噬菌体展示技术的原理及应用知识讲解45页PPT
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噬菌体展示技术和其应用ppt课件
2024/3/30
25
应用举例：
部分做过的工作
2024/3/30
26
一、半合成噬菌体抗体库的构建
构建一个半合成抗体库，不经免疫制备人源抗Tie2 Fab抗体。通过RT-PCR方法，从人脐带血淋巴细胞总 RNA 扩增轻链基因及重链VH段基因，将轻链基因插 入pCOMb3载体中，得人轻链质粒库；从乙肝表面抗 体（HBsAb）的Fd段基因制备含有不同长度随机化 CDR3的FR3-CDR3-J-CH1片段，然后将VH段基因与随 机化的CDR3融合，得到Fd基因片段，再将其插入轻链 质粒库中，得半合成人Fab质粒库。
成3节段
2024/3/30
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M13噬菌体
丝 状 噬 菌 体
λ噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体
蝌 蚪 形 噬 菌 体
2024/3/30
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T7与M13相比优势明显
T7Select的优势 解释
是在细胞质中表 达的裂解性噬菌 体
C-端融合
与M13不同，T7是裂解性的，其展示的蛋白无需分泌。
插入序列被克隆到T7Select载体基因10 的C-端，可以使带有终止密码子的 插入子得以表达和展示。
2024/3/30
34人源噬菌体Fab抗体半合成的构建将酶切纯化的重链重叠PCR产M13的超感染 下，繁殖出表算出κ＋Fd（包括CDR3-5个菌落，涂格，过夜培养后菌落PCR： 其中6个克隆中有轻链也有重链。双链插入率 为60％左右。
κ 链 文 库 的 容 量 为 5.03×106,λ 链 文 库 的 容 量 为 6.8×106(多次建库混合后的库容量)。
从平板上随机挑取10个菌落，涂为70％。
载体克隆容量大 T7载体比M13克隆容量大，而任何克隆到M13上大于1 kbp的片段都不稳定。
噬菌体展示技术的原理及应用
8、 DNA结合蛋白：
锌指蛋白是一类 DNA 结合小肽结构物，这些结 构含有锌，能用于构建一个大的蛋白区域，去识别 和结合特殊的 DNA 序列。噬菌体展示技术也可以用 于创造一个大的、具有识别不同 DNA 序列的 锌指 的多肽库。利用这个多肽库，可以研究有关氨基酸 序列与 DNA 结合位点之间的识别规则，可以通过设 计 锌指多肽去控制基因的表达，比如抑制小鼠细胞 系中的癌基因，也可以启动表达质粒的基因，或干 扰病毒感染插入的片段是从 某些组织或细胞中抽提的mRNA 的互补DNA 片 段,它用来筛选与受体特异性结合的片段。一般可 利用M13 噬菌体或其他表 达一部分真核蛋白,而M13 噬菌体和其他E. coli噬 菌体所能表达的真核蛋白更少。研究表明,没有一 个展示系统能够表达所有的真核细胞蛋白。无论 如何,噬菌体表面cDNA 库的表达将是研究蛋白质 之间相互作用的有用工具。cDNA 库的噬菌体展 示提供了一个应用免疫学方法进行酶：
例：碱性磷酸酶，蛋白水解酶类，等等
6、底物与抑制剂：
主要是蛋白酶的底物和其抑制剂。
7、信息传递研究:
利用噬菌体展示多肽库，发现了一些受体，如 凝血致活酶、黑皮质素受体、CD80 和一个 Hantaviral 受体；受体的配体， 如血管促生素、 αbungarotoxin， 和一些大蛋白分子中的折叠区域， 如 SH2、SH3 和 WW 区域。从多肽库中可分离 到与天然激素相似的、与受体结合的高亲和力的 多肽, 因此用完整细胞可以从多肽库中找到受体的 高选择性配体。在不知道任何有关的受体和配体 信息的情况下，用完整细胞和组织或动物，可筛 选到特异与靶组织结合的多肽和蛋白。
一、发展简史
Dulbecco等提出了在病毒表面展示外源抗原 决定簇和肽的概念。 1985年Smith — 首次利用基因工程技术将 EcoRⅠ内切酶的部分基因片段(171 bp和132 bp)与 pⅢ基因融合，获得的重组噬菌体可在体外稳定增 生，表达产物能被抗EcoRⅠ内切酶抗体所识别.。 1988年Parmley — 将已知抗原决定簇与噬菌体 PⅢ N端融合呈现在其表面，并提出通过构建随机 肽库可以了解抗体识别的抗原决定簇表位的设想.。 1990年McCafferty — 用噬菌体展示技术筛选 溶菌酶的单链抗体成功使噬菌体展示技术进入一 个广泛应用的时代。
噬菌体展示技术及其应用.ppt
Lytic phages specifically kill pathogenic bacteria as an alternative to antibiotics
Example of a successful phage therapy treatment.
