微生物的无菌操作及接种技术
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
接种工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
材料
器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架
菌种 培养基：
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射15min. 定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
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无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、
工作台等
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进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒
第四章 微生物无菌操作及接种技术
微生物无菌操作技术 接种技术 工业生产中的微生物接种
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生 物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 无菌操作目的：
保证待检物品不被环境中微生物污染； 防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。
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※ 斜面接种
3）接种： （5）取菌: 接种环冷却，轻
沾取少量菌体或胞子， 然后将接种环移出菌种 管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌 接种环不可通过火焰。
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※ 斜面接种
3）接种：
（6）接种: 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从 斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培 养基。 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作 斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
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※ 斜面接种
3）接种： （4）拔管塞： 用右手的无
名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
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（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
• 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜 面培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
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※ 斜面接种
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※ 斜面接种
3）接种：
(7) 塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞 旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁 空气。
(8) 将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
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斜面接种示意图
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2、常用的接种方法
※ 液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法：
微生物无菌操作技术与接种技术
二、原理：
无菌技术：指在微生物实验工作中， 控制或防止各类微生物的污染及其干 扰的一系列操作方法和有关措施。
接种：将微生物接到适于它生长繁殖 的人工培养基上或活的生物体内的过 程。
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二、 微生物接种技术
接种的准备工作
无菌环境的要求与保持 进入无菌室前的准备 无菌操作的要求
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、
鞋。
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无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的
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垂直流超净工作台
垂直流超净工作台
水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
消毒桶内消毒。
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无菌操作要求
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无菌操作要求
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（二）接种的操作方法
接种的基本程序 常用接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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（二）接种的操作方法
1、接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
沾取标本 接种
灭菌接种环
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。源自文库•实验使用的物品使用前后需严格灭菌
接种的操作方法
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（一）接种的准备工作
无菌环境的要求与保持
无菌室 无菌环境 超净工作台
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无菌环境的要求与保持
1、无菌室 （1）无菌室的结构： 应有更衣间、缓冲间、
操作间 应有良好的通风条件，
安装空调设备及过滤设 备
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无菌室的结构
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无菌环境的要求与保持
（2）无菌室的消毒和防污染 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖
动态。
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无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
接种工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作材料：
材料
器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架
菌种 培养基：
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射15min. 定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
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无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、
工作台等
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进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒
第四章 微生物无菌操作及接种技术
微生物无菌操作技术 接种技术 工业生产中的微生物接种
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一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生 物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 无菌操作目的：
保证待检物品不被环境中微生物污染； 防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。
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※ 斜面接种
3）接种： （5）取菌: 接种环冷却，轻
沾取少量菌体或胞子， 然后将接种环移出菌种 管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌 接种环不可通过火焰。
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※ 斜面接种
3）接种：
（6）接种: 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从 斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培 养基。 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作 斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
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※ 斜面接种
3）接种： （4）拔管塞： 用右手的无
名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
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（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
• 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜 面培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
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※ 斜面接种
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※ 斜面接种
3）接种：
(7) 塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞 旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁 空气。
(8) 将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
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斜面接种示意图
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2、常用的接种方法
※ 液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法：
微生物无菌操作技术与接种技术
二、原理：
无菌技术：指在微生物实验工作中， 控制或防止各类微生物的污染及其干 扰的一系列操作方法和有关措施。
接种：将微生物接到适于它生长繁殖 的人工培养基上或活的生物体内的过 程。
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二、 微生物接种技术
接种的准备工作
无菌环境的要求与保持 进入无菌室前的准备 无菌操作的要求
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、
鞋。
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无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的
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垂直流超净工作台
垂直流超净工作台
水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
消毒桶内消毒。
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无菌操作要求
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无菌操作要求
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（二）接种的操作方法
接种的基本程序 常用接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
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（二）接种的操作方法
1、接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
沾取标本 接种
灭菌接种环
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。源自文库•实验使用的物品使用前后需严格灭菌
接种的操作方法
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（一）接种的准备工作
无菌环境的要求与保持
无菌室 无菌环境 超净工作台
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无菌环境的要求与保持
1、无菌室 （1）无菌室的结构： 应有更衣间、缓冲间、
操作间 应有良好的通风条件，
安装空调设备及过滤设 备
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无菌室的结构
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无菌环境的要求与保持
（2）无菌室的消毒和防污染 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖
动态。
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无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。