秋葵多糖的提取及单糖组分的分析

秋葵多糖的提取及单糖组分的分析作者：侯晓杰王喜萍周铭雪王爽

来源：《现代食品·下》2019年第04期

摘要：利用超声波的提取法优化秋葵中的多糖提取工艺，对其中单糖组分进行HPLC法分析。结果表明，秋葵多糖的最佳提取方法为：温度为70 ℃、时间15 min、料液比1∶40，多糖得率最高，为6.88%。秋葵中各单糖占总糖含量为：鼠李糖34.44%、葡萄糖醛酸

24.12%、甘露糖10.84%、葡萄糖4.68%。

关键词：秋葵;多糖;提取;单糖

Abstract：With okra as raw materials， the use of ultrasonic assisted extraction， the extraction process of;polysaccharide in okra are optimized， the HPLC method for determination of okra monosaccharide composition of;polysaccharides， the results showed that the optimum conditions of okra polysaccharides is temperatureis 70 ℃， time of 15 min，;and solid-liquid ratio of 1∶40，polysaccharide yield the highest， 6.88%. The contents of rhamnose， glucuronic acid， mannose and glucose were 34.44%， 24.12%， 10.84% and 4.68%， respectively.Key words：Okra; Polysaccharide; Extract; Monosaccharide

中图分类号：TS201.2

秋葵，俗称羊角豆，隶属于锦葵科秋葵属[1]，是常见的一种蔬菜，营养价值较高，含有十余种氨基酸，多种维生素及矿物质等[1]，主要特点就是含有较高多糖类[2]，对减肥、降血脂等有预防作用[3]，同时具有较强的抗氧化活性[4]，经常食用，可以增强人体的免疫力。现在对秋葵的利用只限于家庭式各种蔬菜烹调，尚处于初加工阶段，为秋葵的精深加工及利用[5]，采用超声波辅助提取法，优化秋葵中的多糖提取工艺，并对其中的单糖组成及含量进行分析[6]，充分发挥秋葵的保健功能，对秋葵产品开发具有指导意义。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

秋葵，购于吉林市大润发超市;单糖标准品葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖，均购自贵州迪大科技有限责任公司;PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）、乙醇、氢氧化钠、三氟乙酸、磷酸二氢钾等均为分析纯，乙腈为色谱纯。

1.2 仪器与设备

1260 Infinity高效液相色谱仪（Agilent Technologies）、Cary60紫外可见光分光光度计（Agilent Technologies）、SB25-12DT超声波清洗机（宁波新艺超声设备有限公司）、电热板、干燥箱、离心机、水浴锅等。

1.3 实验方法

1.3.1 秋葵多糖的提取

采用水提醇沉的多糖提取方法，取新鲜的秋葵清洗干净后，在干燥箱内干燥、粉碎、过40目筛，精确称取1.000 0 g干燥后的样品，置于250 mL三角瓶内，按设定的超声温度、超声时间、料液比将三角瓶放入超声波清洗器内，按设定的温度、时间进行提取，然后以4 000 r·min-1离心10 min，取其上清液及胶黏物质，加入等体积的无水乙醇，过夜沉淀其多糖，再4 000 r·min-1离心10 min，然后去除上清液，烘干沉淀物并定容于100 mL容量瓶中，再取1 mL 于50 mL容量瓶中定容，采用苯酚-硫酸比色法，于波长485 nm处测定样品吸光度，根据葡萄糖标准曲线计算多糖含量，此提取过程得到的是秋葵粗多糖（Raw polysaccharides，即RPS）。在单因素实验结果基础上，进行正交试验，确定秋葵多糖提取的最佳工艺条件。

1.3.2 秋葵多糖得率的计算

E（%）=M1/M2×100%式中：E-粗多糖得率;M1-粗多糖质量;M2-秋葵质量。

1.3.3 秋葵多糖中单糖组成分析

1.3.3.1 秋葵多糖的水解

精确称取秋葵多糖100 mg于PE瓶中，加入4 mL 24 mol·L-1三氟乙酸溶解，封管，在

80 ℃下水解8 h，离心取上清液用0.3 mol·L-1的氢氧化钠溶液调节pH至中性。然后进行PMP 衍生化，采用HPLC法对秋葵多糖中单糖组成进行分析。

1.3.3.2 单糖的衍生化标记

分别精确称取甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖各20 mg与PE 管中作为单标，各加入1 mL 0.3 mol·L-1氢氧化钠溶液，从以上6管中各吸出500 μL，放入另一个PE管中，混合后吸取500 μL作为单糖混标样品。向混标中相继加热25 μL PMP、25 μL 0.6mol·L-1的氢氧化钠溶液后，在70 ℃水浴锅中保温30 min，取出冷却至室温放置10 min，以0.6 mol·L-1盐酸溶液30 μL中和至酸性，混匀后用1 mL三氯甲烷萃取，涡旋3 min，然后以5 000 r·min-1离心15 min，将有机层弃去，反复萃取3次，上清液加水至1 mL，用于HPLC分析。

2 结果与分析

2.1 秋葵多糖的提取

2.1.1 葡萄糖标准曲线的制备

配制1 mg·mL-1的葡萄糖标准溶液，分别吸取1.0、2.0、3.0、4.0 mL和5.0 mL，各自于50 mL容量瓶中定容，得到不同浓度梯度的标准溶液;各吸取1.0 mL，分别放入5个2.0 mL的比色管中，同时以1 mL蒸馏水作为空白对照管;向以上6个比色管中分别加入苯酚、硫酸等，显色后，于485 nm波長下测定吸光度;绘制浓度与吸光度之间的标准曲线见图1。根据图1可