接受过噬菌体治疗的病人对细菌和病 毒感染的抵抗力增强, 噬菌体能上调感染 病人的免疫应答。噬菌体治疗能改变血清 α肿瘤坏死因子(TNF-α) 水平, 体外加入 噬菌体能提高血细胞培养物中的TNF-α和 白细胞介素6水平。IL-6 涉及Th2 型应答, 对诱导B细胞分化成抗体形成细胞特别重要。 总之, 这些结果表明噬菌体能作为细胞和 体液免疫的天然佐剂。
In phage display, a heterologous peptide or protein is displayed on the surface of the phage through transcriptional fusion with a coat-protein gene ,producing novel phage particles that have a variety of potential uses.
目前，能用于蛋白质/多肽展示的噬菌 体系统有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展 示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示 系统。
T7 噬菌体基因组由39936bp双链线性DNA组成，有 160bp 的突出末端。T7噬菌体衣壳蛋白通常有2 种形式， 10A（344氨基酸）和10B（397氨基酸），10B是在10A的341 个氨基酸的翻译框中产生的(translational frameshift)， 约占衣壳蛋白的10%，功能性衣壳或者由10A、或者由10B、 或者由10A和10B以一定比例构成，这说明T7衣壳蛋白能够 容纳变异体。独特的10B 衣壳蛋白区存在于噬菌体表面， 所以被用作噬菌体展示。不像丝状噬菌体系统，展示在T7 表面的多肽或蛋白质不需要通过细胞膜分泌出来，因而其 表面展示多肽和蛋白的范围广。T7展示系统可以高、中、 低拷贝地展示不同分子量的蛋白质，是目前最为理想的展 示系统。
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介 ppt课件
35
融合蛋白的表达是低价的，只有不到10％的噬菌体可以表 达融合基因，其余噬菌体展示的均是野生型噬菌体的p3蛋PPT课件
36
淘筛—亲和淘筛
1.噬菌体肽库与靶分子相互作用
2.洗涤去未结合的或是非特异性结合 的噬菌体
3.将特异性结合的噬菌体洗脱下来
M13噬菌体遗传图谱和结构示意图
PPT课件
17
3.6.2次要衣壳蛋白PⅢ展示系统
次要衣壳蛋白PⅢ
PⅢ是病毒的次要外壳蛋白，位 于病毒颗粒的尾端，是噬菌体感染 大肠杆菌所必须的。每个病毒颗粒 都有3个～5个拷贝PⅢ蛋白，其在结 构上可分为N1、N2和CT 3个功能区 域，这3个功能区域由两段富含甘氨 酸的连接肽G1和G2连接。其中，N1 和N2与噬菌体吸附大肠杆菌菌毛及 穿透细胞膜有关，而CT构成噬菌体 外壳蛋白结构的一部分，并将整个 PⅢ蛋白的C端结构域锚定于噬菌体 的一端。
PPT课件
18
PⅢ展示系统，PⅢ有2个位点可供外源序列插入， 当外源的多肽或蛋白质融合于PⅢ蛋白的信号肽(SgⅢ) 和N1之间时，该系统保留了完整的PⅢ蛋白，噬菌体 仍有感染性；但若外源多肽或蛋白直接与PⅢ蛋白的 CT结构域相连，则噬菌体丧失感染性，这时重组噬菌 体的感染性由辅助噬菌体表达的完整PⅢ蛋白来提供。 PⅢ蛋白很容易被蛋白水解酶水解，所以有辅助噬菌 体超感染时，可以使每个噬菌体平均展示不到一个融 合蛋白，即所谓“单价”噬菌体。
PPT课件
12
3.3 噬菌体侵染大肠杆菌
PPT课件
13
3.4 λ噬菌体展示系统
（1）PV展示系统。λ噬菌体的PV蛋白构成了它的尾部管状部分。PV有
两个折叠区域，C端的折叠结构域（非功能区）可供外源序列插入或 替换。λ噬菌体的装配在细胞内进行，故可以展示难以分泌的肽或蛋白 质。该系统展示的外源蛋白质的拷贝数为平均1个分子/噬菌体，这表 明外源蛋白质或多肽可能干扰了λ噬菌体的尾部装配。 （2）D蛋白展示系统。D蛋白的参与野生型λ噬菌体头部的装配。当突变 型噬菌体基因组小于野生型基因组的82%时，可以在缺少D蛋白的情况 下完成组装，故D蛋白可作为外源序列融合的载体，而且展示的外源 多肽在空间上是可以接近的。该系统有一个很好的特点，噬菌体上融 合蛋白和D蛋白的比例可以由宿主的抑制tRNA活性加以控制，这对于 展示那些可以对噬菌体装配造成损害的蛋白质时特别有用。
