银耳多糖水浸提取
银耳多糖的提取
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乙 醇 丙 酮 乙 醚依 次 洗 涤
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℃ 烘 干 即得银 耳粗 多 糖 呈 白色 纤维状
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加
银 耳粗 多 糖 纯 化 将 银 耳 粗 多糖 溶 于 适 量 蒸 溜 水 中 加 热 促 溶 得 无 色 粘 稠 状 液 体 溶 液体 积的 氯仿 再 加 溶 液 体积 的正 丁 醇 剧 烈 摇 动 分 钟 离心 分 离 出 白 色
收 稿 日期
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变性 蛋 白 重 复 进行 次 白色沉 淀基 本 消失 说 明 蛋 白质 已 基 本 除 尽 溶 液 再 逆 流 水透 乙 醇沉 淀 抽 滤 洗 涤 ℃烘干 析 天 最后 一 天 换 用 蒸 溜 水 浸 泡 次 浓 缩 后 用 得 白色纤 维 状 银 耳 多糖 结 果 与 讨论
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银 耳 多 糖的 收 率 为
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经 药理 试验
表 明 银耳 多 糖 能 增 强 小 白 鼠 腹腔 巨 噬 细胞 的 吞 噬 功 能 抑 制肿 瘤 生 长 增强 机 体 的免疫 力 现 将 银 耳 多 糖 的提 取 过 程报 告如 下
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仪器 与 材 料 仪 器 提 取 用 容 器 电炉 烘 箱 材料 干 银耳 洒 精 氯 仿 正 丁醇 乙 醚等 实 验方 法 银 耳 多 糖 的提 取 称取 干 银 耳 克 用水 浸 泡 数 小 时 去 蒂 绞 碎 加 毫 升 蒸馏 约 小 时 左 右 滤 去银耳 渣 再 按同 法煮 提 一 次 合 并滤 液 浓缩 至 粘 稠 并 将 沸 腾的 水煮 浓 缩 液迅 速 倒入 倍 体 积的 乙 醇 中 搅 伴 均 匀 沉淀 静置 离 心 分 离 后抽 滤 经 无 水
一种非乙醇沉淀的高分子量银耳多糖及其制备方法
一种非乙醇沉淀的高分子量银耳多糖及其制备方法高分子量银耳多糖是一种非乙醇沉淀的多糖，具有多种生物活性和药理作用。
本文将介绍一种制备高分子量银耳多糖的方法。
首先，制备高分子量银耳多糖的原料是银耳菌丝体。
银耳是一种珍稀的食用真菌，其菌丝体富含多糖。
可以通过培养银耳菌丝体来获取菌丝体。
接下来，将获取的银耳菌丝体进行水提取。
将银耳菌丝体研磨成细粉，然后加入适量的水，进行浸泡和搅拌，提取其中的多糖。
水提取可以通过温泉提取法等方式进行。
提取得到的多糖溶液需要进行精制。
首先，可以通过过滤的方式去除杂质和残渣。
然后，可以采用离心分离的方法去除不溶性物质。
离心可以使多糖溶液中的悬浮颗粒沉淀到底部，得到纯净的溶液。
得到的多糖溶液可以进行浓缩。
可以通过真空浓缩法或喷雾干燥法对多糖溶液进行浓缩，得到高浓度的多糖。
浓缩过程中需要注意控制温度和压力，以保证多糖的活性和稳定性。
浓缩得到的多糖溶液可以通过反渗透膜法进行分离纯化。
反渗透膜法可以将溶液中的溶质与溶剂分离开来，得到纯净的多糖溶液。
反渗透膜法需要选择适当的膜材和操作条件，以保证分离效果。
分离纯化得到的多糖溶液可以进行进一步的活性检测和鉴定。
可以使用不同的分析方法，如高效液相色谱法、凝胶渗透色谱法、核磁共振法等，对多糖进行结构分析和质量评估。
最后，可以将高分子量银耳多糖制备成不同形式的制剂。
可以制备成粉剂、胶囊、片剂、注射剂等，以满足不同的应用需求。
制剂的制备需要考虑多糖的稳定性和活性，选择适当的辅料和工艺条件。
综上所述，制备高分子量银耳多糖的方法包括银耳菌丝体的水提取、溶液的精制、浓缩和纯化、多糖的活性检测和鉴定，以及制剂的制备等步骤。
这种非乙醇沉淀的多糖具有广泛的应用前景，可以用于食品、保健品和药品等领域。
银耳多糖的提取工艺
银耳多糖的提取工艺李帅涛摘要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。
本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。
关键词：银耳多糖；酶解法；提取工艺引言：我国银耳资源丰富，为开发应用银耳多糖提供了有利条件。
近年来，有关银耳多糖的研究越来越多，但这些研究多为银耳多糖的化学特性和药理作用方面的研究，少有关于银耳中提取银耳多糖的研究。
目前银耳多糖的提取方法多为热水浸提法或酸碱法提取，但热水浸提法耗时过长，且收率较底，费时费力，因此不适合大规模的工业生产，而酸碱法提取虽然提取时间较短，却会破坏银耳多糖立的生物活性，使提取到的银耳多糖药用效果大大下降。
本试验主要研究使用果胶酶酶解银耳，热水提取的技术来提取银耳多糖的方法。
而如今生物工程工艺发展迅速，生物制品价格不断下降，这为用酶解法提取银耳多糖提供了可行性。
用酶解法提取银耳多糖不仅能缩短单纯用热水法提取的时间，还不会像酸碱法那样破坏银耳多糖的生物活性。
