7第七章 植物的器官培养

接后1周
侧根
无菌种子
1.2cm
根 无 性 反复转接 繁 殖 系
3.根无性繁殖性的建立
4.植株再生培养
离 体 根 愈 伤 组 织 分 化 芽 再 生 植 株
脱分化培养基
再分化培养基
人参根消毒、接种操作程序图
二、茎尖培养
• 1.茎尖培养概念、意义及类型 • 2.普通茎尖培养方法 • 3.影响茎尖培养的因素
3.接种
•外植体大小： 5×5mm薄片
• 上表皮朝上接种培 养基。最好带叶脉， 注意极性
4.培养
培养基：
MS、B5、White 、N6；蔗糖3%；2.4－D利于 愈伤组织形成，NAA抑制芽形成，利于根发 生，KT、6BA利于芽形成。 愈伤组织诱导：BA 1-3mg/L,NAA 0.25 mg/L； 分化培养：CTK 2 mg/L； 生根培养：NAA 0.5－1.0 mg/L
1.茎尖培养概念及类型
概念：切取茎的先端或茎尖分生组织 进行无菌培养.
意义：微茎尖培养可获得脱毒苗；茎尖培 养技术简单，操作方便，易成活，成苗时 间短，加快繁殖。
1.茎尖培养概念及类型
类型：根据培养目的和取材大小分为： 微茎尖培养;普通茎尖培养
普通茎尖指几毫米到 几十毫米的芽尖及侧 芽。
微茎尖为0.3-0.5mm
2.4 培养
一、培养基
①基本培养基：MS、White、B5、Heller、 Gautheret。 ②蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。 ③激素和有机添加物有明显影响。但激 素浓度以0.1mg/L为宜，不要太高。
2.4
培养
二、初代培养 ①光强：1000－3000lx；光照时间： 16h。光的作用？
②温度：2 5℃左右 ③ 昼夜温差有或无，以植物或培养过 程来定 ④ 干燥季节注意保湿。如何做？
第二节 生殖器官的培养
一、花器培养 二、种子培养 三、胚胎培养 四、胚珠培养 五、子房培养 六、胚乳培养
一、花器培养
1.取材及处理
以健壮植株未开放花 蕾为外植体，75%酒精 浸30S，饱和漂白粉浸 10-15分，无菌水冲洗 数次。
2.培养基：MS、B5等
3.接种： 花蕾培养：花梗插入培 养基中。 部分花器培养：切片接入 培养基中。 4.培养：
总结：
复习思考题：
1.理解离体根培养的意义 2.普通茎尖培养与微茎尖培养的区别 是什么？ 3.茎尖培养大致步骤是什么?
复习提问：
1.扦插繁殖是如 何进行的？
复习提问：
2.请说出冬季枝 条的形态特性
三、茎段培养
• 1.含义及意义 • 2.材料选择与处理 • 3.培养 • 4.移栽
1.茎段培养的含义及意义
三、胚胎培养
3.幼胚培养
A.种子表面消毒后，在无菌条件和高倍解 剖镜下切取完整胚，然后接种。 B.培养基：White Rangwang MS B5 Nitsch 无机盐+糖(3-5%)+生长辅助物质(维生素、 AA、椰乳等)
三、胚胎培养
4.影响因素：
A.pH值在5.2-6.3，与植物有关。 B.温度：多数胚25℃，有的需变温或较低较高 温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替对幼胚生长 有利，光照不利于胚根生长。
复习思考题： 1、植物胚胎培养分为哪些类型？各有何种特点和要求？ 2、胚胎培养有何意义？ 3.花器官培养通常指花的哪些部分培养?常用的基本培Байду номын сангаас养基是什么? 4.在进行幼胚培养时，由于幼胚过小而分离困难，可 采取什么途径解决?
五、子房培养
1.摘取时间：在开花前1－5 天摘下未授粉子房；或授粉 后摘下子房。 2.灭菌：禾谷类用70%酒精擦 洗幼穗；双子叶植物花蕾用 饱和漂白粉灭菌15分；子房 用70%酒精浸30秒，0.1%升汞 15－20分。无菌水冲洗，无 菌滤纸吸干。
花组成 柱头 花柱 子房
花托
花梗
五、子房培养
3.接种：
2.普通茎尖培养方法
取 材
消材 毒料 处 理 及
接 种
培 养
驯 化 移 栽
菊花茎尖消毒、接种操作程序图
2.1 取材
①直接取材：在生
长旺盛、枝条健壮、 无病的母株上选生长 不久、杂菌污染少的 顶梢（1－2cm）（取 前可喷杀菌药，可顶 芽或侧芽）。
取1-2㎝顶梢
②从试管苗获取。
2.2材料处理及消毒
继代增殖途径：促腋芽快速生长；诱导 形成不定芽。
3.接种与培养
生根培养： NAA0.1-1.0mg/L,IAA、IBA可 稍高。加0.3%活性炭的同时， 增强光强和时间。
质思 是考 什茎 么段 ？接 种 的 实
三、离体叶的培养
1.成苗途径与意义 2.材料选择与消毒 3.接种 4.培养
1.成苗途径与意义
三、胚胎培养
4.影响因素：
D.幼胚需高无机盐、高AA、高蔗糖、高渗 透压。 E.液体培养基利于幼胚培养，固体培养基 利于成熟胚培养。
四、胚珠培养
柱头 反足细胞 株心 卵细胞 胚囊 极核 子房 花柱
珠 被
珠 孔 胚 珠 株柄 花组成
花托
花梗
四、胚珠培养
未受精胚珠
大孢子或卵分化为 单倍体植株 发育成种子
无菌条件下剥开幼花，夹出子房并接 种于培养基（MS、N6等）。
4.培养： T26℃,RH50-60%，16h散射光。
六、胚乳培养(以自学为主)
1.材料选择与灭菌
2.接种