2019-2020年人教统编噬菌体展示技术的原理及其应用幻灯片
铺盘分离单个克隆 测序分析插入序列
验证实验： 结合实验
Solid phase selection with immunotubes
Immunotube coated with antigen
coated with
•
steptavidin and
biotinylated antigen B
v v
B
M13噬菌体的生活史
其裂解周期为：
•
1)吸附(adsorption)
2)侵入(entory)
3)复制（生物合成biosynthesis）
4)成熟(maturation)
5)装配(assembly)
6)释放(release)
丝状噬菌体的基因及蛋白结构
•
• pIII (406aa, 5~8copies)
B
B
BB
B
Bind to Streptavidin
coated microtitre wells
•
Wash to remove unbound phage particles
•
Elute bound phage
•
Amplify eluted phage
Repeat selection •
目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速，在抗原 决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节 分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑 制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不 同领域得到了应用，并对这些领域产生了深远的影响。
1985年Smith首次通过基因工程的手段，将外源基因 插入丝状噬菌体基因组中，从而使表达的外源肽或蛋白与 噬菌体外壳蛋白一起展示在噬 菌• 体表面，由此建立了噬菌 体展示技术。
验证实验： 结合实验
Solid phase selection with immunotubes
Immunotube coated with antigen
coated with
•
steptavidin and
biotinylated antigen B
v v
B
M13噬菌体的生活史
其裂解周期为：
•
1)吸附(adsorption)
2)侵入(entory)
3)复制（生物合成biosynthesis）
4)成熟(maturation)
5)装配(assembly)
6)释放(release)
丝状噬菌体的基因及蛋白结构
•
• pIII (406aa, 5~8copies)
B
B
BB
B
Bind to Streptavidin
coated microtitre wells
•
Wash to remove unbound phage particles
•
Elute bound phage
•
Amplify eluted phage
Repeat selection •
目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速，在抗原 决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节 分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑 制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不 同领域得到了应用，并对这些领域产生了深远的影响。
1985年Smith首次通过基因工程的手段，将外源基因 插入丝状噬菌体基因组中，从而使表达的外源肽或蛋白与 噬菌体外壳蛋白一起展示在噬 菌• 体表面，由此建立了噬菌 体展示技术。
噬菌体展示技术课件
噬菌体展示技术课件一、前言噬菌体展示技术是一种被广泛应用于蛋白质工程、药物研发、肿瘤治疗等领域的新技术。
本文将从噬菌体（phage）、噬菌体展示技术的基本原理、应用举例和展望等方面进行介绍。
二、噬菌体的基本知识噬菌体是一种病毒，生活在细菌宿主体内。
噬菌体的外壳由蛋白质组成，内部包含脱氧核糖核酸（DNA）和辅助蛋白。
噬菌体能够通过感染细菌宿主，将其内部的代谢系统利用起来，进行自我复制和扩散。
目前，关于噬菌体的分类方法比较多，根据其外壳的性质可以分为单链（ss）和双链（ds）噬菌体，其中双链噬菌体比单链噬菌体更为常见。