材料与设备:①实验材料：银耳;葡萄糖(分析纯):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中，定容至1000ml;果胶酶：按100ml:1g加入果胶酶;苯酚（分析纯）;精确量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中，定容至100ml;浓硫酸(发烟硫酸)②实验设备：101型电热鼓风干燥；YP202N型电子天平；HH系列恒温水浴锅；电子万用炉;TDZ5-WS型台式低俗离心机；722E型可见分光光度计分离与纯化：取市售银耳适量，洗净，70℃烘干后，破碎成粉末状，称取粉末0.5g（2%），果胶酶0.25g（1%），同时加入蒸馏水25mL，迅速置于45℃水浴锅中酶解，3个样品为一组，第一组酶解30min，第二组酶解45min，第三组酶解60min。
一种银耳多糖的高纯度提取方法[发明专利]
![一种银耳多糖的高纯度提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/0d9e1a2b0c22590103029d82.png)
专利名称：一种银耳多糖的高纯度提取方法专利类型：发明专利
发明人：王亚,朱学周
申请号：CN201710712040.2
申请日：20170818
公开号：CN107383228A
公开日：
20171124
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种银耳多糖的高纯度提取方法，包括以下步骤：S1、取银耳，水洗，风干剪碎，真空烘干，粉碎，超微震碎；S2、按料水比1:40在100℃水中浸提4h，于沸水浴中加热搅拌8h，离心去除残渣，上清液用硅藻土助滤，水洗，合并滤液后于80℃水浴中搅拌至糖浆状；S3、用2mol/LNaOH调至PH=7，用微滤膜进行过滤，采用膜蒸馏得到原料液；S4、原料液通过增加泵进入超滤装置，利用超滤膜进行3次循环浓缩分离，进行膜蒸馏，浓缩分离，得到浓缩液；采用微滤膜进行过滤，得到原料液，再经超滤装置进行浓缩得到的银耳多糖纯度高，适合大规模生产，且生产周期短，与传统工艺设备相比，设备运行费用低，能有效降低生产成本，提高企业经济效益。
申请人：合肥丰洁生物科技有限公司
地址：230000 安徽省合肥市经济技术开发区宝塔路以西、齐云路以北综合厂房605室
国籍：CN
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银耳多糖提取实验报告
一、实验目的1. 学习银耳多糖的提取方法；2. 掌握银耳多糖的纯化技术；3. 分析银耳多糖的溶液性质。
二、实验原理银耳多糖是一种具有多种生物活性的大分子物质，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化衰老、降血糖血脂、抗凝血血栓、抗溃疡、促进蛋白质合成、抗病毒、促进神经细胞生长及改善记忆力等多方面的活性。
银耳多糖的提取主要是利用银耳中的多糖类物质，通过物理或化学方法将其从银耳中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：椴木银耳、2%的氢氧化钠、1%活性碳、5%的苯酚溶液、标准葡萄糖溶液、硫酸、乙醇、丙酮、乙醚、DEAE-C52、Sevage试剂、0.5mol·L-1盐酸、2mol·L-1 NaCl溶液。
2. 仪器：双重蒸馏水蒸馏器、超级恒温水浴、旋转蒸发仪RE52型、紫外可见分光光度计752N、低速大容量多管离心机LXJ-B型、透析袋、铝锅、搅拌器、天平、精密电子天平、电炉等。
四、实验方法1. 银耳多糖的提取（1）将椴木银耳洗净，浸泡于水中，使其充分吸水膨胀；（2）将膨胀后的银耳煮沸30分钟，以破坏细胞结构，释放出银耳多糖；（3）将煮沸后的银耳过滤，收集滤液；（4）向滤液中加入2%的氢氧化钠，调节pH值至7.0；（5）加入1%活性碳，搅拌30分钟，以去除杂质；（6）过滤，收集滤液；（7）向滤液中加入5%的苯酚溶液，以沉淀银耳多糖；（8）将沉淀物离心，收集沉淀物；（9）将沉淀物用乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂洗涤，去除杂质；（10）将洗涤后的沉淀物在60℃下烘干，得到银耳多糖。
2. 银耳多糖的纯化（1）将银耳多糖溶解于水中，配成一定浓度的溶液；（2）将溶液通过DEAE-C52层析柱，以去除杂质；（3）收集层析柱流出液，加入Sevage试剂，以去除杂质；（4）将流出液离心，收集沉淀物；（5）将沉淀物用乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂洗涤，去除杂质；（6）将洗涤后的沉淀物在60℃下烘干，得到纯化的银耳多糖。
银耳多糖制备实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握银耳多糖的提取和分离纯化方法。
2. 了解银耳多糖的理化性质和生物活性。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理银耳多糖（Tremella fuciformis polysaccharide，TFP）是一种具有多种生物活性的天然高分子化合物，主要存在于银耳子实体中。
