药代动力学实验指导2

实习指导

生物药剂学与药物动力学实验

实验一药物在体小肠吸收实验

一、实验目的

1．以磺胺嘧啶为模型药物，掌握大鼠在体肠道灌流法的基本操作和实验方法。

2．掌握药物肠道吸收的机理及吸收速度常数（k a）与吸收半衰期[t1/2(a)]的计算方法。

二、实验原理

药物消化道吸收实验方法可分为体外法（in vitro）、在体法（in situ）和体内法（in v ivo）。在体法由于不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走，能避免胃内容物排出及消化道固有运动等生理影响，是一种较好的研究吸收的方法。但本法一般只限于溶解状态药物，并有可能将其他因素引起药物浓度的变化误认为吸收。

消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。药物服用后，胃肠液中高浓度的药物向细胞内透过，又以相似的方式扩散转运到血液中。这种形式的吸收不消耗能量，扩散的动力来源于膜两侧的浓度差。药物转运的速度可用Fick's（注：最后一稿校，全书一致）扩散定律描述：

式中，为扩散速度；D为扩散系数；A为扩散表面积；k为分配系数；h为膜厚度，C GI为胃肠道中药物浓度；C为血药浓度。在某一药物给予某一个体的吸收过程中，其D、A、

h、k均为定值，可用透过系数P来表示，即。

当药物口服后，吸收进入血液循环中的药物，随血液迅速地分布于全身。故胃肠道中的药物浓度（C GI）远大于血中药物浓度（C），则上式可简化为：

上式表明药物被动转运（简单扩散）透过细胞膜的速度与吸收部位药物浓度的一次方成正比，表明被动转运速度符合表观一级速度过程。若以消化液中药量（X a）的变化速度（）表示透过速度，则：

式中，k a为药物的表观一级吸收速度常数。对上式积分后两边取对数：

式中，X a为t时间消化液中药量；X0为零时间消化液中药量。以lg X a对t作图可得一直线，由此直线斜率即可求出药物的吸收速度常数，并可计算吸收半衰期：

本实验以磺胺嘧啶为模型药物，进行大鼠在体小肠吸收试验。

三、仪器与材料

仪器：蠕动泵、紫外-可见分光光度计、恒温水浴、离心机、注射器、眼科剪刀、眼科镊子、手术刀片等。

材料：0.1%亚硝酸钠、0.5 %氨基磺酸铵、0.1%二盐酸萘乙二胺溶液、1 mol/L盐酸溶液、0.2 mol/L氢氧化钠溶液、10 mg/ml戊巴比妥钠溶液、生理盐水等。

四、实验内容

（一）试剂的配制

1．Krebs-Ringer试剂（pH 7.4）称取氯化钠7.8 g，氯化钾0.35 g，氯化钙0.37 g，碳酸氢钠1.37 g，磷酸二氢钠0.32 g，氯化镁0.02 g，葡萄糖1.4 g，加蒸馏水定容至1000 ml。

2．供试液精密称取磺胺嘧啶（SD）20 mg，酚红20 mg，加少量蒸馏水混悬，加入1%碳酸钠溶液使溶解，再用Krebs-Ringer试剂定容至1000 ml，摇匀。

3．酚红液精密称取酚红20 mg，加少量蒸馏水混悬，加入1%碳酸钠溶液使溶解，再用Krebs-Ringer试剂定容至1000 ml，摇匀。

（二）实验步骤

1．蠕动泵流速的调节打开蠕动泵电源，选择所需工作的方向，按动快、慢档开关，调节流速为5 ml/min和2.5 ml/min。

2．恒温水浴调节将水浴温度调节为37℃±0.5℃。

3．供试液的准备取80 ml供试液加入循环装置的烧瓶中，见图19-1，将烧瓶置恒温水浴中预热至37℃±0.5℃。

4．生理盐水的准备取生理盐水适量，预热至37℃备用。

5．大鼠麻醉取实验前禁食一夜、体重约200 g的雄性大鼠一只，称重；腹腔注射戊巴比妥钠（剂量为40 mg/kg），麻醉后背位固定于固定台上。

6．小肠插管沿腹中线打开腹腔（约3 cm）。自十二指肠上部及回肠下部各剪开一个小口，插入直径约0.3 cm的玻璃管，用线扎紧。

7．洗涤肠管用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗净肠管内容物。

8．做成回路将肠管两端的玻璃管按图19-1所示与胶管连接，作成回路，开动蠕动泵，流速为5 ml/min。

9．取样以5 ml/min的流速循环10 min后，将流速调至2.5 ml/min，立即自供试液烧瓶中取样两份（1 ml和0.5 ml各一份），分别作为SD和酚红零时间样品，另向烧瓶中补加2 ml酚红溶液；其后每隔15 min按同法取样并补加酚红液，取样至120 min（共9次），停止循环。

图19-1 大鼠在体小肠回流实验装置

1.蠕动泵；

2.温度计；

3.水浴；

4.循环液；

5.大鼠

（三）含量测定

1．标准曲线的制备

（1）制备SD标准曲线吸取SD供试液（20 μg/ml）2、4、6、8、10 ml分别置10 ml量瓶中，用Krebs-Ringer试剂定容。再分别吸取上液1 ml置10 ml具塞试管中，加1 mol/L 盐酸溶液5 ml，摇匀；加0.1%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置3 min；加0.5%氨基磺酸铵1 ml，摇匀，放置3 min；再加入0.1%二盐酸萘乙二胺溶液2 ml，摇匀，放置20 min。于紫外-可见分光光度计，在波长550 nm处测定吸收度。以吸收度对浓度回归，得到DS标准曲线方程。

（2）制备酚红标准曲线精密称取酚红25 mg置250 ml量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容；再吸取1、2、3、4、5、6 ml置10 ml量瓶中，用Krebs-Ringer试剂定容。各吸取上液0.5 ml置10 ml具塞试管中，加入0.2 mol/L 氢氧化钠溶液5 ml，摇匀。于紫外-可见分光光度计，在波长555 nm处测定吸收度。以吸收度对浓度回归，得到酚红标准曲线方程。

2．样品测定

（1）SD的测定取样品1 ml置10 ml具塞试管中，加入1 mol/L盐酸溶液5 ml，摇匀；以下按“制备SD标准曲线”项下的方法，自“加0.1%亚硝酸钠溶液1 ml……”起，依法测定吸收度。将吸收度代入标准曲线回归方程，计算出SD浓度，并记录于表19-1。

（2）酚红的测定取样品0.5 ml置10 ml具塞试管中，加入0.2 mol/L氢氧化钠溶液5 ml，摇匀。于紫外-可见分光光度计，在波长555 nm处测定吸收度。将吸收度代入标准曲线回归方程，计算出酚红浓度，并记录于表19-1。

（四）注释

1．小肠吸收过程中，药物被吸收的同时水分也被吸收，导致供试液体积不断减少，所以不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余药量。由于酚红不能被小肠吸收，因此可向供试液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定药物浓度的同时，也测定酚红的浓度，由酚红浓度先计算出不同时间供试液的体积，再根据测定药物的浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。

2．插管时应注意方向，在十二指肠端向下插，回肠端向上插，以构成回路。

3．由于是在体实验，为真实反映体内环境对药物吸收的影响，不需要对肠系膜进行分离，操作时还应注意避免剪破血管。