三、噬菌体展示技术的原理噬菌体展示技术是利用噬菌体的外壳蛋白进行蛋白质展示的一种技术。
噬菌体的外壳蛋白可以不影响噬菌体的感染活性的前提下插入异源蛋白，从而实现异源蛋白的高效性展示。
噬菌体展示技术一般分为三种类型：（1）杆状噬菌体展示技术（Phage Display）杆状噬菌体展示技术是指将异源蛋白插入噬菌体的一种展示方式。
将异源蛋白序列与噬菌体的基因工程技术结合，使得噬菌体在感染细胞时可以将异源蛋白展示在噬菌体的外壳上。
利用这种方法，可以筛选出针对不同细胞表面蛋白、激素、抗体和酶等生物分子的蛋白质，并在药物研究和肿瘤治疗等领域中得到广泛应用。
（2）重组成簇技术（Recombinant Clustering）重组成簇技术是通过重组噬菌体的基因组来实现高效异源蛋白质的展示。
将异源蛋白的编码序列插入噬菌体的DNA片段中，并定向确保插入的编码序列被合成成一种重叠的形式。
这种重叠的编码序列被称为“聚簇”，在感染宿主细胞时能够在噬菌体表面形成聚簇，从而实现异源蛋白质的高效性展示。
（3）病毒样颗粒展示技术（Virus-like Particle Display）病毒样颗粒展示技术是指利用噬菌体或其他病毒颗粒的特性，在内部包含了异源蛋白的表达序列，从而形成一种类似于病毒粒子的结构，并与宿主细胞进行结合。
噬菌体展示技术的原理及应用
02 噬菌体展示技术 原理
噬菌体结构与功能
噬菌体基本结构
由蛋白质外壳和内部遗传物质组 成，具有识别和感染宿主细胞的 能力。
噬菌体功能
通过感染宿主细胞，将自身遗传 物质注入细胞内，并利用宿主细 胞的资源进行复制和增殖。
展示原理及过程
展示原理
利用噬菌体感染宿主细胞的特点，将外源蛋白或多肽与噬菌体表面蛋白融合表达 ，从而展示在噬菌体表面。
发展历程
自20世纪80年代初期噬菌体展示技术 被首次提出以来，随着分子生物学和 基因工程技术的不断发展，该技术得 到了迅速发展和广泛应用。
技术特点及优势
技术特点
噬菌体展示技术通过将外源基因插入到噬菌体的基因组中，使得外源蛋白或多 肽能够在噬菌体表面表达，从而实现了对外源蛋白的高通量筛选和鉴定。
优势
等。
实验操作步骤
转化宿主菌
将构建好的噬菌体展示载体转化 到宿主菌中。
噬菌体繁殖和蛋白表达
在适当的条件下培养宿主菌，使 噬菌体繁殖并表达目标蛋白。
噬菌体收集和纯化
收集宿主菌培养物，通过离心、 过滤等方法纯化噬菌体。
构建噬菌体展示载体
将目标蛋白基因克隆到噬菌体载 体中，构建成噬菌体展示载体。
噬菌体展示验证
通过ELISA、Western blot等方 法验证目标蛋白是否在噬菌体表 面展示。
结果分析与解读
噬菌体滴度测定
通过测定噬菌体的滴度来评估实验的 可靠性和重复性。
目标蛋白表达量分析
通过SDS-PAGE等方法分析目标蛋白 的表达量，以评估展示效果。
展示特异性验证
通过与其他非特异性蛋白的对比，验 证目标蛋白在噬菌体表面的展示特异 性。
安全性问题
噬菌体作为病毒的一种， 存在潜在的安全风险，如 污染实验室、感染工作人 员等。
噬菌体表面展示及其应用
Solid phase selection with immunotubes
Immunotube coated with antigen
coated with
steptavidin and
biotinylated antigen
B
v v
B
B
B
BB
B
Solution phase selection with biotinylated antigen
用于外表展示的噬菌体
• 3种常用于外表展示的噬菌体为 M13, F1 , FD• 利用病毒粒子外表蛋白构建多肽，每 个噬菌体能展示一个任意的多肽
噬菌体外表展示的筛选• 利用筛选技术能从 噬菌固定靶 蛋白/多肽
• 利用DNA测序的优 势，很容易就能鉴 定目的蛋白/多肽的 序列
感染 和扩增
E.coli
噬菌体抗体库的构建
Antibody IgG structure
Fab
VL
CL VH
CH1
Fc
CH2
CH3
Hinge
(Fab’)2
Membrane Extension
Fv
VL
VH
CL
CH1
CH2 CH3
VL
Fv VH
VL
scFv
VH
宿主细胞: 筛选范围 : 107 109 时间: 操作: 单
antigen biotin
Bind to Streptavidin
coated microtitre wells
去除未结合的噬菌体病毒粒子.
