的确定取若干洁净试管，按表1添加试剂并进行实验操作

表1 唾液稀释液稀释倍数的确定（用量:ml）

试剂 1 2 3 4 5 空白管

唾液稀释液倍数/2ml 20 40 60 80 100 0 淀粉溶液 1 1 1 1 1 1

振荡混匀后37℃水浴10分钟

碘液/滴 2 2 2 2 2 2

振荡混匀后观察颜色变化，以“＋”表示颜色深浅

颜色变化深浅

由此表中数据确定稀释倍数为______的唾液稀释液作为下一步步骤试剂

3、淀粉用量的确定按表2进行操作

表2 淀粉用量的确定（单位：mL）

试剂 1 2 3 4 5 空白唾液稀释液（倍数已定） 2 2 2 2 2 2 2.5g/L淀粉溶液0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0

蒸馏水0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 1

混匀做10分钟水浴操作后，滴加碘滴2滴观察颜色变化深浅，以“＋”表示颜色变化深浅

由表中数据确定淀粉用量为______mL，作为下一步反应试剂参数

4、不同PH的NaH2PO4–Na2HPO4缓冲液配制按照表2进行操作

表3 不同PH的Na2HPO4–NaH2PO4缓冲液配制表(用量:ml) PH. 0.2mol/LNa2HPO4溶液0.2mol/LNaH2PO4溶液

5.8 0.40 4.60

6.0 0.615 4.375

6.2 0.925 4.075

6.4 1.325 3.675

6.6 1.875 3.125

6.8 2.45 2.55

7.0 3.05 1.95

7.2 3.60 1.40

7.4 4.05 0.95

7.6 4.35 0.65

7.8 4.575 0.425

8.0 4.735 0.275

5、唾液淀粉酶最适PH的测定按表3添加试剂，进行实验操作

【实验数据】

表4—1 唾液淀粉酶活性的测定（单位：ml）

试剂 1 2 3 4 5

淀粉

唾液稀释液 2 2 2 2 2

缓冲溶液相应PH（5mL） 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8

水浴10分钟后，滴加碘液2滴，混匀后测吸光度A660

表4—2 唾液淀粉酶活性的测定（单位：mL）

试剂 6 7 8 9

淀粉

唾液稀释液 2 2 2 2

缓冲溶液相应PH（5mL）7.0 7.2 7.4 7.6

水浴10分钟后，滴加碘液2滴，混匀后测吸光度A660

六、结果：

由表4中实验数据可知唾液淀粉酶在PH为_______时活性最高。七．讨论：