葛根素注射液浓度

葛根素注射液浓度

葛根素（Puerarin）广泛应用于缺血性心脑血管疾病的治疗。随着临

床的广泛应用，发现该药有溶血反应、过敏反应和肝、肾损害等严重

不良反应［1～10］。在国家药品不良反应监测中心病例报告数据库中，相关葛根素注射剂的严重不良反应报告以急性血管内溶血为主。葛根

素注射剂导致急性血管内溶血具有发病急、进展快、病情危重的特点［11，12］。中国政府药品主管部门（药品食品监督管理局）已多次

发出增强管理的通告，注意葛根素注射给药引起溶血的风险评价，并

增强临床监控。在我们前期研究中发现，葛根素注射液在高浓度时，

24条Beagle犬红细胞的溶血概率为70％左右。本研究通过体外溶血

实验，探讨葛根素注射液对红细胞膜脆性的影响及葛根素注射液浓度

对红细胞溶血率的关系。现报道如下。

1器材

1.1受试药物葛根素注射液，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，规格：含50mg/mlPuerarin。

1.2动物白化豚鼠，雌雄各半，体重250～400g，由广州中医药大学

实验动物中心提供，合格证号：2003A002。饲养环境：室温25～27℃，相对湿度60%～78%。Beagle犬24只（体重6～8kg，雌雄各半），由

广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。饲养环境：室温25～27℃，相对湿度70%～80%。

物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医

院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX－150B生化

培养箱，上海康华生化仪器制造厂。

2方法［13］

2.1热诱导法考察葛根素注射液对红细胞膜稳定性的影响考察葛根素

注射液对beagle犬RBC的影响：将6种浓度葛根素注射液（氯化钠注

射液稀释）分别与0.05ml50%的beagle犬RBC悬液装于洁净试管中，

混合，摇匀，置50℃生化培养箱保温30min，同时设阴性(氯化钠注射液)及阳性(注射用水)对照管。育毕,置冰浴冷却，2000r/min离心

10min，吸取上清液,紫外分光光度计比色，于540nm下测吸光度,计算RBC溶血率。溶血率（%）＝（样品管的吸光度－阴性对照管的吸光度）/（阳性对照管－阴性对照管的吸光度）×100%。计算平均溶血率，结

果见表1及图1。

2.2葛根素注射液对红细胞的溶血作用

2.2.1葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用取狗血10ml，用

牙签持续挑去纤维蛋白原，成脱纤血，用NS稀释，摇匀，离心，弃上

清液。沉淀的红细胞再用NS反复洗涤2～3次，至离心后上清液无色。将所得红细胞按其体积用NS配成2％悬液（当天使用，使用时摇匀）。取试管6支，标号。①～④号管分别加入5％的葛根素注射液0.1，

0.2，0.4，0.8ml，加NS稀释至2.5ml，涡旋15s使其充分溶解。各管葛根素终浓度分别为：1，2，4，8mg/ml。5号加2.5ml的NS（做阴性

对照管）；上述5管与2％的红细胞悬液2.5ml混合，摇匀。6号管加

入2％的红细胞悬液2.5ml，离心，除去NS，加注射用水溶解至5ml，

摇匀，作为阳性对照管。将各管置于37℃恒温箱孵育6h。然后观察各

管的溶血水准及血细胞的凝集；取上清液，离心，用紫外分光光度计

于波长540nm下测定吸光度（OD值）。按公式：溶血率（％）＝（样

品管OD值－阴性对照管OD值）/（阳性对照管OD值－阴性对照管OD 值）×100%，计算各管的溶血率。此实验用不同Beagle犬细胞重复4次，求4次结果的平均值。结果见表2及图2。

2.2.2葛根素对豚鼠红细胞的溶血作用取健康豚鼠6只，心脏采血

3ml，用肝素抗凝。1500r/min离心10min，除去血清，用NS稀释，摇匀，离心，弃上清液。沉淀的红细胞再用NS反复洗涤2～3次，至离

心后上清液无色。所得红细胞按其体积用NS配成50％悬液（当天使用，使用时摇匀）。每例动物血样取试管8支做实验，标号。1～6号管分

别加入5％的葛根素注射液0.025，0.05，0.1，0.15，0.20，0.25ml，加NS稀释至2.45ml，涡旋15s使其充分溶解。各管葛根素终浓度分别

为：0.5，1，2，3，4，5mg/ml。7，8号分别加NS、注射用水2.45ml

作阴性及阳性对照管。上述8管均加入豚鼠50%红细胞悬液0.05ml并

混匀，置入37℃恒温箱孵育6h，然后观察各管的溶血水准及血细胞的

凝集；取上清液，离心，于540nm下测定吸光度（OD值）。按公式：

溶血率（％）＝（样品管OD值－阴性对照管OD值）/（阳性对照管OD 值－阴性对照管OD值）×100%，计算豚鼠红细胞加入不同浓度葛根素

试液孵育后的平均溶血率。结果见表3及图3。

3结果

3.1高温下葛根素注射液对红细胞膜稳定性的影响结果见表1及图1。

表1高温下不同浓度的葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用（略）

图1高温不同浓度葛根素注射液对Beagle犬红细胞溶血率的影响（略）

结果显示：热诱导下，不同浓度的葛根素注射液均能加速红细胞的破损，随着浓度的增大红细胞的溶血率显著增大，相关系数r=0.9597。

提示高温条件下葛根素注射液可降低红细胞膜的稳定性，导致溶血率

增大。

3.2葛根素注射液对不同动物红细胞的溶血作用结果见表2～3及图

2～3。

表2不同浓度的葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用（略）

图2不同浓度的葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用（略）

表3不同浓度的葛根素注射液对豚鼠红细胞的溶血作用（略）

图3不同浓度的葛根素注射液对豚鼠红细胞的溶血作用（略）

葛根素注射液均未引起Beagle犬红细胞和豚鼠红细胞出现凝集现象，但一定浓度下可引起明显溶血。以上结果显示：葛根素对Beagle犬红