洗脱结合的噬菌体
Amplify eluted phage
Repeat selection
噬菌体展示技术PPT精选文档
噬菌体表面展示技术：是一种将外源多肽或蛋白质的 DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白的一个结构基因的适当位 置上,外源基因将随着外壳蛋白的表达而表达,从而使多肽 或蛋白以与外壳蛋白融合表达的形式展示在噬菌体表面。
3
噬菌体展示系统的分类
根据噬菌体不同： •温和噬菌体---M
6. 感染后1小时内平均每个细胞 分泌1000个噬菌体
6
次要外壳蛋白 pIII
1. 406 aa 组成，5个拷贝，位于噬菌 体的尾部。
2. 由三个功能区组成： • N1 穿膜区：作用于E.coli细胞膜上
的TolA蛋白；与噬菌体的入侵有关。 • N2 受体结合区：负责结合F菌毛。 • CT 疏水区：组装前黏附在细菌内
5
M13噬菌体的生命周期
1. PIII蛋白结合于E.Coli 的F纤 毛
2. 细菌的Tol蛋白复合体解聚噬 菌体的外壳蛋白，ssDNA转 运至胞浆
3. 病毒ssDNA进入细菌的胞浆 合成dsDNA
4. 以dsDNA为模版合成所有的 病毒蛋白，且通过滚环复制
合成组装病毒所需的ssDNA。
5. 第一代噬菌体在感染10分钟 后出现在培养液中
4
M13噬菌体的组成和结构
1. 丝状噬菌体：M13。 2. 单链DNA病毒,6407 bp。 3. 基因组编码11种蛋白质，其
中5种为结构蛋白质。 4. 与展示密切相关的有pIII、
pVIII两种结构蛋白质。 5. DNA在细菌内滚环复制，细
菌不被裂解，但生长速度减 慢，并且分泌大量噬菌体颗 粒。
复合物。 优点：克服直接包被的出现的问题 缺点：容易筛到与亲和素（或者链酶亲和素）结合的克隆。
14
噬菌体抗体库淘选示意图 直接包被法
• 噬菌体抗体库与靶分子相互 作用
3
噬菌体展示系统的分类
根据噬菌体不同： •温和噬菌体---M
6. 感染后1小时内平均每个细胞 分泌1000个噬菌体
6
次要外壳蛋白 pIII
1. 406 aa 组成，5个拷贝，位于噬菌 体的尾部。
2. 由三个功能区组成： • N1 穿膜区：作用于E.coli细胞膜上
的TolA蛋白；与噬菌体的入侵有关。 • N2 受体结合区：负责结合F菌毛。 • CT 疏水区：组装前黏附在细菌内
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M13噬菌体的生命周期
1. PIII蛋白结合于E.Coli 的F纤 毛
2. 细菌的Tol蛋白复合体解聚噬 菌体的外壳蛋白，ssDNA转 运至胞浆
3. 病毒ssDNA进入细菌的胞浆 合成dsDNA
4. 以dsDNA为模版合成所有的 病毒蛋白，且通过滚环复制
合成组装病毒所需的ssDNA。
5. 第一代噬菌体在感染10分钟 后出现在培养液中
4
M13噬菌体的组成和结构
1. 丝状噬菌体：M13。 2. 单链DNA病毒,6407 bp。 3. 基因组编码11种蛋白质，其
中5种为结构蛋白质。 4. 与展示密切相关的有pIII、
pVIII两种结构蛋白质。 5. DNA在细菌内滚环复制，细
菌不被裂解，但生长速度减 慢，并且分泌大量噬菌体颗 粒。
复合物。 优点：克服直接包被的出现的问题 缺点：容易筛到与亲和素（或者链酶亲和素）结合的克隆。
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噬菌体抗体库淘选示意图 直接包被法
• 噬菌体抗体库与靶分子相互 作用
《噬菌体展示技术》PPT课件
• 这种多价pVIII展示所增加的 亲和力有利于筛选到亲和力 非常低的配体，而单价pIII展 示则将筛选限制在具有较高 亲和力的配体上。
精选课件
8
pIII展示和pVIII展示的区别
• pVIII 展示的多肽比较小，如果太大会影响噬菌体壳蛋白的组 装。
• pIII只要不影响感染，可以展示更大的多肽及蛋白。
