建立急性肝损伤模型

一、四氯化碳急性肝损伤模型

[造模原理]

四氯化碳(CCl4 )是无色透明液体,不溶于水.CCl4的毒性主要与其活性代谢产物有关.在肝内CCl4惊NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合,引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化,导致膜结构和功能完整性的破坏,肝细胞损伤坏死.三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上该泵的活性,食Ca2+内流增加,从而引起细胞中毒死亡;三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键,损害线粒体,使还原型辅酶Ⅰ(NADH)及ATP在肝内生成减少,脂肪酸氧化抑制,影响肝脏能量生成障碍,并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积.

[实验动物]

体重18-22g的小鼠、体重150-180的大鼠或体重4-45kg的家兔.

[操作方法]

用CCl4 在不同动物可以多种方法引起急性肝损伤.一般用花生油将CCl4 稀释为所需浓度. CCl4 致急性肝损伤所需剂量和用法见表8-1

[模型评价与注意事项]

1.( CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型,造模方法简单,成功率高,重复性

好，价格低廉。

2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。

3：CCl4是无色澄清的有毒液体，有特殊气味，难溶于水。CCl4 一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度，有时也可与矿物油(如液体石蜡)混合。以植物油为例，10％CCl4的配制方法是：取5ml植物油和5g阿拉伯胶，置于乳钵中研匀，再加lOml纯CCl4。研匀，然后加蒸馏水lO~15ml调成乳状，最后加蒸馏水至lOOml，用前摇匀。

4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是,不同动物个体肝损伤的程度差异较大. 还有研究表明，小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好。

5 CCl4 液体和蒸气可以从呼吸道、皮肤吸收,对人体有一定毒性，操作时应注意防护.

二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型

[造模原理]

D-半乳糖胺(D-galactosamine)引起急性肝损伤的机制尚不完全清楚。D-半乳糖胺本身并无毒性,也不直接损伤肝细胞。它是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂,进入体内后与磷酸尿苷结合,形成磷酸尿苷一半乳糖胺复合物，致使磷酸尿苷耗竭。从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充,细胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。另外，D-半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有关，即己糖代替了中性糖介人细胞膜，导致膜分子结构发生变化。

[模型评价与注意事项]

1.本方法简便,成功率高,重复性好,其病变仅限于肝脏,在引起肝坏死的剂量下,

不引起其他脏器病变,对实验人员安全.因此D-半乳糖胺肝损伤模型是目前

公认的研究病毒性肝炎发病机制和药物治疗效果的较好模型.

2．造成机性肝损伤所需D-半乳糖胺的剂量.因实验动物的状态和实验要求的不同而有差异.一般使用200、400、500或850mg／kg体重，预实验时应摸索确定。

小鼠对D-半乳糖胺不甚敏感,腹腔和皮一卜注射的常用剂量均为800mg／kg体

重。

3．D-半乳糖胺与CCl4所致肝损伤的组织学改变明显不同。CCl4损伤主要表现在肝小叶中央静脉周围区大量肝细胞坏死和出血，脂肪变性十分明显；而D-半乳

糖胺引起的损伤则呈弥漫性、多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4明显，细

胞内有大量PAS染色阳性的毒性颗粒，嗜酸性小体较多见，与人类病毒性肝炎

的肝伤类似.

三、硫代乙酰胺急性肝损伤模型

[造模原理]

硫代乙酰胺(thioacetamide)可干扰RNA从细胞核到细胞质的转运过程，影响蛋白质的合成，也可能损害肝细胞膜，致使细胞的离子环境破坏，导致肝细胞坏死。

[模型评价与注意事项]

1.该模型可作为抗肝损伤药物的常规筛选模型，但目前其应用不如CCl4和D-

半乳糖胺模型普遍。

2．雄性大鼠对硫代乙酰胺比雌性大鼠更敏感。

3.长时间喂饲小剂量硫代乙酰胺可造成慢性肝损伤模型，也可在食物和饮水

中加入一定量硫代乙酰胺，2周后出现肝细胞变性，甚至出现肝硬化或肝癌。

四、刀豆蛋白A急性肝损伤模型

[造模原理]

刀豆蛋白A(concanavalin A，Con A)是一种植物蛋白，被广泛应用的可活化T淋巴细胞的丝裂原。Con A进入小鼠体内后，可引起与人类自身免疫性肝炎相似的肝损害.Con A诱发肝损害主要与下列因素有关：①活化T淋巴细胞、巨噬细胞、促进细胞因子释放.Con A与肝窦具有亲和性，使循环T淋巴细胞汇入肝窦并在局部增殖.肝窦内存在大量巨噬细胞，激活后产生的细胞因子可直接损伤肝细胞。大量活他的T潜巴细胞也存在于脾脏、并产生细胞因子,T 细胞与细胞因子随血流到达肝脏,直接与肝细胞接触或进一步激活巨噬细胞、破坏血管内皮细胞导致肝损伤.释放的细胞因子如肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)等与早期肝细胞损伤有密切相关.②其他如黏附分子、趋化因子、一氧化氮、肝细胞凋亡等也参与了Con A所致肝损伤的发病过程.