多糖类药物的分析PPT课件
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糖类药物PPT课件
（2）酶解法
比较常用。而且常与碱解法联用。
2021
1
（二）多糖的纯化
（1）乙醇沉淀法
此法是制备粘多糖最常用的方法。供乙醇沉淀的多糖溶 液浓度以1%-2%为佳。同时向溶液中加入一定浓度（如5%） 可有助于多糖的析出。
（2）分级沉淀法
不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不
同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的 粘多糖。
草叶猕猴桃多糖 、明党参多糖 、柴胡果胶多
糖、车前草多糖、茜草多糖 、胖大海多糖等进
行了结构分析、分子量测定等。
2021
26
• 多糖的高级结构对功能的影响比一级结 构更重要 ,决定高级结构的重要因素是多 糖分子链内和链外的氢键。如X射线分析 表明 ,香菇多糖及裂褶多糖均具 β-三股绳 状螺旋型立体结构 ,如在香菇多糖中加入 尿素或二甲亚枫 ,使分子的立体构型发生 改变 ,则其活性也就丧失。另一方面 ,主 链结构同时有β-1.3又有β-1.6侧链的葡聚 糖 ,有些具有强的活性 ,而有些却无活性。
• 茯苓多糖激活补体 ,加强ＭΦ活性抑制实 体瘤
• 啤酒酵母多糖 (Ｐ葡聚糖 )增强ＭΦ和Ｎ ＫＣ抑制实体瘤
2021
30
3、植物多糖
• 枸杞多糖 抗突变 ,防护遗传损伤 ,抑制实体瘤
• 牛膝多糖提高ＮＫＣ活性 ,诱生ＴＮＦ抑制实 体瘤
• 人参多糖激活ＮＫＣ和Ｔ细胞抑制实体瘤
• 银杏外种皮多糖抑制肝癌、胃癌、肺癌
2021
12
三、肝素
（一）结构与性质
是三硫酸双糖与二硫酸双糖以2∶1的比例在分子中交替联结 而成的。其分子结构有一个六糖重复单位（p515）；整个分子呈 螺旋形纤维状。分子量不均一，平均分子量12000±6000。肝素 及其钠盐为白色或灰白色粉末。分子中含有硫酸基和羧基，呈强
比较常用。而且常与碱解法联用。
2021
1
（二）多糖的纯化
（1）乙醇沉淀法
此法是制备粘多糖最常用的方法。供乙醇沉淀的多糖溶 液浓度以1%-2%为佳。同时向溶液中加入一定浓度（如5%） 可有助于多糖的析出。
（2）分级沉淀法
不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不
同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的 粘多糖。
草叶猕猴桃多糖 、明党参多糖 、柴胡果胶多
糖、车前草多糖、茜草多糖 、胖大海多糖等进
行了结构分析、分子量测定等。
2021
26
• 多糖的高级结构对功能的影响比一级结 构更重要 ,决定高级结构的重要因素是多 糖分子链内和链外的氢键。如X射线分析 表明 ,香菇多糖及裂褶多糖均具 β-三股绳 状螺旋型立体结构 ,如在香菇多糖中加入 尿素或二甲亚枫 ,使分子的立体构型发生 改变 ,则其活性也就丧失。另一方面 ,主 链结构同时有β-1.3又有β-1.6侧链的葡聚 糖 ,有些具有强的活性 ,而有些却无活性。
• 茯苓多糖激活补体 ,加强ＭΦ活性抑制实 体瘤
• 啤酒酵母多糖 (Ｐ葡聚糖 )增强ＭΦ和Ｎ ＫＣ抑制实体瘤
2021
30
3、植物多糖
• 枸杞多糖 抗突变 ,防护遗传损伤 ,抑制实体瘤
• 牛膝多糖提高ＮＫＣ活性 ,诱生ＴＮＦ抑制实 体瘤
• 人参多糖激活ＮＫＣ和Ｔ细胞抑制实体瘤
• 银杏外种皮多糖抑制肝癌、胃癌、肺癌
2021
12
三、肝素
（一）结构与性质
是三硫酸双糖与二硫酸双糖以2∶1的比例在分子中交替联结 而成的。其分子结构有一个六糖重复单位（p515）；整个分子呈 螺旋形纤维状。分子量不均一，平均分子量12000±6000。肝素 及其钠盐为白色或灰白色粉末。分子中含有硫酸基和羧基，呈强
药物分析教学课件12-糖及苷类类药物分析
1 糖类药物分析 2 苷类药物分析
糖类药物结构性质
H OH C
H C OH HO C H O
H C OH HC
CH2OH α-D -(+)-葡萄糖
H CO H C OH HO C H H C OH H C OH CH2OH
开链醛式葡萄糖