3.培养
复习思考题：
1.如何估测组培苗的增殖率？ 2.材料坏死等组培常见问题产生的原 因有哪些？怎样预防？ 3.组培快繁时如何综合调控，以杜绝 或减少组培易发问题的发生？ 4.如何科学合理制定并实施组培苗快 繁计划？ 5.提高组培效益的措施有哪些？
注：选材和激素配比
4.培养
培养条件：
25－28℃，10－14h光照，1500-3000lx （不定芽分化和生长再强些）。
总结：
复习思考题：
1.茎段培养与茎尖培养有何区别？ 2.茎段培养的含义、意义及实质是什么？ 其大致步骤怎样？ 3.叶片培养大致过程如何？
第二节 生殖器官的培养
教学目的: 掌握花器、种子培养方法；一般掌握胚 胎、胚珠、胚乳培养的方法。
受精胚珠 愈伤组织
再生植株
四、胚珠培养
适 宜 时 间 摘 取 子 房
70 5 % 次 氯 酸 钠 液 中 灭 菌 10 分 钟
酒 精 表 面 消 毒 30 S
无 菌 水 冲 洗 数 次
无 菌 条 件 下 取 出 胚 珠
%
接 种 于 固 体 培 养 基
培 养
基本培养基： MS Nistch White
▲
▲
▲
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一、离体根的培养
1.理论和实践意义
①生理代谢研究的优良实验体系
②研究器官分化形态建成的良好体系
③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种
2.培养基
多为无机离子浓度低的怀特培养基。也 可用2／3 MS或1／2MS、B5培养基
注：离体根生长要求
提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮 效果好，加入B1、B6最重要，生长素对 离体根影响不一致。培养温度25－27℃， 暗光培养。
讨论：
茎尖生长过慢、过快、正常的现象 及原因？
2.4
培养
三、继代培养 ①新梢反复切段接种增殖，即微型扦插， 培养基可用MS0 ② 诱导不定芽 ③诱导原球茎 四、诱导生根： 1／2MS；蔗糖1－1.5%； 增光。
芽丛及切割
2.5
驯化移栽
3、影响茎尖培养的因素
• • • • • • • • • • • 基因型 外植体大小 生理状态 芽在植株上部位 母株年龄 培养基 褐变和玻璃化 极性 后生变化 中间繁殖体的形态发生能力 遗传稳定性
加入生长素和CTK，诱 导形成愈伤组织或胚状 体，再分化成植株。
二、种子培养
优点：
1.植株分化容易，无菌操作方便， 打破休眠。 2.使杂种败育种子正常萌发。
二、种子培养
优点：
1.植株分化容易，无菌操作方便， 打破休眠。 2.使杂种败育种子正常萌发。
2.培养基：
A.促种子萌发用MS培养基，加或不加激 素，诱导愈伤组织则可加入6BA或 2,4-D。 B.无胚乳种子应适当加生长素。 C.一般糖浓度为1-3%。 D.打破休眠可加GA，或在接种前浸种处 理。 3.接种培养：种子接入培养基。2028℃，2000lx,光照12h。
第五章 植物器官培养
• 目的要求：
• 熟练掌握茎尖、茎段、叶、花器培养的方法； 一般掌握根、种子、胚胎、胚珠、胚乳、子 房培养的方法；理解并掌握组培易发问题的 原因与对策。 • 重点：茎尖、茎段、叶片培养基及培养步骤 • 主要内容： • 营养器官的培养 • 生殖器官的培养
第一节 营养器官的培养
一、离体根的培养 二、茎尖培养 三、茎段培养 四、离体叶的培养
①顶梢切割成0.5－1.0cm的茎尖
（除叶,剥去休眠芽的鳞片）
②茎尖流水冲洗2－4h
③75%酒精迅速漂洗30s
④0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液 消毒5－8min(取自老枝条上的可适当延 长时间）
2.3
接种
接前可再剥去一些叶片。然后 随切随接，动作迅速。亦可将切下 茎尖材料在1－5% VC液中浸一下。
三、胚胎培养
1.优点： ①克服远缘杂种的不育性。 ②使胚发育不全的植物获得后代。 ③缩短育种年限。 ④研究与胚发育有关的内外因素。
三、胚胎培养
2.成熟胚培养
A.种子表面消毒后，在无菌条件下剥离 出胚，接种于MS或MS+生长激素+(GA) B.培养基：White Tukey Randoiph
无机盐+糖(1-2%)+生长辅助物质(激素、 AA、活性炭、维生素等)
2.材料选择与处理
• 嫩枝去叶，剪3-4cm长
• 水冲洗1-3h,75%酒精 30-60s， 0.1% 升汞38min(饱和漂白粉液1020min，无菌水冲洗数 次。 •注：生长期取芽，外植 体取枝条顶部或中部茎 段。
3.接种与培养
培养基：MS
腋芽增殖效果 ：BA KT、ZT，生长素 改善苗生长，GA促芽伸长。注意激素 配比。
叶原基
叶 叶 子 叶 鞘 片 叶 柄
愈 伤 组 织
不定芽
茎 和 根
试 管 苗
叶片诱导愈伤组织
2.材料选择与灭菌
• A.幼嫩叶片流水冲洗 • B.70－75%酒精漂洗10s（未充分展 开的嫩叶用酒精棉球擦拭叶2面） • C.饱和漂白粉液浸3－15min（或在 0.1%升汞液5-8min） • D.无菌水冲洗多次后，用无菌滤纸 吸干水分 • 注：幼嫩与成熟叶片消毒时间不同