银耳多糖具有提高免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗肿瘤等生理活性，在食品、医药、化妆品等领域具有广泛的应用前景。
本实验采用水提醇沉法提取银耳多糖，该方法操作简便、成本低、提取效率较高。
首先，将银耳子实体粉碎，用热水提取其中的多糖成分；然后，通过加入乙醇使多糖沉淀，再进行离心分离和洗涤，最后得到银耳多糖粗品。
三、实验材料与仪器1. 实验材料- 银耳子实体：市售优质银耳- 试剂：95%乙醇、蒸馏水、氢氧化钠、氯化钠、苯酚、硫酸、活性炭等- 仪器：粉碎机、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、离心机、分析天平、紫外可见分光光度计等2. 实验步骤（1）银耳子实体粉碎：将银耳子实体洗净、干燥、粉碎，过60目筛，备用。
（2）提取：取粉碎后的银耳子实体10g，加入100mL蒸馏水，于80℃恒温水浴锅中提取2小时。
（3）醇沉：将提取液冷却至室温，加入95%乙醇，使溶液中乙醇浓度达到70%，静置过夜。
（4）离心分离：将醇沉后的溶液以3000r/min离心15分钟，取沉淀。
（5）洗涤：用95%乙醇和蒸馏水分别洗涤沉淀3次，每次30分钟。
（6）干燥：将洗涤后的沉淀置于50℃真空干燥箱中干燥，得到银耳多糖粗品。
（7）银耳多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定银耳多糖含量。
四、实验结果与分析1. 银耳多糖提取率根据苯酚-硫酸法测定，银耳多糖提取率为4.5%。
2. 银耳多糖的理化性质（1）外观：银耳多糖粗品为白色粉末，无异味。
（2）溶解性：银耳多糖在水中溶解度较好，在乙醇、丙酮等有机溶剂中不溶。
（3）分子量：通过凝胶渗透色谱（GPC）测定，银耳多糖分子量约为10万。
银耳提取银耳多糖的工艺流程
银耳提取银耳多糖的工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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实验一银耳多糖的制备
汇报人：XX
目录
银耳多糖的简介
01
实验步骤与操作
04
银耳多糖的制备方法
02
实验结果与数据分析
05
实验材料与设备
结论与展望
03
06
银耳多糖的简介
银耳多糖的来源
银耳：一种真菌，广泛用于食品和 药品
制备方法：热水浸提、醇沉淀等
添加标题
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来源：从银耳子实体中提取
添加标题
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应用领域：食品、保健品、药品等
实验材料与设备
实验材料
银耳
水
葡萄糖
硫酸
氢氧化钠
实验设备
银耳多糖制备设备：用于提取银耳多糖的专用设备 离心机：用于分离银耳多糖和杂质 烘箱：用于干燥银耳和提取物 搅拌器：用于混合银耳和其他材料
实验步骤与操作
实验准备
实验材料：银耳、 水、葡萄糖等
实验设备：粉碎 机、搅拌器、蒸 发皿等
实验试剂：硫酸、 氢氧化钠等
实验结果与数据 分析
实验结果记录
银耳多糖的得 率：XX%
分子量分布： 主要分布在XX
范围
纯度：通过色 谱分析，纯度
达到XX%
结构表征：通 过红外光谱和 核磁共振氢谱 证实了银耳多 糖的结构特征
数据分析与处理
实验数据收集： 确保数据的准确 性和完整性
数据预处理：清洗、 整理、转换数据， 使其符合分析要求
讨论：对实验结果进行深入讨论，探讨银耳多糖的潜在应用价值和未来研究方向，提出改进和优化实验方法的建议。
结论与展望
结论总结
银耳多糖具有显著的抗氧化 和抗炎作用，对健康有益。
银耳多糖的制备方法得到优 化，提高了提取率和纯度。
银耳多糖的提取工艺研究
银耳多糖的提取工艺研究周帅飞;毛淑敏;秦红岩;刘玉红【摘要】[目的]研究热水浸提法提取银耳多糖的最佳工艺条件.[方法]采用苯酚-硫酸法测定银耳总多糖的含量,以提取温度、提取时间、提取次数、溶剂用量为4个影响因素,每个因素分别设计3个水平进行正交试验,优化银耳多糖的提取工艺.[结果]试验表明,热水浸提法提取银耳多糖的最佳工艺为40倍量水,90℃提取3h,共提取2次,此条件下多糖得率最高.[结论]研究可为银耳多糖的开发应用提供参考依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(000)027【总页数】2页(P11148-11149)【关键词】银耳多糖;热水浸提法;正交试验;苯酚-硫酸法【作者】周帅飞;毛淑敏;秦红岩;刘玉红【作者单位】山东中医药大学,山东济南250355;山东中医药大学,山东济南250355;山东中医药大学,山东济南250355;山东中医药大学,山东济南250355【正文语种】中文【中图分类】S646.6银耳(Tremella fuciformis Berk)是一种经济价值高，营养丰富的药食两用菌，具有滋补生津、润肺养胃之功效。
研究表明，银耳中所含有的多糖具有广泛的生理活性，如提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血糖和降血脂等［1］。
目前，提取银耳多糖有热水浸提法、碱提取法、酸提取法、酶提取法等，郑良对这几种方法进行比较，发现热水浸提法多糖得率最高［2］;通过单因素设计考察研究，发现提取温度对多糖得率影响最大。