HO H C
H C OH HO C H O
H C OH HC
糖类药物杂质检查
强心苷类药物通常从植物中提取，在提取分 离过程中易引入杂质。
苷类药物 地高辛 甲地高辛 去乙酰毛花苷
特殊杂质 有关物质 有关物质 有关物质
检查方法 高效液相色谱法 高效液相色谱法 薄层色谱法
糖类药物含量测定
《中国药典》（2020年版）规定强心苷类药物的含量测 定均采用高效液相色谱法。 （1）色谱条件与系统适用性试验 （2）测定方法
CH2OH β-D -(+)-葡萄糖
CH2OH
H
O
OHH H
OH
H
OH
CH2OH O
H
H HO
O
CH2OH
OHபைடு நூலகம்H
蔗糖
糖类药物结构性质
（1）旋光性：葡萄糖或蔗糖的分子结构中含有多个手性碳 原子，且具备手性分子的特性，因此具有光学活性。
（2）还原性：葡萄糖含醛基，加入弱的氧化剂，即可将醛 基氧化为羧基，如与碱性酒石酸铜试液反应，生成氧化亚铜 的红色沉淀。蔗糖无还原性。
糖类药物鉴别试验
1.与碱性酒石酸铜试液的反应 葡萄糖的醛基具有还原性，与碱性酒石酸铜试液反应，可将 醛基氧化为羧基，生成氧化亚铜的红色沉淀。而蔗糖是由果 糖与葡萄糖缩合而成的双糖，需加硫酸溶液煮沸水解后，才 能与碱性酒石酸铜试液反应。
糖类药物结构性质
H OH C
H C OH HO C H O
H C OH HC
CH2OH α-D -(+)-葡萄糖
H CO H C OH HO C H H C OH H C OH CH2OH
开链醛式葡萄糖
HO H C
H C OH HO C H O
H C OH HC
糖类药物杂质检查
强心苷类药物通常从植物中提取，在提取分 离过程中易引入杂质。
苷类药物 地高辛 甲地高辛 去乙酰毛花苷
特殊杂质 有关物质 有关物质 有关物质
检查方法 高效液相色谱法 高效液相色谱法 薄层色谱法
糖类药物含量测定
《中国药典》（2020年版）规定强心苷类药物的含量测 定均采用高效液相色谱法。 （1）色谱条件与系统适用性试验 （2）测定方法
CH2OH β-D -(+)-葡萄糖
CH2OH
H
O
OHH H
OH
H
OH
CH2OH O
H
H HO
O
CH2OH
OHபைடு நூலகம்H
蔗糖
糖类药物结构性质
（1）旋光性：葡萄糖或蔗糖的分子结构中含有多个手性碳 原子，且具备手性分子的特性，因此具有光学活性。
（2）还原性：葡萄糖含醛基，加入弱的氧化剂，即可将醛 基氧化为羧基，如与碱性酒石酸铜试液反应，生成氧化亚铜 的红色沉淀。蔗糖无还原性。
糖类药物鉴别试验
1.与碱性酒石酸铜试液的反应 葡萄糖的醛基具有还原性，与碱性酒石酸铜试液反应，可将 醛基氧化为羧基，生成氧化亚铜的红色沉淀。而蔗糖是由果 糖与葡萄糖缩合而成的双糖，需加硫酸溶液煮沸水解后，才 能与碱性酒石酸铜试液反应。
糖和苷类药物的分析
精、蛋白质、脂肪等
葡萄糖在90%沸乙醇中能完全溶解
医学课件ppt
27
4、亚硫酸盐与可溶性淀粉
检查原理
可亚溶硫性酸淀盐 粉 I2 碘 I 2 淀 还 粉 原 络 I 合 物褪 蓝色 色
方法
S H 2 Oso l碘 试 液 应即显
医学课件ppt
28
（二）葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛
的检查
HOH2C O CHO
引入途径 高温消毒时分解产生
检查原理 杂质有UV吸收特征
规 定 A 28 n4 m 0.32
医学课件ppt
29
• 葡萄糖易分解产生5-羟甲基糠醛，其本身是 无色的， 它可再分解为乙酰丙酸与甲酸或 聚合，其聚合物为一种有色物质。葡萄糖 遇强热使溶液变黄，至少有一部分颜色是 由于葡萄糖的分解产物5-羟甲基糠醛的聚合 物作用所致；而且葡萄糖注射液的色泽深 浅与5-羟甲基糠醛产生的量成正比。
药物分析技术
糖类和苷类药物的分析
医学课件ppt
1
糖
一、药物结构与性质
葡萄糖 单糖
蔗糖 乳糖
双糖
淀粉 多糖
赋形剂和矫味剂
医学课件ppt
2
医学上的糖类 葡萄糖属单糖，是人体能量的主要来源之一。 乳糖（半乳糖-葡萄糖） 蔗糖（葡萄糖-果糖） 乳糖、蔗糖属双糖，淀粉属多糖，它们常
被用作药物制剂的赋形剂或矫味剂。
HO OH
乳糖（sucrose） 白色的结晶性颗粒或粉 末；无嗅，味微甜。