精选课件
14
噬菌体抗体库淘选示意图 直接包被法
• 噬菌体抗体库与靶分子相互 作用
• 洗涤去未结合的或非特异性 结合的噬菌体
• 将特异性结合的噬菌体洗脱 下来，并扩增，用扩增产物 进行下一轮筛选
• 三轮淘选后，克隆测序
精选课件
15
噬菌体抗体库淘选示意图 液相法
第一步：生物素化抗体与磁珠结合
Bind to Streptavidin coated magnetic bead
精选课件
13
筛选的方法－亲和淘选
直接包被淘选法：
直接将靶分子包被在固相表面
优点：简单直接。 缺点：偶尔会导致配体结合位点难以进入
可能是由于分子的立体封阻 或者是靶分子表面的部分变性而引起 液相淘选法：
将靶蛋白与噬菌体抗体库先结合，之后再亲和捕获靶分子-噬菌体 复合物。
优点：克服直接包被的出现的问题 缺点：容易筛到与亲和素（或者链酶亲和素）结合的克隆。
• N2 受体结合区：负责结合F菌毛。
• CT 疏水区：组装前黏附在细菌内 膜上；与噬菌体组装终止有关。
• G1、G2:甘氨酸片段，在感染过程 中，增加各个功能域之间的灵活性
精选课件
7
主要外壳蛋白 pVIII
• 每子个病毒含约2700个拷贝， 约10%能有效地融合外源多 肽。以pIII融合子方式表达的 是单价的，而以pVIII融合子 方式表达的则是多价的。
精选课件
8
pIII展示和pVIII展示的区别
• pVIII 展示的多肽比较小，如果太大会影响噬菌体壳蛋白的组 装。
• pIII只要不影响感染，可以展示更大的多肽及蛋白。
精选课件
14
噬菌体抗体库淘选示意图 直接包被法
• 噬菌体抗体库与靶分子相互 作用
• 洗涤去未结合的或非特异性 结合的噬菌体
• 将特异性结合的噬菌体洗脱 下来，并扩增，用扩增产物 进行下一轮筛选
• 三轮淘选后，克隆测序
精选课件
15
噬菌体抗体库淘选示意图 液相法
第一步：生物素化抗体与磁珠结合
Bind to Streptavidin coated magnetic bead
精选课件
13
筛选的方法－亲和淘选
直接包被淘选法：
直接将靶分子包被在固相表面
优点：简单直接。 缺点：偶尔会导致配体结合位点难以进入
可能是由于分子的立体封阻 或者是靶分子表面的部分变性而引起 液相淘选法：
将靶蛋白与噬菌体抗体库先结合，之后再亲和捕获靶分子-噬菌体 复合物。
优点：克服直接包被的出现的问题 缺点：容易筛到与亲和素（或者链酶亲和素）结合的克隆。
• N2 受体结合区：负责结合F菌毛。
• CT 疏水区：组装前黏附在细菌内 膜上；与噬菌体组装终止有关。
• G1、G2:甘氨酸片段，在感染过程 中，增加各个功能域之间的灵活性
精选课件
7
主要外壳蛋白 pVIII
• 每子个病毒含约2700个拷贝， 约10%能有效地融合外源多 肽。以pIII融合子方式表达的 是单价的，而以pVIII融合子 方式表达的则是多价的。
噬菌体展示技术的原理及应用ppt课件
各种多肽或蛋白质以融合
蛋白的形式表达并展示在
噬菌体表面，同时将其遗
传密码包含于噬菌体内部，
这使得蛋白质的功能与其
基因密码有机的连结在一
起。
完整版课件
3
选择方法： 淘选（Panning)
而不是 筛选（Screening)
完整版课件
4
非展示系统
展示系统
完整版课件
5
Solid phase selection with immunotubes
蛋白质—蛋白质 蛋白质—DNA 蛋白质—其他 诊断 基因表达控制 中和活力 药物及药物导航 酶及底物
完整版课件
受体—配 信息传递 诘抗剂 抑制剂
17
噬菌体抗体库的构建
完整版课件
18
Antibody IgG structure
完整版课件
19
Antibody IgG structure
完整版课件
20
7
Bind to Streptavidin
coated microtitre wells
完整版课件
8
Wash to remove unbound phage particles.