为了有效开发利用这一资源，笔者采用正交试验设计对热水浸提法提取银耳多糖的最佳工艺条件进行了研究。
1 材料与方法1．1 材料供试原料:银耳，济南建联中药有限公司，经鉴定为银耳(Tremella fuciformis Berk)的干燥子实体。
主要试剂:葡萄糖，上海化学试剂有限公司;苯酚，莱阳市康德化工有限公司;浓硫酸，莱阳经济技术开发区精细化工厂;以上均为分析纯。
主要仪器:UV-2550型紫外分光光度计，日本岛津仪器有限公司;SHZ-D(Ⅲ)型循环水真空泵，巩义市英峪高科技仪器厂;FA1104型分析天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司;XMT-DA型恒温水浴锅，余姚市亚星仪器有限公司。
银耳多糖咀嚼片的制备工艺的实验方案
银耳多糖咀嚼片的制备工艺的实验方案1、银耳粗多糖的提取1.1 提取的工艺流程1.2 操作要点1.2.1 原料粉碎将市售的银耳干品置于70℃电热鼓风干燥箱中干燥4h，之后机械粉碎机完全粉碎1.2.2 热水浸提将粉碎好的银耳干品以料液比1:60置于3000ml的锥形瓶中，90℃水浴，并不断搅拌浸提8h1.2.3 离心及浓缩将浸提好并已冷却的料液4000r/min，20min离心，收集上清液并浓缩至300ml左右1.2.4 乙醇沉淀向浓缩后的多糖溶液中加入其3倍体积95%乙醇并不断搅拌，隔夜后4000r/min，20min离心得沉淀，复溶，连续3次以上1.2.5 真空冷冻干燥2 银耳多糖咀嚼片的制备2.1 工艺流程2.2 操作要点2.2.1 原辅料准备银耳粗多糖粉碎，过100目筛，备用；辅料按照比例粉碎，过100目筛，备用2.2.2 混合将粉碎、过筛的原辅料按照比例混合均匀2.2.3 制软材待原辅料混合均匀后，缓慢加入润湿剂调和，待物料呈“手握成团，轻压即散”的状态，即制成软材。
2.2.4 造粒与干燥将制好的软材过18目筛造粒，后将湿粒置于不锈钢盘中，铺放均匀，于电热鼓风干燥箱中干燥，每20min翻动一次，干燥2-3h，其水分含量控制在2%2.2.5 整粒与压片干燥好的颗粒过20目筛整粒，之后加入其重量1%的硬脂酸镁作为润滑剂，混合均匀后压片，压制成0.3±0.05g/粒的片剂3 组成配方3.1银耳多糖与奶粉的配比本试验设定了银耳多糖与奶粉质量配比为9:1、8:2、7:3、6:4的4种配比比例，通过风味、色泽等感官评价进行筛选3.2 辅料的选择设定4因素3水平进行正交实验因素水平玉米淀粉A微晶纤维素B木糖醇C柠檬酸D 110% 5% 10%0.5%215%10% 15% 1.0%320%15% 20% 1.5%3.3 润湿剂的选择分别以40%、50%、60%、70%四个不同浓度的乙醇3.4 润滑剂的选择选取1%的硬脂酸镁3.5 干燥温度的选择选取50℃、60℃、70℃三个不同温度对湿粒进行干燥，通过颗粒的感官品质筛选出最佳的干燥温度。
一种银耳多糖的提取方法
一种银耳多糖的提取方法银耳是一种常见的食用菌，被广泛认可为具有多种营养价值和药用价值的食材。
其中，银耳多糖是一种重要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，开发一种高效的银耳多糖提取方法具有重要的理论和实际意义。
传统方法的不足传统的银耳多糖提取方法主要有酸法、酶解法和碱法等。
虽然这些方法可以提取出一定量的多糖，但由于操作复杂、操作时间长、产率低等问题，限制了多糖的大规模生产和应用。
因此，需开发一种高效、简便、环保的银耳多糖提取方法。
新型方法的开发近年来，随着科技的不断进步和发展，新型的银耳多糖提取方法不断涌现。
其中，超声波辅助提取和微波辅助提取是两种备受关注的方法。
超声波辅助提取技术利用超声波的机械效应、热效应和化学效应，提高了银耳多糖的提取效率。
首先，超声波的机械效应打破了银耳细胞壁，释放出细胞内的多糖。
其次，超声波的热效应提高了多糖的溶解度，有利于多糖的提取。
最后，超声波的化学效应激活了酶促反应，促进了多糖的释放。
由于超声波辅助提取技术可以显著缩短提取时间，提高提取产率，被认为是一种非常有潜力的提取方法。
微波辅助提取技术则利用微波的能量使银耳颗粒内部迅速发热，提高了溶剂中的温度和压力，促进了多糖的溶解和扩散。
该技术具有提取速度快、效果好和操作简单等优点，但需要控制提取功率、时间和温度，以免对多糖的结构和活性产生不良影响。
除了超声波辅助提取和微波辅助提取技术外，还可以结合其他辅助手段，如酶解法、磁场辅助法、真空深框法等，进一步提高银耳多糖的提取效率和产率。
实验步骤1. 初步处理：将银耳用水洗净，除去杂质和异物，切成小块备用。
2. 超声波辅助提取：将银耳放入适量的提取溶剂中，加入适量的酶和辅助剂，经过超声波处理，溶出多糖。
3. 过滤处理：将提取液通过滤纸过滤，分离出残渣和溶液。
4. 浓缩处理：将溶液经过浓缩器进行浓缩，减少溶剂的体积，得到浓缩液。
5. 沉淀处理：加入适量的酒精，沉淀多糖，并通过离心机分离出多糖沉淀。
银耳多糖的制备实验报告
银耳多糖的制备实验报告一、实验目的。
银耳多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等。
本实验旨在通过合适的方法从银耳中提取、分离和纯化银耳多糖，掌握多糖提取的基本原理和实验操作技能。
二、实验原理。
1. 提取原理。
- 银耳多糖为大分子化合物，在热水中溶解度增大。
利用热水浸提的方法，可以使银耳中的多糖溶解到水中。
