保健食品原料目录破壁灵芝孢子粉的技术要求及起草说明(2019版)

保健食品原料目录信息表
破壁灵芝孢子粉
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破壁灵芝孢子粉原料技术要求
【来源】
破壁灵芝孢子粉为多孔菌科真菌赤芝（Ganoderma lucidum (Leyss. Ex Fanch) Karst.）的干燥成熟孢子，经灭菌(辐照灭菌和湿热灭菌等灭菌方法），干燥，低温物理破壁，过筛制得。

【感官要求】
应符合表1规定。

表1 感官指标
【鉴别】
显微鉴别：粉末棕褐色，孢壁多破碎，双层，外壁平滑、透明，内壁淡褐色或近褐色。

不得检出菌丝、淀粉粒等异物。

【理化指标】
应符合表2规定。

表2 理化指标
1 破壁率的测定
1.1 仪器与设备
1.1.1 血球计数板：25个中格×16个小格或16个中格×25个小格。

1.1.2 电子分析天平：精度0.1 mg。

1.1.3 超声波清洗器：功率≥45 W。

1.1.4 光学显微镜：放大倍数≥200。

1.1.5 烘箱。

1.2 试剂和溶液
除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯。

1.2.1 实验用水应符合GB/T6682规定的三级水规格。

1.2.2 吐温80。

1.2.3 蔗糖。

1.3 样品制备
分别取同一批次有代表性灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉的样品各至少100 g，分别充分混匀，置于密闭的容器内。

1.4 分析步骤
1.4.1 取适量同一批次的灵芝孢子粉A和破壁灵芝孢子粉B，于烘箱60℃下烘干5 h。

1.4.2 准确称取经烘干的孢子粉A和破壁灵芝孢子粉B，其中m A=0.1000 g，m B=0.1500 g。

1.4.3 分别称取5.0 g经过研磨后过100目筛的蔗糖粉末，分别与孢子粉A、B充分混合至色泽均一。

用蒸馏水分别溶解上述样品，在样品溶液中加0.1 mL吐温80，用蒸馏水定容到100 mL 的容量瓶中，并在室温超声震荡30 min，使孢子充分分散。

1.4.4将待测孢子悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使液体缓缓渗入，多余的液体用吸水纸吸取，进样完成后静置约30 s，然后将血球计数板置于200倍及以上放大倍数的光学显微镜下进行观察计数。

1.4.5 使用25个中格×16个小格的计数板时，应计算出血球计数板4个角上与中央5个中格中含完整灵芝孢子的数目（即以80个小格为一个计数单位）；当使用16个中格×25个小格的计数板时，应计算出血球计数板4个角上的4个中格中含完整灵芝孢子的数目（即以100个小格为一个计数单位）。

如有部分孢子处于中格边线上，计数时应该仅统计位于中格四个边线的其中两个边线的孢子数，每个样品观察计数时应去掉离群较大的值，每个样品有效观察计数不少于3次，然后计算它们的平均数n。

1.5 结果计算
1.5.1 使用25个中格×16个小格的计数板时，每克孢子粉中含完整灵芝孢子数按式（1.1）计算：
（1.1）式中：
N——每克孢子粉含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）；
n——80个小方格内含完整灵芝孢子的总数，单位为个；
V——孢子稀释液的体积，单位为毫升（mL）；
m——样品的质量，单位为克（g）；
400——血球计数板的计数室内共有400个小方格；
10000——血球计数板计数室的容积为0.1mm3，1mL相当于10000个血球计数板计数室的容积。

1.5.2 使用16个中格×25个小格的计数板时，每克孢子粉中含完整灵芝孢子数按式（1.2）计算：
（1.2）式中：
N——每克孢子粉含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）；
n——100个小方格内含完整灵芝孢子的总数，单位为个；
V——孢子稀释液的体积，单位为毫升（mL）；
m——样品的质量，单位为克（g）；
400——血球计数板的计数室内共有400个小方格；
10000——血球计数板计数室的容积为0.1 mm3，1 mL相当于10000个血球计数板计数室的容积。

1.5.3 破壁率按式（1.3）计算：
（1.3）
式中：
X——破壁灵芝孢子粉的破壁率，%；
N B——每克破壁灵芝孢子粉中含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）；
N A——每克灵芝孢子粉中含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）。

【微生物指标】
应符合表3规定。

表3 微生物指标
【标志性成分指标】
应符合表4规定。

表4标志性成分指标
2 多糖的测定
2.1试剂和材料
2.1.1硫酸（分析纯）
2.1.2葡萄糖（分析纯）
2.1.3无水乙醇（分析纯）
2.1.4硫酸蒽酮溶液：精密称取蒽酮0.1 g，加硫酸溶液100 mL使溶解，摇匀，置于棕色瓶
中即得。