完整版课件
9
Elute bound phage
完整版课件
10
Amplify eluted phage
Repeat selection
使该病毒不能结合或感染细胞。人血管促
生素（angiogenin）是一种能促进肿瘤血
管生长的蛋白，用这个蛋白去淘选一个噬
菌体展示多肽库，所获得的一个环状8肽
能与血管促生素结合，并能阻遏血管促生
素的活性；等等。
完整版课件
《噬菌体展示技术》课件
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一种利用噬菌体作为载体，展示蛋白质和肽段的技术。本 课件将介绍噬菌体展示技术的基本原理和应用领域。
简介
什么是噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一项利用噬菌体将蛋白质或肽段展示在其表面的技术。
为什么要用噬菌体展示技术
噬菌体展示技术可以很好地展示和筛选特定的蛋白质或肽段，具有高效和可控性。
噬菌体展示技术的应用领域
噬菌体展示技术在抗体选择、疫苗研发和肿瘤治疗等领域具有广泛应用。
基本原理
1
噬菌体结构简介
噬菌体是一种寄生于细菌的病毒，具有
基因工程技术
2
包裹着基因组的蛋白质壳和尾部结构。
通过基因工程技术将目标蛋白质或肽段
的编码序列与噬菌体基因组融合。
3
噬菌体展示技术基本流程
包括载体构建、噬菌体感染宿主细菌、 蛋白质或肽段展示、筛选和验证等步骤。
噬菌体展示技术的未来发展前景
随着技术的不断进步，噬菌体展示技术在生物医药领域有望取得更大的突破。
未来，噬菌体展示技术有望在药物研发、生物制药和生物能源等领域发挥更重要的作用。
2 噬菌体展示技术的研究热点
当前的研究热点包括展示技术的改进、筛选方法的优化和多肽库的构建。
总结
噬菌体展示技术的优点
具有高效、可控、快速筛选和改造特定蛋白质或肽段的优点。
噬菌体展示技术的局限性
依赖于噬菌体感染宿主细体选择技术
噬菌体展示技术可用于快速筛选和改造具有高亲和力的抗体，用于治疗各种疾病。
疫苗研发技术
利用噬菌体展示技术可以快速筛选出具有高效免疫特性的抗原，用于疫苗的设计和开发。
肿瘤治疗技术
噬菌体展示技术可以实现肿瘤靶向治疗，将药物或治疗性蛋白质展示在噬菌体表面，以增强 治疗效果。
噬菌体展示技术是一种利用噬菌体作为载体，展示蛋白质和肽段的技术。本 课件将介绍噬菌体展示技术的基本原理和应用领域。
简介
什么是噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一项利用噬菌体将蛋白质或肽段展示在其表面的技术。
为什么要用噬菌体展示技术
噬菌体展示技术可以很好地展示和筛选特定的蛋白质或肽段，具有高效和可控性。
噬菌体展示技术的应用领域
噬菌体展示技术在抗体选择、疫苗研发和肿瘤治疗等领域具有广泛应用。
基本原理
1
噬菌体结构简介
噬菌体是一种寄生于细菌的病毒，具有
基因工程技术
2
包裹着基因组的蛋白质壳和尾部结构。
通过基因工程技术将目标蛋白质或肽段
的编码序列与噬菌体基因组融合。
3
噬菌体展示技术基本流程
包括载体构建、噬菌体感染宿主细菌、 蛋白质或肽段展示、筛选和验证等步骤。
噬菌体展示技术的未来发展前景
随着技术的不断进步，噬菌体展示技术在生物医药领域有望取得更大的突破。
未来，噬菌体展示技术有望在药物研发、生物制药和生物能源等领域发挥更重要的作用。
2 噬菌体展示技术的研究热点
当前的研究热点包括展示技术的改进、筛选方法的优化和多肽库的构建。
总结
噬菌体展示技术的优点
具有高效、可控、快速筛选和改造特定蛋白质或肽段的优点。
噬菌体展示技术的局限性
依赖于噬菌体感染宿主细体选择技术
噬菌体展示技术可用于快速筛选和改造具有高亲和力的抗体，用于治疗各种疾病。
疫苗研发技术