同时，通过调节pH值，可以在一定程度上影响多糖的溶解性和稳定性，有利于多糖的提取。
2. 分离纯化原理。
- 采用乙醇沉淀法分离多糖。
多糖在高浓度乙醇中溶解度降低而析出。
还可以利用透析的方法去除小分子杂质，因为透析袋具有一定的截留分子量，小分子物质可以透过透析袋，而多糖分子由于分子量较大被截留在透析袋内。
三、实验材料与仪器。
1. 材料。
- 银耳（干品）、乙醇（分析纯）、氢氧化钠、盐酸等试剂。
2. 仪器。
- 电子天平、恒温水浴锅、离心机、透析袋、旋转蒸发仪、真空干燥箱等。
四、实验步骤。
1. 银耳预处理。
- 取适量干银耳，用清水冲洗干净，去除表面杂质。
然后将银耳剪成小块，置于烧杯中。
- 加入适量蒸馏水浸泡2 - 3小时，使银耳充分吸水膨胀。
这一步的目的是为了便于后续的提取操作，因为吸水膨胀后的银耳细胞结构更容易被破坏，多糖更容易溶出。
2. 热水浸提。
- 将浸泡后的银耳及浸泡液转移至圆底烧瓶中，按照一定料液比（如1:30，g/mL）加入蒸馏水。
- 用氢氧化钠调节pH值至8 - 9，在90 - 100°C的恒温水浴锅中加热提取2 - 3小时。
在此过程中，要不断搅拌，以促进多糖的溶出。
较高的温度和碱性环境有利于破坏银耳的细胞壁结构，使多糖更好地溶解到水中。
3. 离心分离。
- 提取结束后，将提取液冷却至室温，然后转移至离心管中。
- 在离心机中以4000 - 5000r/min的转速离心10 - 15分钟，分离出上清液。
离心的目的是去除残渣等不溶性杂质，得到含有多糖的上清液。
4. 乙醇沉淀。
- 量取上清液的体积，缓慢加入无水乙醇，使乙醇的终浓度达到70% - 80%（v/v）。
银耳多糖水浸提取
武汉工商学院生物制药工程技术论文学院：环境与生物工程学院专业：生物工程年级：2012级学生：夏继承学号1204011104 指导教师：乐薇职称: 副教授题目: 水浸提银耳多糖的关键技术研究2015年4月5日目录水浸提银耳多糖的关键技术研究 (1)摘要 (1)Abstract (1)2.实验试剂及仪器 (2)2.1实验试剂 (2)2.2实验仪器 (3)3.实验部分 (3)3.1标准曲线的制作 (3)3.2实验材料预处理 (4)3.3单因素试验 (4)3.3.1料水比单因素试验 (4)3.3.2温度单因素试验 (4)3.3.3pH值比单因素试验 (4)3.3.4时间单因素试验 (4)3.4单因数试验结果与讨论 (4)3.5正交试验 (6)3.6正交试验结果与讨论 (7)3.7验证性试验 (7)4.结论 (7)致谢 (9)水浸提银耳多糖的关键技术研究摘要为充分利用提取银耳多糖，探讨银耳多糖的水浸提的关键技术。
本设计用正交分析法研究了温度、pH值、料水比、时间等四个因数对银耳多糖的水浸提法的效率影响，并获得的最佳的提取条件为温度50℃，pH值12，料水比1:50，时间2h。
关键词：水浸提取；银耳多糖；关键技术Key techniques of water extraction oftremella polysaccharideAbstractTo make full use of tremella polysaccharide extracted, this paper discusses the key technology of tremella polysaccharide water leaching. This design for the four factor of water extraction of tremella polysaccharide extraction efficiency was studied, and obtain the best extraction conditions for temperature is 50 ℃, the pH value is 12, the ratio of material to water is 1:50, time is 2 hKey words: water immersion extraction; Tremella polysaccharide; The key technology11.前言银耳，生长于温带和亚热带地区，是有隔担子菌亚纲银耳科银耳的子实体，又称白木耳[1]。
银耳多糖的提取工艺
银耳多糖的提取工艺一、实验目的1、了解银耳多糖制备的基本原理。
2、掌握糖类物质提取的基本操作技术。
二、实验原理银耳是真菌的一种，是我国传统的珍贵药材之一，具有滋阴润肺、益胃生津等功效。
常用于治疗虚劳咳嗽、阴伤燥咳、虚热口渴等症。
银耳多糖是银耳的主要药效成分，银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能，抗炎症和抗放射等作用。
1、制备（提取）原理：银耳多糖易溶于水，但不溶于乙醇。
因此本实验采用沸水抽提、氯仿-正丁醇法除蛋白和乙醇沉淀分离制得银耳多糖粗品。
然后再进行定性分析。
2、分析（鉴定）原理：Molish反应多糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下，脱水形成糠醛及其衍生物，其与α-萘酚反应，作用生成紫色的化合物。
原理是羰基与酚类进行了缩合，这样，糖与浓酸作用后，再与α-萘酚反应，就能生成紫色的化合物。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有无糖的存在。