2.2 仪器和设备
2.2.1分析天平（感量0.0001g）
2.2.2分光光度计
2.2.3玻璃回流装置
2.2.4电热恒温水浴锅
2.2.5容量瓶25 mL，50 mL容量瓶
2.2.6各规格移液管
2.2.7具塞试管25 mL
2.2.8滤纸（中速定性滤纸）。

2.3标准曲线的制备
2.3.1对照品溶液的制备
取无水葡萄糖对照品适量，精密称定加水制成每1 mL含0.12 mg的溶液，即得。

2.3.2 标准曲线绘制
精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置于10 mL的具塞试管中，各加水至2.0 mL，迅速精密加入硫酸蒽酮溶液6 mL，立即摇匀，放置15 min，立即置冰水浴中冷却15 min，取出，以相应的试剂为空白，在625 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

标准曲线图
2.4供试品溶液的制备
取本品粉末约2 g ，精密称定，置圆底烧瓶中，加水60 mL ，静置1h ，加热回流4 h ，趁热过滤，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤纸和滤渣置圆底烧瓶中，加水60 mL ，加热回流3 h ，趁热过滤，合并滤液，置水浴锅上蒸干，残渣用水5 mL 溶解，边搅拌边缓慢加入乙醇75 mL ，摇匀，在4℃放置12 h ，离心，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至50 mL ，放冷，加水至刻度，摇匀取溶液适量，离心，精密量取上清液3 mL ，置25 mL 量瓶，加水至刻度，摇匀，即得。

2.5测定
精密量取供试品溶液2 mL, 置10 mL 具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“ 迅速精密加入硫酸蒽酮溶液6 mL ”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算即得。

2.6结果计算
82550
23100c W m
⨯⨯⨯=⨯
式中：
W-灵芝多糖的含量，%；
c-从标准曲线上查的样品的多糖浓度，mg/mL；
m-样品质量，mg；
8
2、25
3-表示稀释倍数。

50-水提醇沉后获得的沉淀物经热水溶解定容的体积数值【储存】遮阴、密闭、阴凉处。

【建议产品的剂型】片剂、颗粒剂、硬胶囊
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起草说明
一、起草概况
破壁灵芝孢子粉的《原料目录信息列表》主要是依据2017年保健食品原料目录中标单位河南大学的研究结果、《安徽省中药饮片炮制规范》（2017年版）、浙江省地方标准《龙泉灵芝生产技术规程》、《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版）、《黑龙江中药饮片炮制规范》（2012年版）、《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）、《灵芝孢子粉采收及加工技术规范》（GB/T29344-2012），原料目录研究单位的原料一致性研究以及多次专家论证的基础上形成的。

二、破壁灵芝孢子粉原料目录信息表说明
（一）原料名称
灵芝孢子粉为近年来研究使用的品种，古代本草文献无相关记载，目前在福建省等地方标准中有收载。

根据已批准产品情况的梳理，灵芝孢子粉绝大多数均在破壁后做为原料，结合已批准产品的原料名称和地方标准记载，最终确定为“破壁灵芝孢子粉”。

（二）每日用量
1.用量范围
①我国已批准产品用量
根据对我国已批准的单方破壁灵芝孢子粉保健食品统计结果，每日使用范围约为0.9-5.1 g，平均值2.1g。

②科学文献
根据研究单位对国内国外文献的收集整理，对文献中原料的用量进行折算后，认为破壁灵芝孢子粉增强免疫活性的有效剂量在每日使用量0.99-6.6 g。

从安全性文献调研来看，以成人60 kg计算，每日使用量66g破壁灵芝孢子粉无致突变毒性，14.4g未见明显长期毒性。

③现有国内外法规、规范等规定的用量；
根据《浙江省中药炮制规范》（2015年版）、《安徽省中药饮片炮制规范》（2017年版）、《黑龙江中药饮片炮制规范》（2012年版）、《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）中破壁灵芝孢子粉的每日用量梳理，每日使用的范围为1-6g。

综上所述，对符合要求的文献和已批准产品中的剂量进
行分析，结合目前已有规范中的每日用量，以及专家论证的意见，最终确定破壁灵芝孢子粉每日用量为1-4 g，该剂量涵盖了已批准产品的86.54%。

2.适宜人群
根据2005年我国发布的保健食品功能对应适宜人群名单，已批准的增强免疫力产品适宜人群为“免疫力低下者”。

3.不适宜人群
根据对我国已批准的破壁灵芝孢子粉产品不适宜人群梳理，科学文献确定。

（三）功效
根据对已批准单方破壁灵芝孢子粉保健食品进行统计，声称增强免疫力功能的产品占产品数量的99.21%，并且有科学文献表明破壁灵芝孢子粉对机体的特异性免疫功能有明显的增强作用，对机体的非特异性免疫有明显的增强作用，对免疫抑制小鼠的功能恢复具有正调节作用。