O OH
OH OO OH OH OH
OH
医学课件ppt
13
性质
1. 溶解性：单糖、双糖均易溶于水，微溶于乙 醇，不溶于氯仿或乙醚等有机溶剂；多糖在冷 水或乙醇中均不溶解。
葡萄糖在90%沸乙醇中能完全溶解
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27
4、亚硫酸盐与可溶性淀粉
检查原理
可亚溶硫性酸淀盐 粉 I2 碘 I 2 淀 还 粉 原 络 I 合 物褪 蓝色 色
方法
S H 2 Oso l碘 试 液 应即显
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28
（二）葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛
的检查
HOH2C O CHO
引入途径 高温消毒时分解产生
检查原理 杂质有UV吸收特征
规 定 A 28 n4 m 0.32
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29
• 葡萄糖易分解产生5-羟甲基糠醛，其本身是 无色的， 它可再分解为乙酰丙酸与甲酸或 聚合，其聚合物为一种有色物质。葡萄糖 遇强热使溶液变黄，至少有一部分颜色是 由于葡萄糖的分解产物5-羟甲基糠醛的聚合 物作用所致；而且葡萄糖注射液的色泽深 浅与5-羟甲基糠醛产生的量成正比。
药物分析技术
糖类和苷类药物的分析
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1
糖
一、药物结构与性质
葡萄糖 单糖
蔗糖 乳糖
双糖
淀粉 多糖
赋形剂和矫味剂
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2
医学上的糖类 葡萄糖属单糖，是人体能量的主要来源之一。 乳糖（半乳糖-葡萄糖） 蔗糖（葡萄糖-果糖） 乳糖、蔗糖属双糖，淀粉属多糖，它们常
被用作药物制剂的赋形剂或矫味剂。
HO OH
乳糖（sucrose） 白色的结晶性颗粒或粉 末；无嗅，味微甜。
O OH
OH OO OH OH OH
OH
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13
性质
1. 溶解性：单糖、双糖均易溶于水，微溶于乙 醇，不溶于氯仿或乙醚等有机溶剂；多糖在冷 水或乙醇中均不溶解。
最新第三章 糖类药物新_PPT课件教学讲义PPT
分布广泛。这种苷易水解，尤其是在有稀酸和酶催化时水 解更快，生成的苷元α-羟腈很不稳定，立即分解为醛（酮 ）和氢氰酸；而在浓酸作用下，苷元中的-CN基易氧化成COOH基，并产生NH4+；在碱性条件下，苷元容易发生异 构化而生成α-羟基羧酸盐。
苦杏仁苷（amygdalin）存在于杏的种子中，具有α羟基腈结构，属于氰苷类（cyanogenic glycosides）。苦杏 仁苷在人体内会缓慢分解生成不稳定的α-羟基苯乙腈，进 而分解成为具有苦杏仁味的苯甲醛以及氢氰酸。小剂量口
H
+ glc
O HC
+ HCN
（2） 硫苷 糖的半缩醛羟基与苷元上巯基缩合而成的苷称为硫苷。
（3） 氮苷 糖上的端基碳与苷元上氮原子相连接而成的苷称为氮
苷。氮苷在生物化学领域中是十分重要的物质，腺苷、鸟 苷、胞苷、尿苷、等是核酸的重要组成部分。另外，中药 巴豆中的巴豆苷（crotonside），其化学结构与腺苷相似。
3、生物活性：苷类化合物多具有广泛的生物活性，如 天麻苷是天麻安神镇静的主要活性成分；三七皂苷是三七 活血化瘀的活性成分；强心苷有强心作用；黄酮苷有抗菌 、止咳、平喘、扩张冠状动脉血管等等作用。
（二） 苷类的结构与分类
A .结构 1、苷键：苷中的苷元与糖之间的化学键称为苷键。 2、苷原子：苷元上形成苷键以连接糖的原子，称为苷键 原子，也称为苷原子。苷键原子通常是氧原子，也有硫原
三、苷类化合物
（一）、 概述 1、含义：苷类（glycosides）是糖或糖的衍生物与另一
非糖物质通过糖的端基碳原子连接而成的一类化合物，又 称为配糖体 。苷中的非糖部分称为苷元 (genin)或配基（ aglycone）。