利用噬菌体展示技术可以快速筛选出具有高效免疫特性的抗原，用于疫苗的设计和开发。
肿瘤治疗技术
噬菌体展示技术可以实现肿瘤靶向治疗，将药物或治疗性蛋白质展示在噬菌体表面，以增强 治疗效果。
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术-泰克生物一．噬菌体展示技术的原理噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码基因或目的基因片段克隆入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。
被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。
肽库与固相上的靶蛋白分子经过一定时间孵育后，洗去未结合的游离噬菌体，然后以竞争受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体,洗脱的噬菌体感染宿主细胞后经繁殖扩增，进行下一轮洗脱，经过3轮-5轮的“吸附-洗脱-扩增”后，与靶分子特异结合的噬菌体得到高度富集。
所得的噬菌体制剂可用来做进一步富集有期望结合特性的目标噬菌体。
二．常用的噬菌体展示系统-单链丝状噬菌体展示系统（1）PIII展示系统丝状噬菌体是单链DNA病毒，PI是病毒的次要外壳蛋白，位于病毒颗粒的尾端，是噬菌体感染大肠埃希菌所必须的。
每个病毒颗粒都有3个-5个拷贝PI蛋白，其在结构上可分为N1、N2和CT 3个功能区域，这3个功能区域由两段富含甘氨酸的连接肽G1和G2连接。
其中，N1和N2与噬菌体吸附大肠埃希菌菌毛及穿透细胞膜有关，而CT构成噬菌体外壳蛋白结构的一部分，并将整个PI蛋白的C端结构域锚定于噬菌体的一端。
PII有2个位点可供外源序列插入，当外源的多肽或蛋白质融合于PI蛋白的信号肽（SgII）和N1之间时，该系统保留了完整的PI蛋白，噬菌体仍有感染性；但若外源多肽或蛋白直接与PI蛋白的CT结构域相连，则噬菌体丧失感染性，这时重组噬菌体的感染性由辅助噬菌体表达的完整PI蛋白来提供。
PI蛋白很容易被蛋白水解酶水解，所以有辅助噬菌体超感染时，可以使每个噬菌体平均展示不到一个融合蛋白，即所谓“单价”噬菌体。
（2）PVIII展示系统PVI是丝状噬菌体的主要外壳蛋白，位于噬菌体外侧，C端与DNA结合，N端伸出噬菌体外，每个病毒颗粒有2700个左右PV拷贝。
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噬菌体展示技术原理及应用知识讲 解
6、法律的基础有两个，而且只有两个……公平和实用。——伯克 7、有两种和平的暴力，那就是法律和礼节。——歌德
8、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亚里士多德 9、上帝把法律和公平凑合在一起，可是人类却把它拆开。——查·科尔顿 10、一切法律都是无用的，因为好人用不着它们，而坏人又不会因为它们而变得规矩起来。——德谟耶克斯
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
6、法律的基础有两个，而且只有两个……公平和实用。——伯克 7、有两种和平的暴力，那就是法律和礼节。——歌德
8、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亚里士多德 9、上帝把法律和公平凑合在一起，可是人类却把它拆开。——查·科尔顿 10、一切法律都是无用的，因为好人用不着它们，而坏人又不会因为它们而变得规矩起来。——德谟耶克斯
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根