人参皂苷保护小鼠精原细胞氧化损伤的研究

胞活 率 。细胞培 养液为 高糖 Ｄ Ｍ 培 养 液 ， 中添 ＭＥ 其
加 １７ ｍ ｌ Ｌ～ Ｈ ｐ ｓ２ ｍ ｏ Ｌ 谷 氨酰 胺 、 ．５ ｍ ｏ ・ ｅｅ 、 ｍ ｌ・
１ ０ｍｇ・Ｌ 胰 岛 素 、 ５ ｍｇ・Ｌ 转 铁 蛋 白和 ０ ０ ．３
Ｉ ｌ Ｌ 亚硒酸 钠 （ ｉｍ ） ￣ ｍｏ ・ Ｓｇ ａ 。
１３ 细胞 活性检 测 ．
来自百度文库
采 用 四 甲基 偶 氮 唑盐 （ ｒ ＭＴ ）
人 参皂 苷 （ ｉｓｎｓ ｅ， Ｓ 是 人参 的主要 生 物 Ｇｎｅｏｉ ｓＧ ） ｄ 活性 成分 ， 有增 强 免疫 力 、 护 心 血管 系 统 、 护 具 保 保 神经 系统 、 衰老 、 癌 等多种 药理 学作 用 ¨ 。我 抗 抗 Ｊ 们 以前 的研 究表 明 Ｇ Ｓ可 通过 Ｐ Ｃ介 导 的信 号途 径 Ｋ
ｈ后 ， 用显微 数字成 像 系统 （ ｉ ｒ ｒ １０ Ｓ 拍 照 。 Ｐｘ ａＰｏ ５ Ｅ ） ｅ
１ ５ ＭＤＡ生成 、 Ｏ 活 性和 ＧＳ 含 量检 测 ． ＳＤ Ｈ 细
动性 ， 引起 Ｄ Ａ损伤 和 精 子发 生异 常 ， 而使 生 精 Ｎ 从 功 能受损 及精子 质 量下 降 ， 进 一 步 引起 胚胎 发 育 并 损伤 ＿ 。本 实验利 用小 鼠生殖 细胞 一体 细胞 无血 ６ 。］
椎脱 臼法处 死 出生后 ６ｄ的小 鼠 ， 离 曲细精 管 ， 分 经 磷酸盐 缓 冲液 （ Ｂ ） Ｐ Ｓ 和培养 液清 洗 ， 组 织剪 碎 ， 将 用 １ｇ・ 胶 原酶 （ ｉｃ —Ｒ ） Ｌ Ｇｂ ｏＢ Ｌ 消化 ２次后 过滤 ， 培养 液离 心洗 涤细胞 ３次后经 台盼蓝染料 排除法 计算 细
ｔｉｅＨ ／ 嘌 呤 氧化 酶 （ａｔｉｅｏｉ ｓ， Ｏ） ｈｎ ， Ｘ）黄 ｘｎｈｎ ｘ ａｅＸ 研 ｄ 究Ｃ Ｓ对小 鼠精 原 细胞 氧 化 损 伤 的缓 解 作 用 ， 为男
性 生殖健 康保 护探索 新 的途 径 。 １ 材料 与方 法 １ １ 生殖细胞 分 离 和 培 养 ．
量 。使用 ＭＤ Ｓ Ｄ和 Ｇ Ｈ试 剂盒 （ 京建 成生 物 Ａ、Ｏ Ｓ 南
（ 南昌大学基础 医学院生理 学教研 室 ， 江西 南昌 ３ ００ ） ３ ０ ６
中 国图 书 分 类 号 ： －２ ； ８ ． ； ２ ． ； ２ ．４ Ｒ３ ２ Ｒ ２４ １Ｒ ３ １ １Ｒ ３９ ２
文 献 标 识 码 ： 文章 编 号 ：０ １ ９ ８ ２ １ ）８—１ １ ０ Ａ １０ —１７ （０ ０ ０ ０４— ３
水 平的下降以及 ＭＤ Ａ生成 的增加 。结论
人参 皂苷 可通过
Ｉ ・ ） 独或 联 合处 理 。对 照组 仅 添加 培 养液 。 ｕ Ｌ 单
细胞 培养 于 ３ ℃ ， ％ Ｃ 的 培 养 箱 。每 个 处 理 ４ ７ ５ Ｏ
孔 ， 验重 复 ３次 。 实
抗氧化作用保护活性氧引起 的小 鼠精原细胞氧化损伤 。 关键词 ： 人参皂苷 ； 精原细胞 ； 丙二醛 ； 氧化物歧化酶 ； 超 谷胱 甘肽 ； 活性氧 ； 氧化损伤
