固相萃取-高效液相色谱串联质谱法

固相萃取-高效液相色谱串联质谱法

测定原料奶中5种环境雌激素残留量的研究

李雪1,2，牟光庆1，陈历俊1,2,*，姜铁民2

（1.大连工业大学食品学院，辽宁大连116034；

2.北京三元食品股份有限公司，北京100076）

摘要：建立固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定原料乳中环境雌激素（雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A）的方法。原料乳用NH2-SPE固相萃取小柱进行富集，旋转蒸发浓缩后，采用高效液相色谱串联质谱法测定。实验结果表明：各待测物在0.01 ~0.5μg/mL 范围内具有良好的线性关系，相关系数均大于0.9978，加标回收率为68.5%~105.6%，RSD 为2.56%~7.59%，最低检出限为0.22 ~0.56μg/L（S/N=3）。本方法操作简便，快速灵敏，适合于牛奶中痕量环境雌激素的残留分析检测。

关键词：高效液相色谱串联质谱，固相萃取，环境雌激素，原料奶，残留检测Research of the determination of 5 kinds of environmental estrogens residues in raw milk by solid phase extraction-high performance liquid chromatography

tandem mass spectrometry

LI Xue1,2,MU Guang-qing1,CHEN Li-jun1,2,*,JIANG Tie-min2 （1.College of Food Science and Technology,Dalian Polytechnic University , Dalian 116034,China;

2.Beijing Sanyuan Foods Co., Ltd, Beijing 100076,China）

Abstract: A solid phase extraction-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method for simultaneous determination of environmental estrogens including estrone,estradiol,estriol,diethylstilbestrol and bisphenol A in raw milk was established. 5 kinds of environmental estrogens were extracted from the raw milk sample by a NH2-SPE column, and concentrated with a rotary evaporator. The extract was analyzed by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometric.Results showed that:a good linear range from 0.01~0.5μg/mL with correlation coefficient of above 0.9978 was obtained.The extraction recovery were 68.5%~105.6% and the relative standard deviation were 2.56%~7.59%.The limit of detection was 0.22~0.56μg/L(S/N=3).The descri bed method was simple,sensitive and accurate.

*通讯作者：陈历俊，chlj@。

作者简介：李雪(1986-)，女，硕士研究生，研究方向：食品安全。

基金资助：奶牛产业技术体系北京市创新团队建设项目；国家科技部“863”计划(2011AA100903) 。

Key words: high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry; solid phase extraction ; environmental estrogens; raw milk; residue detection

中图分类号：TS252.1 文献标识码：A

环境雌激素[1-2]属于环境内分泌干扰物，是指由于人类活动而释放发到环境中的一类有害化学物质，这些物质进入生物体后能够扰乱生物体内分泌功能，通常被称为“外因型内分泌扰乱化学物质”。原料奶的质量是乳制品的根本，是保证奶制品食用安全、维护人类健康的基础。原料乳中是否存在雌激素至关重要，其中若残留激素，则对人体有一定的毒性[3]。

作者对原料乳中5种雌激素进行了分析检测，其中既有内源性雌激素（雌酮、雌二醇和雌三醇）也有环境雌激素（己烯雌酚和双酚A），都属于人工合成或自然界存在的，它们可通过食物链或直接接触等多种途径进入体内，模拟动物体内内源性激素，具有协同或拮抗正常的内源性激素的作用，干扰内分泌功能，多被称为环境雌激素。

近来，对牛乳中环境激素检测的研究较多，常用的方法有：气相色谱-质谱（GC-MS）法、高效液相色谱（HPLC）法、酶联免疫吸附测定（ELISA）法、荧光分析法等[4-11]。例如张红英等人[11]的研究是在有机溶剂提取的基础上对样品进行衍生，然后采用气相色谱-质谱法检测原料乳，但是前处理过程复杂，并且接触大量的有毒试剂，需要长时间的衍生化过程。而本文用固相萃取替代衍生过程，优化了提取、净化、色谱测定等参数，成功建立了固相萃取、LC-MS测定原料乳中5种环境雌激素残留量的方法。不仅提高了分析样品的工作效率，还在优化前处理方法的基础上，取得了比较满意的结果。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

原料奶采自北京市11个不同的奶牛养殖场；雌三醇标准品纯度97.4%、雌二醇标准品纯度96.7% 中国药品生物制品检定所；雌酮标准品纯度99.5%、双酚A标准品纯度98.5% 德国Dr. Ehrenstorfer 公司；己烯雌酚标准品纯度99.7%，中国计量科学研究院；甲醇HPLC级、乙腈LC/MS级美国Fisher 公司；氮气、氩气（>99.999%）；超纯水美国Milli-Q纯水系统制；其他试剂均