2、植物分布：苷类的分布广泛，是普遍存在的天然产 物，由于苷元的结构类型不同，各种结构类型的苷类在植 物中的分布情况亦不一样。如黄酮苷在近200个科的植物中 都有分布；强心苷主要分布于玄参科、夹竹桃科等10多个 科。对多数中草药，根及根茎往往是苷类分布的一个重要 部位。
苦杏仁苷（amygdalin）存在于杏的种子中，具有α羟基腈结构，属于氰苷类（cyanogenic glycosides）。苦杏 仁苷在人体内会缓慢分解生成不稳定的α-羟基苯乙腈，进 而分解成为具有苦杏仁味的苯甲醛以及氢氰酸。小剂量口
H
+ glc
O HC
+ HCN
（2） 硫苷 糖的半缩醛羟基与苷元上巯基缩合而成的苷称为硫苷。
（3） 氮苷 糖上的端基碳与苷元上氮原子相连接而成的苷称为氮
苷。氮苷在生物化学领域中是十分重要的物质，腺苷、鸟 苷、胞苷、尿苷、等是核酸的重要组成部分。另外，中药 巴豆中的巴豆苷（crotonside），其化学结构与腺苷相似。
3、生物活性：苷类化合物多具有广泛的生物活性，如 天麻苷是天麻安神镇静的主要活性成分；三七皂苷是三七 活血化瘀的活性成分；强心苷有强心作用；黄酮苷有抗菌 、止咳、平喘、扩张冠状动脉血管等等作用。
（二） 苷类的结构与分类
A .结构 1、苷键：苷中的苷元与糖之间的化学键称为苷键。 2、苷原子：苷元上形成苷键以连接糖的原子，称为苷键 原子，也称为苷原子。苷键原子通常是氧原子，也有硫原
三、苷类化合物
（一）、 概述 1、含义：苷类（glycosides）是糖或糖的衍生物与另一
非糖物质通过糖的端基碳原子连接而成的一类化合物，又 称为配糖体 。苷中的非糖部分称为苷元 (genin)或配基（ aglycone）。
2、植物分布：苷类的分布广泛，是普遍存在的天然产 物，由于苷元的结构类型不同，各种结构类型的苷类在植 物中的分布情况亦不一样。如黄酮苷在近200个科的植物中 都有分布；强心苷主要分布于玄参科、夹竹桃科等10多个 科。对多数中草药，根及根茎往往是苷类分布的一个重要 部位。
糖和苷类药物的分析SYSH
D. 紫外分光光度法
E. 可见分光光度法
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27
例1、 用旋光度测定法测定葡萄糖氯化钠
注射液时，加入氨试液的作用
A、分离氯化钠
B、提高灵敏度
C、产生旋光性
D、加速D—葡萄糖和两种互变
CH 2 OH
CH 2 OH
α -D -呋 喃 葡 萄 糖 β -D -呋 喃 葡 萄 糖
环状结构
CH 2 OH
○
O
O
HO
H
H
OH
H
OH
CH 2 OH
○
D (-)-果 糖 （ 酮 糖 ） D (-)-果 糖 （ 酮 糖 ）
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1分子〆-D-葡萄糖和1分子β-D-呋喃果糖
通过 〆,β – (1,2) –糖苷键结合而成的。
2、糖的相对构型：α、β
端基碳：单糖成环后形成了一个新的手性碳原子。 该碳原子形成的一对异构体为端基差向异构体， 有α、β两种构型。
端基碳上H被称为端基H，OH被称为端－OH
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7
糖的相对构型：α、β
Fischer投影式：
新形成的羟基与距离羰基最远的手性碳原子
上的羟基在同侧时为α构型，在异侧时为β构
天然产物中几乎所有类型的化合物都可以与
糖形成苷。
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3
3、单糖的立体化学
表示单糖结构的方法有三种：
C HO
H
OH
HO
H
H
OH
H
OH
C H 2O H
Fischer式
C H2O H O OH
OH HO
OH
Haworth式
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多糖类药物的分析 PPT
2
糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型:O-糖苷键型糖蛋白、N-糖
苷键型糖蛋白与连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。