斐林试剂质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的氢氧化铜沉淀。
氢氧化铜与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。
用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：浅蓝色棕色砖红色（沉淀）。
三、实验试剂和器材1、银耳子实体2、乙醇3、乙醚4、丙酮5、Ssvag试剂：氯仿：正丁醇=6、Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配置，棕色瓶保存。
7、斐林试剂：甲液质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液；乙液质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液；临用时临时配置，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。
四、仪器和器材烧杯试管分液漏斗容量瓶电炉石棉网纱布离心机真空干燥箱电子天平五、实验步骤1、制备步骤（1）取银耳子实体10g加水300mL，直火提取1h，提取过程中不断用玻棒搅拌。
银耳多糖的提取及其清除自由基作用
表 l 去除杂蛋白、色素的步骤
去除杂蛋白
容 器 多糖溶液1 氯仿1 正丁醇 振摇时间 离心速度 离心时间
Hale Waihona Puke 分液漏斗251 51 l
30min 8000rpm 30min
以上操作重复 l0 ~ l2 次，直至无沉淀为止
脱
色
容 器 多糖溶液1 30% 的 H2O2 振摇时间 温度
分液漏斗
l01 l
30min 30 ~ 40C
每 100 克干银耳中大约含蛋白质（5 克）、脂肪
收稿日期：2005 - 11 - 26 基金项目：四川省中医药管理局重点及专项项目（2003A001，2003C001），成都大学校基金项目. 作者简介：颜 军（1971—），男，实验师，从事生物活性成分的提取及检测的研究.
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成都大学学报（ 自然科学版）
目前，自由基的致病机理引起了人们的极大 关注. 已有研究［1］表明，自由基在生物体内不断 地通过非酶反应与酶反应产生活性氧自由基，但 在抗氧化酶及外源性和内源性抗氧化剂的协同作 用下，活性氧自由基不断地被清除. 在正常生理 情况下，活性氧自由基可维持于有利无害的极低 水平，并保持稳衡性动态. 平衡浓度的活性氧自 由基中一部分可履行生理作用，而另一部分可损 伤生物分子. 生物体的细胞不时受到活性氧自由 基的攻击而发生损伤，不过损伤分子可以得到修 复、置换、降解、代谢和重新合成. 在衰老、应 激及某些病理情况下自由基产生增多或清除能力 减弱，使得自由基对肌体造成严重损伤.
银耳多糖不溶于冷水，可缓慢溶解于热水. 宜 采用多段溶出法以提高银耳多糖的得率. 将去除了 部分杂蛋白、色素、脂肪类物质的银耳粉加入 30 倍 的水，在 90 ~ l00C 的条件下浸提 2 小时，冷冻离 心，得一次浸提液，再加入适量水浸提，得二次浸 提液. 合并两次浸提的上清液备用. 2. 4 银耳粗多糖的醇析
药物分析论文银耳多糖纯化的检测分析
银耳多糖纯化的检测分析摘要：银耳中含有丰富的银耳多糖（约占银耳干重的60％～70％)。
本实验的主要内容是银耳多糖纯化的检测分析，首先对银耳采用水煮法按料水比1：40(m／v)在100℃水中浸提8h提取银耳多糖。
得到的提取液用硅藻土助虑，然后用1%、0.5%、1.5%的活性炭吸附脱色，最后用透析袋透析48h，透析液经离心、洗涤、真空干燥得到银耳多糖粗品。
经测得银耳多糖粗品的含糖量为31.3%。
关键词:银耳多糖；纯化；活性炭；透析1 前言银耳为真菌类，别名白木耳、雪耳、银耳子等【1】。
银耳所含化学成份比较复杂．主要可分为3大类，即多糖类、脂类和蛋白类(酶、蛋白质、氨基酸)，此外有无机盐、维生素B 族等。
灰分中含S、P、Fe、Mg、Ca、K、Na等成分。
银耳多糖是从银耳子实体或液体深层发酵的银耳孢子中提取出来的一种活性多糖，银耳多糖是银耳的主要有效成分(约占银耳干质量的60％～70％)，据国内外学者研究报道，银耳多糖作为银耳的主要活性成份可分为酸性杂多糖、中性杂多糖(多糖LPS)、酸性低聚糖、胞壁多糖和胞外多糖5大类。
Ukai等(1972)从银耳子实体中分离出3种酸性杂多糖A、B、C。
这3种多糖主要是由木糖、葡萄糖醛酸和甘露糖组成．还有少量葡萄糖及微量岩藻糖，其分子中有典型的乙酰基结构。
Tsubaki等(1977)从银耳的培养液中分离到一种具有高分子量和高分支的酸性杂多糖，主要由D一甘露糖、D一木糖、岩藻糖、D一葡糖醛酸和D一乙酰基构成。
Sone等(1978)从银耳细胞壁中分离到2种胞壁多糖，胞壁外层产生的酸性多糖是由D一葡萄糖醛酸、D一甘露糖和D一木糖组成的．胞壁中的碱不溶多糖由D一葡萄糖、D一葡萄糖醛酸、D一甘露糖和D一木糖组成。
Kakuta等(1979)从银耳细胞深层发酵孢子体中分离到主链结构与子实体多糖相似的酸性杂多糖，仅在支链上稍有些区别：其主链结构都是由糖苷键连接的甘露聚糖，在主链的2，4，6位上连接有葡萄糖、葡萄糖醛酸和木糖等组成的侧链，表明深层培养的银耳孢外多糖和子实体提取的银耳多糖在组分上无明显的区别。