产 生的活性 氧可 引起 生殖细胞 活性 降低 、 Ａ的生成量 增 ＭＤ
加 、Ｏ Ｓ Ｄ活 性和 Ｇ Ｈ水 平降 低 ， Ｓ 而添加 人参 皂苷 （０ ｍ １ ｇ・ Ｌ ） 能恢 复 Ｈ ／ Ｏ引起 的生殖细胞活性 、Ｏ ＸＸ Ｓ Ｄ活性和 Ｇ Ｈ Ｓ
１２ 药 物 处 理 在 生 殖 细 胞 培 养 的 同时 加 入 Ｇ ． Ｓ （． ０ １～１ ０ｍｇ・ 一） Ｈ ／ Ｏ（０ ｐ ｏ ・ Ｌ 和 Ｘ Ｘ １ ． ｌ Ｌ～， ． ｍ ２５
工 程研究 所 ） 操 作过 程按照 说 明书进行 。 ， １６ 数 据 分 析 ．
摘要 ： 目的
观察人参皂苷对活性 氧引起 的小 鼠睾丸生殖细 利 用体外培 养 的小 鼠精原
胞氧化损伤的保 护作 用。方法
细胞建立氧化应激模 型 ， 过检测生 殖细胞活 性、 质过氧 通 脂 化产物丙二 醛 （ Ａ） ＭＤ 生成 、 氧化物歧 化酶 （ Ｏ 活性和 超 Ｓ Ｄ） 谷 胱甘肽 （ Ｓ 水平 评价人参 皂苷对精原 细胞氧化 损伤 的 Ｇ Ｈ） 缓解作用 。结果 次 黄嘌呤／ 嘌呤 氧化酶 （ Ｘ Ｘ 体 系 黄 Ｈ ／ Ｏ）
促进 小 鼠精 原 细 胞 的增 殖 。 然 而 精 子 发 生 的 生 理过 程受 到多种 外 源 因素 的调控 ， 中过 多 的活 性 其 氧能 够导致 生殖 细胞 氧 化 损 伤 ， 破坏 精 子 质膜 的流
比色 法测定 生殖 细胞活性 。细胞培 养 ２ ４ ｈ后 ， 加入 Ｍ ｒ 最 终浓度 为 ０ ２ Ｌ ， ｖ（ ． ５ ｇ・ 一） 继续 培 养 ４ｈ 。吸
清共 培 养 模 型 和 活 性 氧 系 统 次 黄 嘌 呤 （ ｙ ｏａ — ｈ ｐｘｎ
胞 培养 ２ 后 ， ４ｈ 采用 硫代 巴比妥酸 法测 定培 养液 中 ＭＤ Ａ的 生 成 量 ； 用 黄 嘌 呤 氧 化 酶 法 测 定 细 胞 内 采
Ｓ Ｄ活性 ； Ｏ 采用二 硫代二 硝基 苯 甲酸 法测 定 Ｇ Ｈ含 Ｓ
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１１ 。 ０４
中 国药理 学通 报
Ｃ ｉ ｅＰ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕｌｉ ２ １ ｕ ；６ ８ ： １ ６ ｈ￣ｓ ｈ ｒ ａｏ ｇｃ ｌ ｔ ｏ ａ Ｂ ｅｎ ００Ａ ｇ２ （ ） １ ４ ０
人参皂 苷保护小鼠精原细胞氧化损伤 的研究
张大 雷 ， 杨 蓓， 吴 磊， 邹 挺
除培养 液 ， 孔 加 入 １０ ｌ的 Ｄ Ｏ 溶 解 紫 色 颗 每 ５ ＭＳ 粒 ， 酶标仪 测 ５０ｎ 下 的 吸光 度值 ， 用 ７ ｍ 并计 算 细胞
存活率 。
１４ 细胞 形态观 察 ． 在 倒置相 差显微 镜 （ ｌ ｐ ｓ Ｏｙ ｕ， ｍ
Ｔ Ｏ） ＸＩ０ 下观 察细 胞 生 长 和形 态 变化 。细胞 培 养 ２ ４