在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中,GalNAc残基通过O-
糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成,缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
在N-糖苷键型糖蛋白中,GlcNAc残基通过N-糖苷键与
将待测样品上柱,待测多糖Ve。
通过标准曲线求出待测多糖分子量。
16
粘度法、超离心法
粘度法:用已知结构相似的多糖决定K值( η ＝ K M2),然后测出待测多糖的特性粘数η , 计算待测多糖的分子量。
超离心法:依照测得的沉降系数计算多糖的 平均分子量。
17
高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件: 凝胶柱(分子量大小),示差折光检测器。
量与剩余的酶量成正比,与肝素效价成反比。 。 405 nm测定。
27
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度与浓度的 对数,照生物检定统计法 中量反应平行线测定法 计算出供试品的抗Xa因 子活性
可 信 限 率 ( FL%) 不 得 大于10%。
28
第五节、多糖类药物的结构分析
单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置
当蛋白酶(FⅩa)从生色底物分裂出pNA时,发色物的产 生量与剩余的酶量成正比,与肝素效价成反比。 405 nm测定。
26
生色底物
Bz:苯甲酰,Pip:哌啶酰, Tos:甲苯磺酰;对-硝基苯 胺(pNA)。
酰胺分解法(amidolytic method)。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时,发色物的产生
C为每100 ml注射液中含有右旋糖酐的重量; α为测得的旋光度×稀释倍数。
糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型:O-糖苷键型糖蛋白、N-糖
苷键型糖蛋白与连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。
在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中,GalNAc残基通过O-
糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成,缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
在N-糖苷键型糖蛋白中,GlcNAc残基通过N-糖苷键与
将待测样品上柱,待测多糖Ve。
通过标准曲线求出待测多糖分子量。
16
粘度法、超离心法
粘度法:用已知结构相似的多糖决定K值( η ＝ K M2),然后测出待测多糖的特性粘数η , 计算待测多糖的分子量。
超离心法:依照测得的沉降系数计算多糖的 平均分子量。
17
高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件: 凝胶柱(分子量大小),示差折光检测器。
量与剩余的酶量成正比,与肝素效价成反比。 。 405 nm测定。
27
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度与浓度的 对数,照生物检定统计法 中量反应平行线测定法 计算出供试品的抗Xa因 子活性
可 信 限 率 ( FL%) 不 得 大于10%。
28
第五节、多糖类药物的结构分析
单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置
当蛋白酶(FⅩa)从生色底物分裂出pNA时,发色物的产 生量与剩余的酶量成正比,与肝素效价成反比。 405 nm测定。
26
生色底物
Bz:苯甲酰,Pip:哌啶酰, Tos:甲苯磺酰;对-硝基苯 胺(pNA)。