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武汉工商学院生物制药工程技术论文学院：环境与生物工程学院专业：生物工程年级：2012级学生：夏继承学号1204011104 指导教师：乐薇职称: 副教授题目: 水浸提银耳多糖的关键技术研究2015年4月5日目录水浸提银耳多糖的关键技术研究 (1)摘要 (1)Abstract (1)2.实验试剂及仪器 (2)2.1实验试剂 (2)2.2实验仪器 (3)3.实验部分 (3)3.1标准曲线的制作 (3)3.2实验材料预处理 (4)3.3单因素试验 (4)3.3.1料水比单因素试验 (4)3.3.2温度单因素试验 (4)3.3.3pH值比单因素试验 (4)3.3.4时间单因素试验 (4)3.4单因数试验结果与讨论 (4)3.5正交试验 (6)3.6正交试验结果与讨论 (7)3.7验证性试验 (7)4.结论 (7)致谢 (9)水浸提银耳多糖的关键技术研究摘要为充分利用提取银耳多糖，探讨银耳多糖的水浸提的关键技术。
本设计用正交分析法研究了温度、pH值、料水比、时间等四个因数对银耳多糖的水浸提法的效率影响，并获得的最佳的提取条件为温度50℃，pH值12，料水比1:50，时间2h。
关键词：水浸提取；银耳多糖；关键技术Key techniques of water extraction oftremella polysaccharideAbstractTo make full use of tremella polysaccharide extracted, this paper discusses the key technology of tremella polysaccharide water leaching. This design for the four factor of water extraction of tremella polysaccharide extraction efficiency was studied, and obtain the best extraction conditions for temperature is 50 ℃, the pH value is 12, the ratio of material to water is 1:50, time is 2 hKey words: water immersion extraction; Tremella polysaccharide; The key technology11.前言银耳，生长于温带和亚热带地区，是有隔担子菌亚纲银耳科银耳的子实体，又称白木耳[1]。
银耳银耳子实体纯白至乳白色，胶质，半透明，柔软有弹性，由数片至10余片瓣片组成，形似菊花形、牡丹形或绣球形，直径3-15cm。
干后收缩，角质，硬而脆，白色或米黄色。
子实层生瓣片表面。
担子近球形或近卵圆形，纵分隔，10-12×9-10μm。
夏秋季生于阔叶树腐木上。
银耳具有丰富的药用价值，其中银耳多糖具有相当大的研究意义。
银耳多糖对体液免疫有所影响[2] [3]，腹腔注射银耳多糖200mg/kg能使正常小鼠脾脏重量增加。
100mg/ k银耳多糖g能使环磷酰胺处理和正常小鼠经绵羊红细胞(SRBC)免疫所致溶血素生成分别增加112.9%和92. 9%，这表明银耳多糖可改善免疫功能低下小鼠及增强正常小鼠的体液免疫功能[4] [5]，银耳多糖能延长果蝇的平均寿命，使其脂褐质含量降低23. 95 %。
银耳多糖还可降低小鼠心肌组织的脂褐质含量，能抑制脑中MAO-B活性，增强小鼠肝组织和脑中超氧化物歧化酶(SOD)活性，延长小鼠在缺氧情况下的生存期[6] [7]。
此外，银耳多糖还可以通过促进蛋白质及核酸的合成、增加肝微粒体细胞色素P-4 5 0含量、增强机体免疫功能而发挥抗衰老的作用。
周慧萍等[8]报道，银耳多糖可对抗环磷酰胺引起的小鼠骨髓微核率增加，同时还可防止受照射动物的淋巴细胞染色体发生畸变。
基于银耳多糖如此丰富的价值，如何经济高效的提取银耳多糖成为了研究的重要方向。
目前，银耳多糖的提取主要有热水浸提取法、碱提取法以及酶解提取法等[9] [10]。
由于热水提取法最为经济实用，故笔者对热水浸提取法的关键技术（提取温度，料水比，pH值，时间）[11]进行了相关研究。
并取得了相应的数据，经正交实验分析和验证性实验得出结论。
2.实验试剂及仪器2.1实验试剂银耳，于白沙洲青菱寺菜市场购买；发烟硫酸（A. R），天津市百世化工有限公司；苯酚（A. R），天津纵横兴工贸公司化工试剂分公司；葡萄糖（A. R），天津风船化工剂化科技有限公司；氢氧化钠（A. R），天津市天力化学试剂有限公司。
22.2实验仪器DG120型四两装中药材粉碎机，浙江省瑞安市飞达药材器械厂；DK-98-ⅡA 型电热恒温水浴锅，天津泰斯特仪器有限公司；722E型分光光度计，上海光谱仪器有限公司制造；AUY120型电子天平；TD25-WS型离心机，湘麓离心机。
3.实验部分3.1标准曲线的制作精密称取千燥恒重的葡萄糖99.7mg，用水溶解并稀释至100ml，备用。
精密吸取备用液10ml加水稀释至100ml定容，得葡萄糖标准液。
