实时荧光核酸恒温扩增技术在泌尿生殖道沙眼衣原体感染检测中的应用

实时荧光核酸恒温扩增技术在泌尿生殖道沙眼衣原体感染检测中的应用

发表时间：2014-07-04T13:54:51.310Z 来源：《中外健康文摘》2014年第10期供稿作者：陈敏1 谭浩1 石坚[导读] 患者在16岁-24岁非常容易出现CT感染的情况，并且女性患者多于男性患者，在临床没有显著的特征表现。陈敏1 谭浩1 石坚2

(1湖南省妇幼保健院检验科 410008 ;2解放军163医院检验科 164800) 【摘要】目的：探讨对泌尿生殖道沙眼衣原体（CT）感染进行检测的过程中，采用实时荧光核酸恒温扩增技术（SAT）获得的效果。方法：选取我院2011年10月—2013年10月200例疑似患者，针对所有患者尿样以及拭子标本在同一时间完成SAT检测以及CT培养检测，对检测后表现出差异标本利用PCR方法针对拭子标本实施二次检测，最后由最终的检测结果对SAT技术在实施检测过程中具有的敏感性以及

特异性进行详细评估。结果：对细胞培养以及PCR最终的实验结果进行相关性分析，最终分别得出SAT技术在对尿样标本进行检测以及对拭子标本进行检测后分别具有的敏感性以及特异性，仔细分析二者最终检测结果的符合率，发现没有显著差异（P>0.05）。结论：在对CT 试剂盒进行检测的过程中采用SAT技术表现出了诸多的优点，最终的检测结果表现出了较高的敏感性以及特异性，临床针对CT检测工作具有重要的应用意义。

【关键词】实时荧光核酸恒温扩增技术沙眼衣原体尿样检测【中图分类号】R691.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）10-0165-01 患者在16岁-24岁非常容易出现CT感染的情况，并且女性患者多于男性患者，在临床没有显著的特征表现。当前在进行CT检测的过程中，多数都将患者泌尿生殖道分泌物当作此次实验的检测标本，此种方式在对患者进行取样的过程中会对患者带来诸多的痛苦，进而导致患者没有强烈的检测意愿，与此同时最终的检测结果也不能表现出显著的敏感性以及特异性[1]。本文主要针对我院2011年10月—2013年10月200例疑似患者，对所有患者的尿样标本以及拭子分泌物实施CT检测，最终对检测具有的敏感性以及特异性进行准确评估。现将具体的临床研究报告如下。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2011年10月—2013年10月200例疑似患者，其中男85例，女115例。患者最小年龄为22岁，患者最大年龄为65岁，患者的平均年龄为（42.13±2.5）岁。收集所有患者的分泌物以及尿样标本进行检测。针对男性患者，主要选择尿道拭子以及尿样作为最终的检测标本，针对女性患者，主要选择宫颈拭子以及尿样作为最终的检测标本。

1.2 方法

1.2.1 采集标本

在准备针对患者进行标本的采集之前，要求患者在两个小时之内不能排尿。利用拭子进行分泌物的采集：在男性的尿道口或者女性的宫颈口将拭子（特制的无菌棉）伸入进行标本的采集，完成采集后，在生理盐水中（1.5毫升）对拭子进行洗涤。之后针对洗液进行充分震荡，待混匀后，吸取洗液1毫升放入标本冷冻保存管中（内装有样本保存液1毫升），充分混匀；将标本放在温度在零下20摄氏度的环境下进行保存，之后准备进行PCR或者SAT的检测。采用需要培养的标本：将利用拭子完成采集的分泌物标本放在运送培养基中（1毫升衣原体），准备进行培养衣原体的实验。采用利用核酸进行检测的尿标本：在准备进行标本的采集之前要求患者在2个小时之内不可以排尿，对患者的首段尿样进行收集，剂量约为1毫升，之后与保存液（1毫升样本）充分混匀，放置在零下20摄氏度的环境下保存，准备进行SAT的检测[2]。

1.2.2 CT-SAT的技术原理

在温度相同的条件下，利用M-MLV逆转录酶形成RNA的一条双链，之后通过T7RNA多聚酶形成RNA拷贝，数量最少为100个，最多为1000个[3-4]；之后任一个RNA拷贝通过逆转录完成扩增循环；与此同时，RNA拷贝会与探针（荧光标记）互相结合，最终出现荧光[5]。通过荧光检测仪器能够有效将荧光信号进行捕捉，充分表达出扩增循环的效果[6]。

1.3 统计学方法

在进行本次实验的研究过程中主要利用统计学软件SPSS15.0对相关数据进行具体分析并统计，利用t检验表示计量资料，利用卡方检验表示拭子标本与尿液标本二者最终检测结果具有的符合率，以P>0.05为不存在差异，无统计学意义。

2、结果

2.1 细胞培养与检测的最终结果

针对本次研究的200例患者，采用CT-SAT检测对拭子分泌物的标本进行检测后最终的阳性率为44.5%（89/200）；检测尿样标本最终的阳性率为41.0%（82/200）；采用CT细胞培养法对拭子标本进行检测后最终的阳性率为39.5%（79/200）。具体情况可见下表。表1 CT细胞培养同SAT的检测结果

3、讨论

在进行本次的研究中发现，针对200例接受检查的患者，采用CT-SAT对其尿样标本以及拭子标本完成检测后，发现二者的符合率较高，没有表现出显著差异（P>0.05）。在对CT试剂盒进行检测的过程中采用SAT技术表现出了诸多的优点，最终的检测结果表现出了诸多的敏感性以及特异性，成功凸显检测的价值与意义[7]。

参考文献

[1] 李林海,陈丽丹,刘文婷等.实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法检测解脲脲原体的比较[J].生物技术通讯,2013,(2):251-253.

[2] 周璐,蔡筠,谢建生等.实时荧光核酸恒温扩增技术在不孕育龄妇女病原体检测中的应用研究[J].医药前沿 ,2013,(21):55-56.

[3] 孙玉华,陈峰,蔡瑞云等.实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中沙眼衣原体的分析[J].中国现代医生,2011,49(22):124-125.

[4] Li, Xiao,Donna M, Crabb,Stephen A, Moser,Lynn B, Duffy,John I, Glass,Vanya, Paralanov,Ken B, Waites . Genotypic characterization of ureaplasma serovars from clinical isolates by pulsed-field gel electrophoresis. . Journal of clinical microbiology, 2011，49（9）：:105-106.

[5] 高志华,金印,陈峰等.实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中淋球菌的分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(4):463-464.

[6] 张津萍,龚匡隆,尤永燕等.实时荧光核酸恒温扩增法检测泌尿生殖道淋球菌感染[J].国际皮肤性病学杂志,2010,36(3):137-139.

[7] 顾伟鸣,杨阳,吴磊等.实时荧光恒温扩增检测技术对泌尿生殖道沙眼衣原体感染检测的临床研究[C].//第五届全国性传播疾病防治学术

研讨会论文集.2010:260-262.