生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义

横切胸骨柄，暴露胸腹腔
观察胸腹腔器官变化
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纵切胸骨柄
取出胸腔器官
剖开颅腔
暴露脑部
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依据剖检病变推导可能发生疫病
器
官
症状/病变
疑似疾病
耳尖、屁股、腹部发紫
背部发紫，规则菱形，边缘 整体
全身通红
体
鼻子流血和/泡沫
表
背部点状出血、毛孔出血、 皮肤发白
会阴、臀部、四肢出现周边 紫色，中间白色圆形、边缘 紫褐色纽扣状坏死
支气管淋巴结、肠系膜淋巴结髓样 肿胀
中毒，内源性毒素：弓形 体、胸膜肺炎、链球菌、 猪丹毒 贫血，蓝耳、附红细胞体 猪炭疽、链球菌病 猪瘟、蓝耳、猪肺疫 圆环病毒2型
猪结核
急性猪肺疫、猪丹毒、链 球菌病 猪气喘病、猪肺疫、传染 性胸膜肺炎、副伤寒 16
喉头出血
呼 扁桃体化脓、出血 吸 道 喉头有泡沫
生猪重要疫病样品采集要求 与实验室检测意义
李峰 研究员 山东省滨州畜牧兽医研究院 山东省生猪创新团队滨州综合试验站
生猪重要疫病实验室检测技术研1修班
分享内容
• 实验室检测的重要意义 • 实验室检测的主要内容 • 生猪主要疫病样品采集要求与注意事项 • 其他样品采集要求
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实验室检测的重要意义
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➢明确所发生的疾病种类： • 传染性因素：细菌、病毒、支原体、其它微
↓ 细菌的生化试验
↓ 药物敏感试验
总RNA的提取 ↓
反转录 ↓
聚合酶链式反应 （PCR）
DNA
提取 ↓ PCR
结果分析
血清学检测
➢ 猪瘟病毒抗体 ➢ 猪伪狂犬病病毒 gPI抗体(野毒) ➢ 猪流感血凝抑制试 验 ➢ 猪细小病毒病乳胶 凝集试验（LAT） ➢ 猪繁殖与呼吸综合 征病毒抗体
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生猪主要疫病样品采集要求
肾 淤血、肿大
灰白色、表面隆突不平 膀 粘膜层有出血斑点 胱
睾 1个或2个睾丸肿大、发 丸 炎、坏死或萎缩 关
肿大、积液 节
猪瘟、伪狂犬 猪丹毒、梭菌、链球菌（紫红色 、红棕色）；蓝耳（紫黑色）；增 生性肠炎（灰黑色，肾乳头淡黑色） 圆环病毒 猪瘟
乙型脑炎、布氏杆菌病
副猪、链球菌
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依据病种确定主要采集病料
3、合理采样 ：群体发病时，至少采5头动物的病料。每 一种样品应有足够的数量。
4、无菌采样 ：无菌操作，尤其是供微生物学检查和血清 学检查的样品
5、安全采样：注意人员安全，防止感染，防止病原扩散 造成环境污染。
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病理剖检
腹部朝上平放 颈部淋巴结
切开四肢
股内则淋巴结
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剖检颌、颈部
皮下组织、颌下淋巴结观察
气管有很多粘液
猪瘟 猪瘟、伪狂犬 蓝耳、副猪、传胸 细菌性疾病
出血斑点
猪瘟
纤维素性肺炎
猪肺疫、传染性胸膜肺炎
肺
心叶、尖叶、中间叶肝样变 水肿，小点状坏死
气喘病 弓形体病
粟粒性、干酪样结节
结核病
表面零星、边界清楚、湿润肉样变 流感
心包积液
心包炎、心外膜炎（绒毛心）
心
心外膜斑点状出血 心肌条纹状坏死带
脏 心内膜出血
生物； • 非传染性因素 • 单纯感染 /混合感染 • 是否为人兽共患病
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➢病原分子生物学检测分析
• 区域优势毒株基因型分析 • 病原分子进化与演变 • 病原分子序列与疫苗比对