取5只试管，精密吸取标准液0ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，水1ml，0.8ml，0.6ml，0.4ml，0.2ml，再分别各加5%苯酚试剂1.0ml，各管迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。
室温放置30分钟，迅速冷却，用紫外可见分光光度计在490nm处测定吸光度。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程。
表3-1标准曲线C (μg/ml) 0 19.94 39.88 59.82 79.76A 0 0.205 0.377 0.566 0.732图3-1标准曲线33.2实验材料预处理将市场买回的银耳于烘箱50 ℃烘干至衡重，剪刀初碎，用四两装中药材粉碎机DG120型粉碎，16目筛过滤，备用。
3.3单因素试验对料水比，温度，pH值，时间四个单因素进行探索性试验。
3.3.1料水比单因素试验称取1g16目过筛银耳粉，于圆低烧瓶提取，用恒温水浴锅恒温，并辅助回流装置，维持提取体系稳定。
在料水比分别为1:20，1:40，1:60，1:80的情况下，于50℃，pH为12，提取时间为2h的试验条件下，所得提取液3000rmp离心10min，稀释50陪，取1.0ml，加入5%苯酚试剂1.0ml，迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。
室温放置30分钟，迅速冷却，用紫外可见分光光度计在490nm处测定吸光度，查标准曲线算出糖含量。
3.3.2温度单因素试验在温度分别为20℃，40℃，60℃，80℃的情况下，于料水比为1:50，pH为12，提取时间为2h的实验条件下，按照3.3.1的方法试验。
3.3.3pH值比单因素试验在pH分别为8，12，C NaOH=1M，C NaOH=2M，于料水比为1:50，温度为50℃，提取时间为2h的实验条件下，按照3.3.1的方法试验。
3.3.4时间单因素试验在时间分别为0.5h，1.5h，2.5h，3.5h，于料水比为1:50，温度为50℃，pH为12的实验条件下，按照3.3.1的方法试验。
3.4单因数试验结果与讨论4表3-2料水比单因素料水比1:20 1:40 1:60 1:80A 0.411 0.539 0.322 0.209 糖含量(mg) 44.19 115.91 103.87 89.89从表3-2中可以看出料水比在1:40到1:60之间提取效率较佳。
表3-3温度单因素温度℃20 40 60 80A 0.209 0.522 0.509 0.382 糖含量(mg) 56.18 140.32 136.83 102.69从表3-3中可以看出温度在40℃到60℃之间提取效率较佳。
表3-4pH值比单因pH 8 12 C NaOH=1M C NaOH=2MA 0.375 0.534 0.451 0.422 糖含量(mg) 100.81 143.55 121.24 113.44从表3-4中可以看出pH值在12左右提取效率较佳。
表3-5时间单因素时间h 0.5 1.5 2.5 3.5A 0.302 0.511 0.503 0.483 糖含量(mg) 81.18 137.37 135.22 129.845从表3-5中可以看出时间在1.5h到2.5h之间提取效率较佳。
3.5正交试验在单因数试验结果讨论与分析的基础上，设计正交实验，以提取时间料水质量比（A），提取温度（B），pH（C）,提取时间（D）为影响因素，设计四因素三水平的正交试验优化提取工艺。
得到9组试验样品后，按照标准曲线绘制的方法处理，并在490nm处测吸光值,查标准曲线算出糖含量，选取最佳提取工艺。
表3-6正交试验设计因素与水平因素水平A 料水比B 温度℃C pHD 时间h1 40 50 11 1.52 50 60 12 2.03 60 70 13 2.5表3-7正交试验表序号料水比温度pH 时间糖含量/mg1 1 1 1 1 68.602 1 2 2 2 112.043 1 3 3 3 52.904 2 1 2 3 138.715 2 2 3 1 123.666 2 3 1 2 130.657 3 1 3 2 111.618 3 2 1 3 93.559 3 3 2 1 142.58K1 233.55318.92292.80334.84K2 393.01329.25393.33354.30K3 347.74326.13288.17285.16673.6正交试验结果与讨论根据正交表可得出料水比下K1，K2，K3的值K2最大，即料水比中第二个水平（料水比为1:50）为最适条件，同理得最佳的提取温度为50℃，最佳的提取pH 值为12，最佳的提取时间2h 。
3.7验证性试验由正交实验表中K1，K2，K3的比较，得到A2B2C2D2为最佳条件，即料水比1:50，温度60℃，pH=12，时间为2h 。
基于以上最佳条件设计平行的三组实验，即料水比1:50，温度60℃，pH=12，时间为2h 。
提取液离心处理后稀释50倍，490nm 处测定吸光值，查标准曲线，并计算出糖含量。
表3-8验证平行实验试验组 1 2 3 平均 A 0.583 0.594 0.577 0.585 糖含量(μg) 156.72159.68155.11157.174. 结论银耳多糖有丰富的价值，通过单因素试验，正交试验和验证性试验，得到热水浸提法关键技术为：料水比1:50，温度60℃，pH=12，时为2h 。
在此条件下，得到初糖提取率为：由此可见，该试验取得了理想的效果。