酰胺分解法(amidolytic method)。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时,发色物的产生
C为每100 ml注射液中含有右旋糖酐的重量; α为测得的旋光度×稀释倍数。
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CH2OH O
CH2OH O
CH2OH O
CH2OH直链淀粉
O
O OH
O OH O OH
O OH O
OH
OH
OH
OH
11
纤维素
12
多糖的理化性质
旋光性 硫酸蒽酮反应（620nm） 硫酸苯酚反应(490nm) 氨基己糖——乙酰丙酮(525nm) 糖醛酸——硫酸咔唑(520nm)
13
第二节 多糖的纯度测定
生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 。 405 nm测定。
28
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度和浓度的 对数，照生物检定统计 法中量反应平行线测定 法计算出供试品的抗Xa 因子活性
可 信 限 率 ( FL%) 不 得 大于10%。
29
第五节、多糖类药物的结构分析
单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置
特点：10-100μg范围 内其颜色的深浅与糖含 量成正比。
灵敏度高。
24
生物测定法－肝素测定
美国药典采用羊血浆法。
即比较肝素标准品和供 试品延长血浆凝结时间 的作用来测定肝素的效 价。
25
生物测定法——肝素测定方法
标准品稀释液的配制:精密量取标准品溶液，按高、中、 低三剂种量浓组度（的稀ds释1 、液d，s相2、邻d两s3浓）度用的0比.9值%为氯1化:0钠.7溶。液配成
Kd = 0， Ve= V0 ； Kd = 1 ， Ve= V0+Vi ； 0＜Kd＜1，Ve=V0+KdVi 。
16
凝胶色谱法
方法：
Sephadex G-200，多糖标准品
分部收集，硫酸-苯酚检测，分别求得洗 脱体积Ve， Ve与 1gM之间存在着线性关
系，绘制标准曲线。
Ve=-KlogM+C
标准曲线：
标准曲线：LogMW = a+b tR
MW为重均分子量，tR为保留时间
待测多糖分子量（GPC专用软件）：
重均分子量 Mw=∑(RIiMi)/∑ RIi
Mi为供试品在保留时间ti 时的分子量，RIi在第i部分中
被洗脱物质的量（重量）。
19
第四节、多糖的含量测定
比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、 硫酸苯酚法、蒽酮法）
30
（一）多糖组成单糖的分析
当蛋白酶（FⅩa）从生色底物分裂出pNA时，发色 物的产生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 405 nm测定。
27
生色底物
Bz：苯甲酰，Pip：哌啶酰， Tos：甲苯磺酰； 对-硝基苯胺（pNA）。
酰胺分解法（amidolytic method）。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产
在浓硫酸中，己糖醛酸与咔 唑溶液反应生成的反应物呈 红色。
520nm比色
22
硫酸苯酚法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸作 用下水解成单糖，该单 糖在强酸性条件下，与 苯酚反应生成橙色衍生 物。
它在490nm处有最大吸 收，其吸光度与浓度呈 线性关系。
23
蒽酮法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸中 水解后，进一步脱水生 产糠醛类衍生物，与蒽 酮作用形成蓝色化合物， 620nm进行比色测定。
组成分类：
均一多糖 不均一多糖:不同类型的单糖缩合而成 粘多糖：含氮的不均一多糖 结合糖：肽聚糖、糖蛋白(glycoproteins)和蛋
白聚糖
糖蛋白通过糖肽键(carbohydrate-peptide linkage) 将糖链和肽链两部分连接起来,连接方式主要分
为β-构型的N-糖苷键和α-构型的O-糖苷键.