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➢细菌培养与药物敏感性试验
• 细菌初步鉴定：毒力、血清型 • 药物敏感性试验：解决合理用药问题 • 自家疫苗试制：技术储备
粘膜下水肿
水肿病
胃壁增厚
水肿、大肠杆菌、魏氏梭菌
乳糜管内无脂肪、出血
病毒性腹泻
乳糜管内有脂肪
细菌、球虫或营养性腹泻
肠壁有白色绿豆大肉芽肿、 沙门氏菌、食道线虫（大肠）、
淋巴滤泡增生 肠
浆膜出血
球虫（结肠、盲肠） 猪瘟
回盲瓣出血、坏死，盲肠扣 猪瘟
状肿
肠粘膜出血
流感、梭菌性肠炎、增生性肠炎19
苍白，针尖状出血
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Leabharlann Baidu样原则
1、适时采集 ：尽可能采集到新鲜样品。用于分离病原体 的，须在病初发热期或出现典型临诊症状时采集；若制备血 清，空腹时采血。尸体上采样，应在动物死后立即采集。
2、典型采样 ：样品具有代表性。选择典型动物，即未经 药物治疗、病状典型的动物；选择典型材料，病原体含量最 高的材料；尸体采样，采集有病变组织、器官或病变最明显 、最典型的部位。
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➢开展抗体检测
• 疫苗免疫抗体监测与评价 • 野毒感染状况调查与评价：PRV、传胸 • 免疫程序调整与优化：母源抗体检测 • 疫病净化评价
类别
场数 阳性场数 阳性场占比% 样品数 阳性数 样品阳性率%
免疫场
≧30头
<30头
18
17
非免疫场
≧30头
<30头
2
6
10
6
1
3
55.56
35.29
50.0
心瓣膜呈菜花样
心肌内有米粒大灰白色包囊泡
副猪、传胸
副猪、传胸、气喘病
猪瘟、猪肺疫、链球菌病
口蹄疫
败血症
链球菌、慢性猪丹毒
猪囊尾蚴病
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淤血肿大
沙门氏菌
表面灰白色或灰黄色纤维素 沙门氏菌病、副猪、大肠杆菌
白色坏死点，弥漫性坏死 肝
脂肪肝
沙门氏菌、伪狂犬、霉菌毒素、 中毒
传染性胃肠炎、流行性腹泻、仔 猪大肠杆菌
微循环障碍：猪瘟、弓形体 猪丹毒 链球菌 胸膜肺炎 附红细胞体、蓝耳病
圆环病毒
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血 血液黑或发紫，不凝固 液
血液不凝固、稀薄 颌下淋巴结肿大，出血性坏死 全身淋巴结有大理石样出血变化 腹股沟浅淋巴结水肿、切口外翻， 表面苍白，渗出透明液体 淋 咽、颈及肠系膜淋巴结黄白色干酪 巴 样坏死灶 结 淋巴结充血、水肿、小点状出血
病名 病原
主要临床症状
特征病理变化 主要病料采集 实验室诊断
猪瘟
猪繁殖 与呼吸 障碍综 合征 （蓝耳 病）
HCV PRRSV
体温41℃左右，脓 性结膜炎， 皮肤
红斑点，指压不退 色，先 便秘后腹
泻，公猪包皮囊积 尿， 小猪多有神 经症状。
胆囊肿大、胆汁粘稠
沙门氏菌
胆囊肿大，胆汁呈黄色泥状 圆环病毒
脾边缘有锯齿状出血、梗死 猪瘟、仔猪副伤寒
弥漫性出血 脾
淤血肿大，坏死
猪瘟、猪丹毒、弓形体、猪肺疫 弓形体病，霉菌毒素中毒（全）
脾边缘有小点状出血
仔猪红痢
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胃粘膜斑点状出血，溃疡 猪瘟、胃溃疡
胃粘膜充血、卡他性炎症， 猪丹毒、食物中毒
胃 呈大红布样/麦麸状假膜 副伤寒
50.0
187
66
22
28
43
17
7
10
22.99
25.76
31.82
猪伪狂犬gE抗体检测情况统计
35.71
合计
43 20 46.51 303 77 25.41
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实验室检测的主要内容
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细菌分离
病猪的剖检
↓
病猪病料的采集、保存
↓
分子诊断
细菌的染色
↓ 形态学观察
↓ 培养基的制备
↓ 细菌分离培养
↓ 纯化