因此确定增强免疫力功能为破壁灵芝孢子粉的功效。

（四）原料技术要求
本次破壁灵芝孢子粉技术要求的制定是依据《安徽省中药饮片炮制规范》（2017年版）、浙江省地方标准《龙泉灵芝生产技术规程》、《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版）、《黑龙江中药饮片炮制规范》（2012年版）、《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）、《灵芝孢子粉采收及加工技术规范》（GB/T29344-2012），以及原料目录研究单位的原料一致性研究。

具体说明如下：
1. 来源
《安徽省中药饮片炮制规范》2017年版、浙江省地方标准《龙泉灵芝生产技术规程》、《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版均收载“灵芝孢子粉”，规定其来源为赤芝的孢子；《黑龙江中药饮片炮制规范》2012年版和《福建省中药饮片炮制规范》2012年版规定灵芝孢子粉为多孔菌科真菌赤芝和紫芝的干燥成熟孢子；《灵芝孢子粉采收及加工技术规范》GB/T29344-2012适用于赤芝和松杉灵芝。

根据原料目录承包单位的研究，从市场收集的灵芝孢子粉样品共25批，仅有1批来源于紫芝，未收集到来源于松杉灵芝的灵芝孢子粉样品；已批准注册的产品中，未见到以松杉灵芝孢子粉为原料的产
品批件。

另外，据药材市场调研及生产企业介绍，目前市场上的灵芝孢子粉均来源于赤芝，紫芝产孢子粉量极少，故规定本标准的使用范围为赤芝。

依据《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版、《福建省中药饮片炮制规范》2012年版确定了灵芝孢子粉的生产工序。

2. 感官指标
根据《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）有关内容制定。

3. 鉴别
根据《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版）和《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）制定。

4. 理化指标
破壁率：依据《浙江省中药炮制规范》2015年版，以及已批准产品中破壁率梳理，确定破壁灵芝孢子粉破壁率不得低于95%。

检测方法根据《灵芝孢子粉采收及加工技术规范》（GB/T29344-2012）。

水分含量，根据《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）、《安徽省中药饮片炮制规范》（2017年版）、《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版）的规定，破壁灵芝孢子粉水分不得超过9%。

同时原料目录研究单位的原料一致性研究，不同批次破壁灵芝孢子粉水分的平均值为7.08%。

综合以上因素，将破壁灵芝孢子粉水分规定为不得超过9.0%。

总灰分含量，依据《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）和《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版），结合原料目录研究单位的原料一致性研究，不同批次破壁灵芝孢子粉样品检测数据，将破壁灵芝孢子粉总灰分规定为不得超过3.0%。

重金属：灵芝孢子粉在破壁过程中，如果采用机械研磨破壁，可能存在过度加工问题，引入重金属镍和铬。

参考福建仙芝楼科技有限公司提供的数据、结合《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版）和《安徽省中药饮片炮制规范》（2017年版）、《食品安全国家标准保健食品》（GB16740-2014），确定重金属指标包括镍、铬、铅、砷、汞和镉的指标。

过氧化值：依据GB2716-2018《食品安全国家标准植物
油》，将破壁灵芝孢子粉规定为以灵芝孢子油计，不得超过0.25 g/100g。

5. 微生物指标
依据现行的GB16740-2014保健食品确定。

6. 标志性成分指标
选择多糖作为灵芝孢子粉的标志性成分，主要原因是科学文献显示多糖作为灵芝孢子粉中主要活性成分，具有提高免疫力等药理活性。

本指标参照《中国药典》2015年版灵芝多糖的检测方法。

根据《福建省中药饮片炮制规范》（2012年版）中规定破壁灵芝孢子粉多糖含量不得少于0.9%，《安徽省中药饮片炮制规范》（2017年版）中规定破壁灵芝孢子粉多糖含量不得少于 1.0%，《浙江省中药饮片炮制规范》（2015年版）中规定破壁灵芝孢子粉多糖含量不得少于0.8%，以及原料目录承包单位对不同批次破壁灵芝孢子粉样品测定数据，确定按干燥品计算，含多糖以无水葡萄糖（C6H12O6）计，不得少于0.9%。

7. 储存
根据原料特点，以及原料供应商提供的资料制定。

8. 建议产品的剂型
目前已批准破壁灵芝孢子粉单方产品的剂型均为固体制剂，因此将片剂、颗粒剂、硬胶囊剂列为可以纳入备案的产品剂型。