生物测定法（肝素钠） 生色底物法（低分子量肝素钠）
20
乙酰丙酮法（elson-morgan）
——氨基己糖
原理： 氨基己糖在碱性条件下
加热，可与乙酰丙酮缩 合成吡咯衍生物，该衍 生物与对－二甲氨基苯 甲醛反应，反应物呈红 色，于525nm测定吸 收度。
21
硫酸咔唑法测糖含量
硫酸咔唑法—己糖醛酸测定
（一）超离心法 （二）电泳法 （三）凝胶色谱法 （四）旋光法
14
பைடு நூலகம்
第三节 多糖的分子量测定
凝胶色谱法 粘度法 超离心法 高效液相色谱
15
凝胶层析法
凝胶层析法：将分子量不同 的蛋白质通过一定孔径的凝 胶固定相，由于各组分流经 体积的差异，使不同分子量 的组分得以分离。
最先淋出的是最大的分子。
将待测样品上柱，待测多糖Ve。
通过标准曲线求出待测多糖分子量。
17
粘度法、超离心法
粘度法：用已知结构相似的多糖决定K值 （ η ＝ K M2），然后测出待测多糖的特 性粘数η ，计算待测多糖的分子量。
超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖 的平均分子量。
18
高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件： 凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。
供试品稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价 （低（AT）dT，1 、照d标T2准、品d溶T3 液）与三稀种释浓液度的的稀配释制液法。配成高、中、
各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反 应平行线测定法计算效价及实验误差。
可信限率（FL%）不得大于5%。
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生色底物法原理－肝素、低分子肝素
3
糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型：O-糖苷键型糖蛋白、N-糖
苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。
在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中，GalNAc残基通过O-
糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
在N-糖苷键型糖蛋白中，GlcNAc残基通过N-糖苷键与
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多糖组成-单糖
吡喃
呋喃
六员环糖类似于吡喃，所以又称之为吡喃糖，而五员环糖
类似于呋喃，称之为呋喃糖。
环化单糖中氧化数最高的碳称为异头碳。在环式结构 中，异头碳是手性碳，所以环化的醛糖或酮糖可以呈现两 种异头构型中的一种，即-或-构型。
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葡萄糖环状结构
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椅式构象
β-D-葡萄糖
α-D-葡萄糖
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直链淀粉是葡萄糖以α-1，4糖苷键结合成的链状化合物
一个天冬酰胺残基相连，缩写为GlcNAc-Asn。
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O- （N-）糖苷键型糖蛋白
O-糖苷键
N-糖苷键
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磷酸乙醇胺残基
磷脂酰肌醇-聚糖的糖 蛋白
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蛋白聚糖
软骨蛋白聚 糖:聚集体的分
子量非常大（大 约为2×108）， 其中含有透明质 酸、硫酸角质素、 硫酸软骨素、连 接蛋白、核心蛋 白和大量的寡糖 链。